[0065] 圖7顯示了CK2的激酶活性在抑制病毒誘導的I型干擾素表達中起關鍵性的作 用。
[0066] 圖8顯示了CK2抑制劑TBB在小鼠成纖維細胞系L929中誘導TBK1的活化和I型 干擾素以及I型干擾素誘導基因或其蛋白的表達。
[0067] 圖9顯示了CK2抑制劑TBB在成纖維細胞系L929中抑制VSV病毒的感染和復制。
[0068] 圖10顯示了CK2抑制劑TBB在人胚胎腎細胞系293中誘導TBK1的活化和I型干 擾素以及I型干擾素誘導基因或其蛋白的表達，并抑制VSV的感染。
[0069] 圖11顯示了HCV感染人肝細胞系Hu7. 5前，CK2抑制劑TBB預處理誘導I型干擾 素和/或I型干擾素誘導基因或其蛋白表達并阻止HCV感染。
[0070] 圖12顯示了HCV感染人肝細胞系Hu7. 5后，CK2抑制劑TBB可以有效地抑制病毒 復制。
[0071] 圖13顯示了CK2抑制劑TBB在人原髓細胞白血病細胞（Humanpromyelocytic leukemiaCells)HL-60中誘導I型干擾素以及I型干擾素誘導基因或其蛋白的表達。
[0072] 圖14顯示了CK2抑制劑TBB在人腎癌細胞0S-RC-2中誘導I型干擾素以及I型 干擾素誘導基因或其蛋白的表達。
[0073] 圖15A-15B顯示了經CK2抑制劑TBB對EV71病毒感染具有預防和治療作用，且二 者在高濃度下的效果更顯著。
[0074] 圖16A-16B顯示CK2抑制劑TBB有效地激活小鼠組織中誘導I型干擾素表達的關 鍵性激酶TBK1，并抑制了HSV病毒的復制、組裝和釋放，而TBB處理組小鼠血液、脾臟中檢測 到的HSV病毒滴度顯著低于對照組。
【具體實施方式】
[0075] 本發明人經過廣泛而深入的研究，首次意外地發現，在復雜的人體免疫機制中， CK2蛋白參與調節多種模式識別受體信號通路，控制TBK1和IRF3的活化，限制I型干擾素 的表達。實驗證明，CK2的抑制能夠有效誘導、促進I型干擾素的產生，并激活多種I型干 擾素誘導基因或其蛋白的表達，從而改善人體的免疫防衛體系，能夠有效阻止I型干擾素 相關疾病，例如與I型干擾素相關的病毒、腫瘤，或治療多發性硬化等疾病，成為一種新的 提高人體免疫、治療病毒感染性疾病和一些非感染性疾病的策略。在此基礎上，完成了本發 明。
[0076] 術語
[0077] 如本文所用，術語"I型干擾素缺乏"指的是在疾病發生前和/或疾病發生后，I型 干擾素的表達量和/或活性的降低。例如，I型干擾素的表達量降低會導致多發性硬化和 腫瘤等疾病的發生，或腫瘤或病毒的免疫逃逸抑制了正常I型干擾素的表達，從而進一步 加重腫瘤或病毒等疾病的發生。
[0078] 如本文所用，術語"I型干擾素缺乏相關疾病"指的是缺乏I型干擾素會導致疾病 的發生和/或加重、且提高I型干擾素的表達量和/或活性后能夠對所述疾病起到治療和 /或預防作用的疾病。通常，本發明所指的"I型干擾素缺乏相關疾病"指的是I型干擾素 缺乏相關的病毒感染性疾病、多發性硬化或惡性腫瘤，應理解，與"I型干擾素缺乏"無關的 病毒性感染疾病或惡性腫瘤并不在本術語范圍內。通常，判斷該疾病（如腫瘤或病毒）是 否與I型干擾素相關可以采用本領域常規技術，例如敲除或抑制I型干擾素后觀察該疾病 的預后（包括細胞生長）是否與I型干擾素的表達相關。
[0079] 酪蛋白激酶2(CK2)
[0080] CK2(又稱酪蛋白激酶2/Casein kinase 2)是普遍存在于真核細胞內的一種絲氨 酸和蘇氨酸激酶，主要以四聚體一一包含兩個催化亞基（α和/或<^ )和兩個調節亞基 β的形式發揮功能。本發明所述的CK2來源于哺乳動物，通常來源于人、小鼠或大鼠。
[0081] -種優選的CK2蛋白的氨基酸序列的Genbank登錄號為ΝΡ_808227· 1 (小鼠） 和ΝΡ_031814. 2 (人）所示，其編碼的核苷酸序列Genbank登錄號為ΝΜ_007788. 3 (小鼠） 和ΝΜ_177559 (人）所示。CK2 基因序列GenbankIDNo. : 12995 (小鼠）和GenbankID No. :1457(人）所示。
[0082]目前，各種研究成果表明，CK2在調節細胞生長、腫瘤發生發展中具有重要作用。在 腫瘤中，CK2的表達和活性往往異常增高。因此，有報道認為而抑制CK2的表達或活性能有 效地抑制腫瘤細胞的生長、并誘導腫瘤細胞的壞死。CK2的抑制劑CX-4945已經進入臨床 II期，并顯示了較好的抗腫瘤效果。然而，CK2抑制劑對腫瘤的治療作用也具有一定的選擇 性表現。由于CK2的作用底物和機制比較多，目前尚無法獲知CK2抑制劑在每一種腫瘤治 療中的具體作用機制，因此，目前也無法獲得該選擇性表現的解決方法。
[0083] 本發明通過實驗首次發現，CK2參與調節多種模式識別受體信號通路，控制TBK1 和IRF3的活化，以此限制I型干擾素的表達。實驗證明，抑制CK2能夠提高I型干擾素及 其誘導基因的表達，并對抑制病毒感染、多發性硬化和腫瘤具有良好的效果。
[0084] 具體地，本發明不僅從理論上揭示CK2是負調節TBK1和I型干擾素表達的關鍵分 子，而且通過實驗證明，利用小分子化合物抑制CK2的激酶活性可以有效地誘導I型干擾素 產生，并由此對病毒感染、多發性硬化和腫瘤細胞的生長起到抑制和殺傷作用。
[0085] 模式識別受體與I型干擾素表達的相關性
[0086] 模式識別受體（PRRs，PatternRecognitionReceptors)通過識別死亡細胞或病 毒分泌的RNA和DNA等"模式分子"（PAMPs，Pathogen-AssociatedMolecularPatterns)， 激活復雜的信號通路，誘導I型干擾素和細胞因子、趨化因子的表達，實施宿主防御和組織 修復等生理功能。
[0087] 位于細胞膜上的Toll樣受體TLR4識別病毒表面的糖蛋白，轉運入內吞體 (endosome);位于內吞體中的TLR3識別病毒雙鏈DNA;TLR3/TLR4在內吞體中通過接頭分 子TRIF和TRAM，隨后活化磷酸激酶TBK1 (TANK-bindingkinasel)，引起下游的轉錄因子 IRF3的活化，從而誘導I型干擾素的表達。
[0088] 病毒產生的RNA或者機體的損傷細胞所釋放的RNA能被細胞質中 的RIG-I樣受體RIG-I(retinoicacidinduciblegene-I)和MDA5(melanoma differentiation-associatedgene5)識別，通過接頭分子MAVS/VISA在線粒體上活化磷 酸激酶TBK1和轉錄因子IRF3,也能誘導I型干擾素的表達。病毒或者損傷細胞釋放的雙鏈 DNA(dsDNA)被細胞質中的多種DNA感受因子（DNAsensors)，如cGAS、DDX41和IFI16等識 另IJ，通過接頭分子STING激活TBK1和IRF3,誘導I型干擾素的表達。這些天然免疫受體也 通過激活轉錄因子NFκB和AP1，誘導IL-6、TNFα和IL-1等促炎癥因子和趨化因子的表 達。
[0089]例如，部分病毒感染或者機體細胞的死亡能引起模式識別受體信號通路激活，從 而誘導I型干擾素IFNα/β表達。IFNα/β與干擾素受體結合后激活Jakl和Tyk2,活化 轉錄因子STAT1，誘導上百種I型干擾素和/或I型干擾素誘導基因或其蛋白的表達，包括 MXl、MX2、Rsad2/Viperine、CXCL10/IP-10等，實施宿主防御的功能，清除入侵的病毒和被感 染的細胞，或者對組織損傷進行修復，清除病變或癌變的細胞。但是在長期進化的過程中， 病毒也獲得拮抗模式識別受體信號通路，抑制I型干擾素表達的能力，以逃避宿主的防御 功能。例如，丙肝病毒HCV編碼的蛋白酶NS3/4A能切割TLR3/4的接頭分子Trif和RIG-I/ MDA5的接頭分子MAVS/VISA，導致它們不能激活下游的TBK1和IRF3。腸道病毒EV71既能 通過蛋白酶2A(pro)切割MAVS，又能通過3C蛋白切割Trif，從而抑制I型干擾素的表達。 水泡病毒VSV的F蛋白和流感病毒的NS1通過抑制RIG-I的功能，也能干擾宿主表達I型干 擾素。人類獲得性免疫缺陷病毒/艾滋病病毒（HIV)在復制過程中，可以利用細胞的Trexl 和SamHDl等分子降解或抑制反轉錄的雙鏈DNA，阻礙I型干擾素的產生。通過這些機制，病 毒對宿主的免疫反應產生逃逸現象，導致了病毒在宿主細胞中的急性或慢性感染，從而使 宿主產生嚴重病變。此外，在多發性硬化和腫瘤形成過程中，機體抑制I型干擾素表達的機 制也可能造成I型干擾素不表達，從而導致疾病的惡化。
[0090]CK2抑制劑
[0091] 如本文所用，術語"本發明活性成分"、"本發明抑制劑"、"本發明CK2抑制劑"可互 換使用，均指能夠降低CK2基因或蛋白表達量和/或活性的物質。
[0092] 本發明實驗證明，CK2抑制劑能夠有效地阻斷CK2的表達量和/或活性，從而誘導 或促進I型干擾素、TBKUIRF3的表達，以達到治療病毒性感染、多發性硬化和腫瘤的目的。
[0093] 可用于本發明的CK2抑制劑沒有特殊限制，可以為任何降低CK2基因或蛋白 表達量和/或活性的物質。代表性的例子包括CK2基因的反義核酸、抑制CK2表達的 microRNA(siRNA)、CK2蛋白的抗體、抑制CK2對TBK1作用的多肽或對CK2表達量和/或活 性具有抑制作用的小分子化合物。
[0094] 通常，根據CK2基因序列，本領域技術人員可以通過常規技術手段設計并合成 具有CK2基因抑制作用的反義核酸或miRNA。而具有CK2抑制功能的小分子化合物則 可從市售或人工合成制備獲得。優選的例子有四溴苯三唑（TBB，購自Tocris)、DMAT( 2_dimethylamin〇-4,5,6,7-tetrabrom〇-lH_benzimidazol， 貝勾自MedChemExpress)、 山奈酸、酪氨酸磷酸化抑制劑AG114(TyrphostinAG114,購自AlexisBiochemicals)、 CX-4945(Silmitasertib，購自Selleck)、四溴肉桂酸、3-[[5-(4_ 甲苯基）噻吩[2,3-d] 嘧啶-4-yl]硫基]丙酸（TTP22,購自Tocris)、CX-5011、鞣花酸（EllagicAcid，購自 MedChemExpress)、3-甲基-1,6, 8-三氫蒽醌（emodin，購自Sigma)、4'，5,7_ 三羥基黃酮 (apigenin，購自上海化成工業發展有限公司）。
[0095] 優選地，本發明CK2抑制劑還包括含有CK2抑制活性的shRNA的表達載體，其可通 過常規方法制備獲得。一種優選的具有CK2抑制活性的shRNA序列如下：
[0096]Forward(SEQIDNO.:1):
[0097] 5 'CCGGCCGAGTTGCTTCTCGATATTTCTCGAGAAATATCGAGAAGCAACTCGGTTTTTG3'
[0098] Reverse(SEQIDNO. :2):
[0099] 5 'AATTCAAAAACCGAGTTGCTTCTCGATATTTCTCGAGAAATATCGAGAAGCAACTCGG3 '
[0100] 可用于本發明的CK2抑制劑的有效治療濃度范圍可以根據本領域常用的有效 濃度篩選方法進行篩選，從而獲得安全有效的施用劑量，通常，CK2抑制劑的有效濃度為 1-1000μM，較佳地為 20-100μM。
[0101] I型干擾素
[0102] I型干擾素包括IFNa和IFN0兩種，它們與細胞表面的干擾素受體結合后激活蛋 白激酶Jakl和Tyk2,隨后活化轉錄因子STAT1或/和STAT2,誘導上百種基因的表達（干 擾素誘導基因，ISGs)，包括]\?1、]\?2、1^^(12/￥丨？641^、0乂(^10/1?-10等。干擾素誘導的這 些基因在抗病毒感染、調節細胞的繁殖和凋亡、血管生成、T細胞免疫反應等過程中起著重 要的生理作用。因此I型干擾素在治療病毒性感染、免疫相關性疾病和腫瘤中的應用得到 了廣泛的研究。
[0103]目前，明確在接受I型干擾素治療后有效的適應癥包括多種病毒感染，例如乙型 和丙型肝炎病毒的感染，多發性硬化和十幾種腫瘤，包括白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、黑色素 瘤、腎細胞瘤、膀胱瘤和卡波西氏肉瘤等。干擾素抑制多發性硬化的機制可能涉及到其對 NLRP3介導的炎癥小體的活性的抑制，而干擾素抑制腫瘤的機制涉及到激活抗腫瘤免疫、抑 制腫瘤細胞的繁殖，誘導腫瘤細胞的凋亡等。因此，本領域技術人