專利名稱：一種制備蕘花酯d的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué) 領(lǐng)域，特別是涉及一種采用超臨界CO2萃取和高速逆流色譜分離技術(shù)制備蕘花酯D的方法。
背景技術(shù)：
堯花酯D (ffikstroelide D)為二職類化合物,分子式C52H8tlO11,分子量881. 2。堯花酯D在天然植物中廣泛存在,主要從瑞香料植物微凹堯花retusa A. Gray樹皮中分離得到。藥理研究表明，蕘花酯D具有細(xì)胞毒活性，在MTT測(cè)試中，對(duì)P388和人肺癌株P(guān)C-6呈細(xì)胞毒活性。目前，國(guó)內(nèi)尚未見大量制備蕘花酯D的方法報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種制備蕘花酯D的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種制備蕘花酯D的方法，其特征在于包括以下步驟取微凹蕘花樹皮粉碎，控制粒徑為40-80目，加入萃取爸中，以體積百分比為90-100%的乙醇水溶液為夾帶劑,采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收乙醇后用庚烷脫脂，再以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，采用高速逆流色譜分離，流分減壓干燥即得蕘花酯D。所述粉碎粒徑為40目，乙醇水溶液體積百分比為95%。所述超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為42-55°C，萃取壓力為25_30MPa，分離釜I溫度為35-45°C，壓力為8-10MPa，分離釜II溫度為28-38°C，壓力為6_7MPa，夾帶劑用量為原料的1-2倍量，萃取時(shí)間為2-4小時(shí)，CO2流量為18-22L/h。所述正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)比例為(1-3) : (4-6) : (2-4) : (2-4)，色譜儀轉(zhuǎn)速為800-900rpm。本發(fā)明優(yōu)勢(shì)在于工藝采用超臨界CO2萃取和高速逆流色譜分離蕘花酯D，分離過程無產(chǎn)品損失，制備周期短，試劑可以回收再利用，制備量大，無污染，克服了傳統(tǒng)柱層析分離過程中樣品死吸附、工藝繁瑣、重現(xiàn)性差等技術(shù)缺陷。
具體實(shí)施例方式 下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。實(shí)施例I :
取微凹蕘花樹皮粉碎過40目，取Ikg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，調(diào)整設(shè)備參數(shù)萃取溫度為55°c，萃取壓力為30MPa，分離釜I溫度為45°C，壓力為9MPa，分離釜II溫度為35°C，壓力為7MPa，通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體20L/h流速萃取，并加入夾帶95%乙醇水溶液I. 2L，動(dòng)態(tài)萃取4h，收集萃取液，回收乙醇，加庚烷脫脂，得到粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按比例為1:5:3:3混合，取上相泵入分離柱，直至分離柱被固定相灌滿，轉(zhuǎn)速為850rpm,同時(shí)將下相以6ml/min的流速泵入,待流動(dòng)相從出液端流出且兩相建立動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速調(diào)節(jié)為2. Oml/min，注入流動(dòng)相溶解的粗提物，紫外檢測(cè)器監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為231nm，收集蕘花酯D流分，連續(xù)分離，合并流分減壓干燥得蕘花酯D，高效液相檢測(cè)，含量94. 0%。實(shí)施例2:
取微凹蕘花樹皮粉碎過40目，取Ikg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，調(diào)整設(shè)備參數(shù)萃取溫度為42°C，萃取壓力為28MPa，分離釜I溫度為40°C，壓力為lOMPa，分離釜
II溫度為32°C，壓力為6. 5MPa，通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體18L/h流速萃取，并夾帶95%乙醇水溶液I. 8L，動(dòng)態(tài)萃取3h，收集萃取液，回收乙醇，加庚烷脫脂，得到粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按比例為3:6:4:4混合，取上相泵入分離柱，直至分離柱被固定相灌滿，轉(zhuǎn)速為800rpm,同時(shí)將下相以10ml/min的流速泵入,待流動(dòng)相從出液端 流出且兩相建立動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速調(diào)節(jié)為3. Oml/min，注入流動(dòng)相溶解的粗提物，紫外檢測(cè)器監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為23 lnm，收集蕘花酯D流分，連續(xù)分離，合并流分減壓干燥得蕘花酯D，高效液相檢測(cè)，含量91. 5%。實(shí)施例3:
取微凹蕘花樹皮粉碎過40目，取Ikg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，調(diào)整設(shè)備參數(shù)萃取溫度為45°C，萃取壓力為25MPa，分離釜I溫度為35°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為28°C，壓力為6MPa，通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體19L/h流速萃取，并夾帶95%乙醇水溶液2L，動(dòng)態(tài)萃取2h，收集萃取液，回收乙醇，加庚烷脫脂，得到粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按比例為2:4:2:3混合，取上相泵入分離柱，直至分離柱被固定相灌滿，轉(zhuǎn)速為900rpm,同時(shí)將下相以5ml/min的流速泵入,待流動(dòng)相從出液端流出且兩相建立動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速調(diào)節(jié)為I. 5ml/min，注入流動(dòng)相溶解的粗提物，紫外檢測(cè)器監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為23 lnm，收集蕘花酯D流分，連續(xù)分離，合并流分減壓干燥得蕘花酯D產(chǎn)品，高效液相檢測(cè)，含量93. 4%。實(shí)施例4:
取微凹蕘花樹皮粉碎過40目，取Ikg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，調(diào)整設(shè)備參數(shù)萃取溫度為55°C，萃取壓力為30MPa，分離釜I溫度為45°C，壓力為9MPa，分離釜II溫度為38°C，壓力為7MPa，通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體20L/h流速萃取，并夾帶95%乙醇水溶液1L，動(dòng)態(tài)萃取4h，收集萃取液，回收乙醇，加庚烷脫脂，得到粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按比例為2:5:3:2混合，取上相泵入分離柱，直至分離柱被固定相灌滿，轉(zhuǎn)速為850rpm,同時(shí)將下相以8ml/min的流速泵入,待流動(dòng)相從出液端流出且兩相建立動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速調(diào)節(jié)為2. Oml/min，注入流動(dòng)相溶解的粗提物，紫外檢測(cè)器監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為231nm，收集蕘花酯D流分，連續(xù)分離，合并流分減壓干燥得蕘花酯D，高效液相檢測(cè)，含量94. 3%。實(shí)施例5:
取微凹蕘花樹皮粉碎過40目，取Ikg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，調(diào)整設(shè)備參數(shù)萃取溫度為50°C，萃取壓力為30MPa，分離釜I溫度為45°C，壓力為9MPa，分離釜II溫度為37°C，壓力為7MPa，通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體22L/h流速萃取，并夾帶75%乙醇水溶液I. 5L，動(dòng)態(tài)萃取4h，收集萃取液，回收乙醇，加庚烷脫脂，得到粗提物。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按比例為3:5:4:4混合，取上相泵入分離柱，直至分離柱被固定相灌滿，轉(zhuǎn)速為850rpm，同時(shí)將下相以10ml/min的流速泵入，待流動(dòng)相從出液端流出且兩相建立動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速調(diào)節(jié)為2. 5ml/min，注入流動(dòng)相溶解的粗提物，紫外檢測(cè)器監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為23 lnm，收集蕘花酯D流分，連續(xù)分離，合并流分減壓干燥得蕘花酯D，高效液相檢測(cè)，含量90. 2%
權(quán)利要求
1.一種制備蕘花酯D的方法，其特征在于包括以下步驟取微凹蕘花樹皮粉碎，控制粒徑為40-80目，加入萃取爸中，以體積百分比為90-100%的乙醇水溶液為夾帶劑,采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收乙醇后用庚烷脫脂，再以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，采用高速逆流色譜分離，流分減壓干燥即得蕘花酯D。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述制備蕘花酯D的方法，其特征在于所述粉碎粒徑為40目，乙醇水溶液體積百分比為95%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述制備蕘花酯D的方法，其特征在于所述超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為42-55°C，萃取壓力為25-30MPa，分離釜I溫度為35_45°C，壓力為8-1OMPa，分離釜II溫度為28-38°C，壓力為6-7MPa，夾帶劑用量為原料的1_2倍量，萃取時(shí)間為2_4小時(shí)，CCV流量為 18-22L/h。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述制備蕘花酯D的方法，其特征在于所述正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統(tǒng)比例為(1-3) :(4-6) :(2-4) :(2-4)，色譜儀轉(zhuǎn)速為800_900rpm。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種制備蕘花酯D的方法。方法步驟如下取微凹蕘花樹皮粉碎，控制粒徑為40-80目，加入萃取釜中，以體積百分比為90-100%的乙醇水溶液為夾帶劑，采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收乙醇后用庚烷脫脂，再以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜分離，流分減壓干燥即得蕘花酯D。采用本發(fā)明制備蕘花酯D產(chǎn)品，具有無污染、收率高的優(yōu)點(diǎn)，適用于蕘花酯D的工業(yè)化制備。
文檔編號(hào)C07D493/20GK102863456SQ20121036666
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司