本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及rbm4在卵巢透明細(xì)胞癌上的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、卵巢癌(ovarian?cancer，oc)是全球?qū)е屡运劳龅闹饕蛑籟1]。卵巢透明細(xì)胞癌(ovarian?clear?cell?carcinoma,occc)是卵巢癌中的獨(dú)特亞型，與其他人群相比，occc在東亞人群明顯高發(fā)，具有獨(dú)特的臨床病理及分子生物學(xué)特點(diǎn)[2]。occc作為發(fā)病率排名第二的卵巢癌，對(duì)常規(guī)治療不敏感，且有耐藥性，急需對(duì)新型治療進(jìn)行探索[3-5]。我們通過翻譯組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)對(duì)卵巢透明細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制進(jìn)行深入探索，發(fā)現(xiàn)一個(gè)基因rbm4相較于正常組織在occc中有較高的翻譯效率，影響著occc腫瘤細(xì)胞的增殖能力和侵襲性等。這為開發(fā)occc的新型治療方法提供了新的方向。

2、rna結(jié)合基序4(rbm4)屬于rna結(jié)合因子，主要參與mrna的選擇性剪接、翻譯調(diào)控和rna沉默等轉(zhuǎn)錄后rna調(diào)控過程。過往研究表明，rbm4是多種癌癥的潛在腫瘤抑制因子，包括肺癌[6]、乳腺癌[7]、胃癌[8]等。但在卵巢癌中尚未有研究涉及。

3、楊紅梅等人通過對(duì)惡性胃癌與臨近非癌組織rbm4蛋白表達(dá)水平和mrna表達(dá)水平評(píng)估，發(fā)現(xiàn)癌組織水平均顯著降低，并與低生存率相關(guān)[9]。但其未對(duì)rbm4的作用機(jī)制進(jìn)行深入探究，僅僅停留在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性水平的探索。周國(guó)雄等人在研究肝癌血管生成的分子機(jī)制中也發(fā)現(xiàn)rbm4可與rela/p65?mrna直接結(jié)合，并通過招募hnrnpm形成異源三聚體使其穩(wěn)定性增加，以激活nf-kb信號(hào)通路促進(jìn)vegf-a的表達(dá)和分泌，進(jìn)而促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌內(nèi)血管生成，加速其惡性病程[10]。但缺乏對(duì)rbm4本身受翻譯調(diào)控的影響對(duì)疾病產(chǎn)生作用這一角度的考慮。

4、綜上，還沒有研究人員在occc這一亞洲高發(fā)病率高死亡率癌種中發(fā)現(xiàn)和探索rbm4的作用。

5、參考文獻(xiàn)：

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技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一個(gè)目的是在罕見癌種卵巢癌透明細(xì)胞癌亞型(occc)中探究rbm4翻譯效率的改變對(duì)occc發(fā)生發(fā)展的影響，本發(fā)明的另一個(gè)目的是為仍處于常規(guī)治療且高發(fā)耐藥的occc治療的探索提供一種新的方向，本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：

2、第一方面、考察ribo水平基因在正常組織和occc腫瘤組織中表達(dá)差異

3、對(duì)正常組織樣本和occc腫瘤組織樣本中的基因在翻譯水平(ribo)的表達(dá)豐度的分布情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并將兩組中的基因在ribo水平進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果ribo水平基因在正常組織和occc腫瘤組織中表達(dá)不同，初步表明翻譯失調(diào)事件在occc中存在。

4、第二方面、對(duì)occc組織與正常組織進(jìn)行翻譯效率差異基因分析

5、結(jié)果：與正常組織相比，occc腫瘤組織中te上調(diào)的有226個(gè)基因，下調(diào)的有67個(gè)基因；對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行g(shù)o及kegg通路分析結(jié)果顯示：occc腫瘤組織中細(xì)胞生長(zhǎng)、免疫反應(yīng)、胞間連接及激酶活性、mtor信號(hào)通路、mapk信號(hào)通路等上調(diào)，而dna損傷修復(fù)、t細(xì)胞介導(dǎo)的免疫等下調(diào)，提示occc中存在翻譯失調(diào)事件，且這種翻譯失調(diào)可能促進(jìn)occc發(fā)展。

6、第三方面、考察occc組織與正常組織中rbm4的mrna及蛋白表達(dá)情況

7、采用qpcr檢測(cè)，考察正常組織與occc腫瘤組織中rbm4?mrna的表達(dá)水平，結(jié)果：與正常組織相比，occc腫瘤組織中的rbm4的mrna表達(dá)顯著降低；

8、采用western?blot檢測(cè)，考察正常組織與occc腫瘤組織中rbm4蛋白的表達(dá)，結(jié)果：與正常組織相比，occc腫瘤組織中的rbm4的蛋白表達(dá)水平顯著上升。

9、第四方面、考察rbm4對(duì)occc細(xì)胞克隆形成能力的影響

10、結(jié)果：與未敲低rbm4的es2細(xì)胞相比，敲低rbm4的es2細(xì)胞其細(xì)胞克隆形成能力顯著降低；與未敲低rbm4的tov21g細(xì)胞相比，敲低rbm4的tov21g細(xì)胞其細(xì)胞克隆形成能力顯著降低，說明敲低rbm4可抑制occc細(xì)胞增殖及存活能力。

11、第五方面、考察rbm4對(duì)occc細(xì)胞增殖能力的影響

12、結(jié)果：與未敲低rbm4的es2細(xì)胞相比，敲低rbm4的es2細(xì)胞，培養(yǎng)96小時(shí)，其細(xì)胞增殖能力顯著下降，p<0.0001；與未敲低rbm4的tov21g細(xì)胞相比，敲低rbm4的tov21g細(xì)胞，培養(yǎng)72小時(shí)和培養(yǎng)96小時(shí)，其細(xì)胞增殖能力顯著下降，p均小于0.0001，說明rbm4敲低可抑制occc細(xì)胞的增殖能力。

13、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本技術(shù)的有益效果在于：本技術(shù)首次發(fā)現(xiàn)

14、1、翻譯失調(diào)事件在occc中存在，且這種翻譯失調(diào)可能促進(jìn)occc發(fā)展；

15、2、與正常組織相比，occc腫瘤組織中的rbm4的mrna表達(dá)顯著降低；與正常組織相比，occc腫瘤組織中的rbm4的蛋白表達(dá)水平顯著上升；

16、3、敲低rbm4可抑制occc細(xì)胞克隆形成能力；

17、4、敲低rbm4可抑制occc細(xì)胞增殖能力。