本發明涉及抗癌化合物組蛋白去乙?；敢种苿╊I域，具體涉及組蛋白去乙?；敢种苿┘捌渲苽浞椒ê蛻?。
背景技術：
：組蛋白脫乙?；?HDAC)是一系列鋅離子依賴性的金屬蛋白酶,它們參與染色體結構的修飾和改造,調節基因轉錄以及腫瘤抑制因子p53熱休克蛋白90和α-微管蛋白等一些重要蛋白質和細胞因子的活性，對腫瘤發生起到關鍵作用，是近年來抗腫瘤藥物設計的新靶點。組蛋白去乙?；敢种苿?histonedeacetylaseinhibitor，HDACI)簡稱HDACIs，是一系列化合物，有干擾與組蛋白去乙酰化酶的功能，能有效抑制癌細胞的增殖，誘導細胞凋亡。組蛋白去乙酰化酶抑制劑通過增加細胞內組蛋白的乙酰化程度，提高p21等基因的表達水平等途徑，抑制腫瘤細胞的增殖，誘導細胞分化和(或)凋亡。組蛋白去乙?；敢种苿┮殉蔀槟[瘤靶向治療的研究新熱點，其對腫瘤細胞遷移、侵襲、轉移的抑制作用和抗腫瘤血管生成作用也被證實，一些在體內和體外活性較好的HDACI已經進入臨床試驗。據不完全統計，世界上7個傳統的主要藥品市場(英、法、美、德、意、西、日)2000年的結直腸癌治療藥的銷售額約為6.3億美元(發病人數43.85萬人)，2010年的銷售額為17億美元(發病 人數53.29萬人)。而根據在在第三屆羅氏腫瘤論壇(2012年)，如今全球結直腸癌每年發病新病例數達94萬，每年近50萬人死于結直腸癌，估計的的結直腸癌治療藥市場至少為30億美元?，F今的結直腸癌發病率明顯增加，以老年群體和女性群體最為明顯。其中一個原因是診斷技術的進步，越來越多的早期患者被確診。用于治療結直腸癌的奧沙利鉑，伊立替康，5-FU/亞葉酸或卡培他濱皆為傳統的細胞毒藥物，急需新型的靶向藥物來進一步提高療效和降低副作用。乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤。根據CA:ACancerJournalforClinicians雜志(2010年影響因子94.262)公布的統計數據顯示，美國2014年有232670例女性罹患乳腺癌，約占女性新發惡性腫瘤的29％，排名女性惡性腫瘤發病率第一位。在我國北京、上海、天津等大城市的統計顯示乳腺癌同樣是我國女性最常見的惡性腫瘤，且發病率呈逐年上升趨勢。乳腺癌發病的年齡分布在東西方國家有所不同，在高發區如北歐、北美等國家，乳腺癌從20歲左右開始出現，在絕經期即45-50歲之前保持快速上升勢頭，大約年齡每增長10-20歲發病率上升1倍，絕經期后上升相對緩慢，75-85歲達到最高。而在亞洲等低發地區，乳腺癌的發病率在絕經后會略下降，一般乳腺癌的發病高峰在45-55歲之間，亞洲人移居西方國家后仍保持這種年齡分布特征。目前臨床上用于治療乳腺癌的細胞毒性化學藥物，如docetaxel和methotrexate，副作用很大；而靶向型新藥，如單克隆抗體類Herceptin和Avastin，價格都非常昂貴。目前臨床上初步研究的新型抑制劑為組蛋白脫乙酰酶抑制劑FK228(又名depsipeptide，romidepsin；注冊商標名Istodax)，其在體外和體內的人細胞系中均表現出抗腫瘤性質。但是很多研究確認FK228對腫瘤細胞的治療導致對血管生成和細胞生長的抑制，同時誘導細胞凋亡、細胞壞死和細胞分化。在2009年，FK228被FDA批準用于皮膚T細胞淋巴瘤和周圍T細胞淋巴瘤的治療。中國專利201310130579.9，公開了一種組蛋白去乙?；敢种苿?，其結構通式為：或其中，R1基團為甲基、乙基、異丙基，R2基團為甲基、正辛基；R3基團為甲基、乙基、異丙基。該化合物主要用于制備預防或治療與組蛋白去乙酰化酶調節異常有關的哺乳動物疾病藥物中，該哺乳動物疾病包括癌癥、神經變性疾病、瘧疾和糖尿??；淋巴癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、白血病和宮頸癌。中國專利201110364545.7，公開了一種組蛋白去乙?；敢种苿┘捌浜铣煞椒ê椭扑幱猛?，其結構通式為：其中，R5基團為氫，C1-12烷基，C3-12環烷基，-O-(C1-12烷基)，-NH-(C1-12烷基)或-S-(C1-12烷基),R1- R8如說明書所定義，這些化合物主要應用于制備預防或者治療與組蛋白去乙?；刚{節異常有關的哺乳動物疾病藥物中。技術實現要素：本發明的目的在于提供一種新型結構的組蛋白去乙?；敢种苿?，其具有更小的毒性，通過作用于癌變細胞的表觀遺傳學過程來恢復腫瘤抑制基因的正常表達、以及促進癌細胞凋亡，來達到抑癌致癌的效果，它們作用于特定的分子靶標，選擇性高，副作用低，且作用機理清晰。本發明的另一個目的在于提供該組蛋白去乙?；敢种苿┑闹苽浞椒?。本發明的第三個目的在于提供該新型結構的組蛋白去乙?；敢种苿┰谥苽渲委熃Y直腸癌以及乳腺癌的藥物組合物中的應用。本發明的目的是這樣實現的：組蛋白去乙酰化酶抑制劑具有如下結構通式或其藥學可接受的鹽，其中，R1和R2分別選自氫、羥基、硅烷氧基或烷氧基，或R1＝R2＝O；R3選自氫、三苯基甲硫基、對甲氧基芐硫基、2-(三甲基硅基)乙硫基、9-芴甲硫基、正戊酰硫基、正己酰硫基、正庚酰硫基或正辛酰硫基；R4選自三苯基甲基、對甲氧基芐基、2-(三甲基硅基)乙基、9-芴甲基、正戊酰基、正己酰基、正庚?；蛘刘；?。本發明提供的組蛋白去乙?；敢种苿?，具有更小的毒性，選擇性高，副作用低，且作用機理清晰，異議較少。進一步地，R1為H，R2為OH，或者R1＝R2＝O。進一步地，R3為正辛酰硫基或H。進一步地，R4為正辛酰基。進一步地，組蛋白去乙?；敢种苿┣灏?01(下文簡稱:CA101)的結構式為：進一步地，組蛋白去乙?；敢种苿┣灏?02(下文簡稱:CA102)的結構式為：進一步地，組蛋白去乙?；敢种苿┣灏?03(下文簡稱:CA103)的結構式為：上述三種化合物CA101-CA103屬于環肽類高效組蛋白去乙?；敢种苿鼈冏饔糜谔囟ǖ姆肿影袠耍x擇性高，副作用低，且作用機理清晰。同時，本發明還提供了制備上述組蛋白去乙酰化酶抑制劑的合成方法，其反應過程如下式：其中，第二步反應中加入的清安101-3(下文簡稱:CA101-3)結構式為優選地，上述合成方法的最后兩步中：第6步反應中，所述肽鍵縮合劑為：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、N,N'-二環己基碳二亞胺、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N'、N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽、3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸、六氟磷 酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基或雙(2-氧代-3-惡唑烷基)次磷酰氯中的任意一種。所述堿為堿性無機鹽或者有機堿。其中，所述堿性無機鹽為：碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸鈉、碳酸鉀或磷酸鉀中的任一種；所述有機堿為三乙胺、二異丙基乙基胺或吡啶中的任意一種。所述有機溶劑為N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或乙腈。第6步反應中，加入的所述正辛酸與反應物的摩爾比為1-10:1；其中所述反應物:正辛酸:肽鍵縮合劑:1-羥基苯并三唑或1-羥基-7-偶氮苯并三氮唑:堿的摩爾比為：1:1-2:1-3:1-3:1-5。第7步反應中，優選地，所述有機溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、二甲基亞砜或丙酮中的任意一種。所述氧化劑為氯鉻酸吡啶鹽、重鉻酸吡啶、2-碘?；郊姿?、戴斯-馬丁氧化劑中的任意一種。所述氧化劑與反應物的摩爾比為1-20:1。該系列合成方法為首次提出的全新方法，利用已知的小分子原料和已知中間體進行合成，用化學合成方法提高了該化合物的產量，降低了生產成本。本發明還提供了所述組蛋白去乙?；敢种苿┰谥苽渲委熃Y直腸癌以及乳腺癌藥品中的應用。本發明還提供了所述組蛋白去乙?；敢种苿┯糜谥委煱┌Y包括但不限于結直腸、乳房；皮膚；淋巴結；宮頸；子宮；胃腸道； 胰腺，肺；卵巢；前列腺；口；腦；頭部和頸部；喉；睪丸；腎；胰腺；骨；脾；肝；膀胱；喉；或鼻腔的癌癥和復發或難治性癌癥。更包括心臟肥大、慢性心力衰竭、炎癥、心血管疾病、血紅蛋白病、地中海貧血癥、鐮狀細胞病、CNS病、自身免疫性疾病、糖尿病、骨質疏松癥、MDS、良性前列腺肥大、口腔粘膜白斑、遺傳相關的代謝失調、感染、Rubens-Taybi、脆性X綜合征或α-1抗胰蛋白酶缺乏，或用于加速傷口愈合、或用于保護毛囊或用作免疫抑制劑。所述藥物還可被用于緩解慢性淋巴細胞性白血病、T-細胞淋巴瘤或皮膚炎癥，特別是牛皮癬、痤瘡或濕疹的功效。一種藥物組合物，所述藥物組合物包含本發明所述的組蛋白去乙?；种苿┘八帉W可接受的載體或稀釋劑。優選地，所述藥物為藥學接受的載體或者稀釋劑，所述載體或稀釋劑為片劑、膠囊、錠劑、糖錠、水、油懸劑、可分散性粉劑、顆粒劑、舌下片劑或注射劑。所述藥物適于經口、直腸、腸胃外、鼻內或經皮給藥或通過吸入或通過栓劑或注射給藥的形式。所述化合物在HDAC介導病癥的治療或預防中同時能夠分別或順序使用其他的HDAC抑制劑、化療或抗腫瘤制劑。與現有技術相比：1.與FK228有相似的主體結構、但包含了新的結構功能基團。2.比FK228具有更小的毒性。3.作用于特定的分子靶標，選擇性高，副作用低，且作用機理清晰，異議較少，尤其對于結直腸癌細胞和乳腺癌細胞具有較強的抑制作用。臨床前測試數據表明，本發明提供的抑制劑能夠獨立用藥，尤其低劑量的CA101、CA102、CA103與現主流治療結腸癌藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)混合用藥向對結直腸癌HCT-116、SW480細胞株的活性都非常強；低劑量的CA101、CA102、CA103與現主流治療乳腺癌藥物紫杉醇(TAX)混合用藥向對乳腺癌MCF-7細胞株的活性都非常強，前景相當看好，顯然具有極大的開發價值。附圖說明圖1為化合物CA101，CA102，CA103和5-FU對腫瘤細胞株HCT116的抗增殖作用曲線圖；圖2為化合物CA101，CA102，CA103和5-FU對腫瘤細胞株SW480的抗增殖作用曲線圖；圖3為化合物CA101，CA102，CA103和TAX對人乳腺癌細胞系MCF-7的抗增殖作用曲線圖。具體實施方式下面通過具體的實施例子對本發明做進一步的詳細描述。以下實施例組蛋白去乙?；敢种苿〤A101、CA102、CA103的合成路線是為了更好地說明闡述本
發明內容，本領域相關的技術人 員可以借助實施例更好地理解和掌握本發明。但是，本發明的保護和權利要求范圍包括且不限于所提供的案例。本發明的實施例中的組蛋白去乙?；敢种苿〤A101、CA102、CA103的合成路線，具體如下：實施例1：合成CA101的具體制備方法包括以下步驟：步驟一，制備CA101-2：CA101-2結構式為：稱取原料CA101-1(2.88g，4.54mmol)，CA101-1的結構式為置于50mL燒瓶中，加入重蒸二氯甲烷25mL，攪拌使固體全部溶解，然后緩慢滴加三氟乙酸5.76mL。滴加完成后室溫下攪拌反應2小時，TLC點板查看反應進度，原料無剩余。將反應液旋干，再用甲苯(5mL×2)溶解后旋干。然后用低壓油泵抽干1小時，得到淺棕色透明半固體，無需進一步純化，直接用于下一步反應。步驟二，制備CA101-4：CA101-4結構式為：將上部反應所得產物溶解于25mL無水N,N-二甲基甲酰胺中，在冰浴條件下依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(1.73g，9.08mmol)、1-羥基苯并三唑(1.23g，9.08mmol)、碳酸氫鈉(2.29g，27.22mmol)和CA101-3(2.89g，5.45mmol)，CA101-3的結構式為繼續攪拌10分鐘后移除冰浴，室溫下攪拌反應16小時。TLC點板查看反應進度，原料無剩余后將反應液倒入100mL蒸餾水中，攪拌10分鐘后用乙酸乙酯萃取(40mL×4)。將有機相合并，飽和食鹽水洗滌后用無水硫酸鈉干燥，拌粗硅膠旋干，過柱分離，PE/EA＝2/1洗脫。得白色固體(CA101-4)3.54g，兩步總產率為74.4％。CA101-4核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.49–7.37(m,12H),7.35–7.26(m,13H),7.23(dt,J＝14.6,7.3Hz,6H),7.00(d,J＝7.5Hz,1H),6.11(t,J＝7.8Hz,2H),5.54–5.42(m,1H),5.36(dd,J＝15.4,6.3Hz,1H),4.36(s,1H),4.23(dd,J＝11.9,8.4Hz,1H),4.07(dd,J＝13.4,6.9Hz,1H),4.02–3.91(m,2H),3.66(s,3H),3.34(s,1H),3.15–2.99(m,1H),2.65(ddd,J＝22.3,14.6,4.7Hz,2H),2.53–2.32(m,3H),2.29–2.21(m,3H),2.09(dd,J＝13.7,6.3Hz,2H),1.91(d,J＝3.4Hz,1H),1.73(s,3H),1.29(dd,J ＝14.1,6.6Hz,7H),1.20–1.11(m,1H),0.90(tt,J＝17.2,3.4Hz,10H)。步驟三，制備CA101-5：CA101-5的結構式為：稱取原料CA101-4(3.50g，3.33mmol)溶解于四氫呋喃(25mL)中，在冰浴條件下伴隨攪拌緩慢滴加氫氧化鋰溶液(0.5mol/L，33.3mL，16.7mmol)，滴加完畢后攪拌10分鐘，然后移走冰浴，室溫下攪拌反應2小時，TLC點板查看反應進度，確認原料無剩余后將反應液旋干，加入甲苯再旋干兩次，油泵抽干1小時，得到淺棕色透明半固體。無需進一步純化，直接用于下一步反應。步驟四，制備CA101-6：CA101-6的結構式為：將上一步所得產物CA101-5溶解于重蒸二氯甲烷(300mL)，置于500mL恒壓滴液漏斗中；另取一個5000mL圓底燒瓶一個，放入磁力攪拌子，加入2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(2.27g,6.6mmol)、4-二甲氨基吡啶(1.6g,13.32mmol)后用重蒸二氯甲烷3000mL溶解，將CA101-5二氯甲烷溶液伴隨攪拌緩慢滴加到上述溶液中，滴加時 間8小時。滴加完成后室溫攪拌反應16h，將反應液旋干濃縮，拌粗硅膠旋干后，柱層析分離，洗脫液配比為PE/EA＝1/1到DCM/MeOH＝50/1。收集含有產物的洗脫液，濃縮旋干后得到米白色泡沫狀固體(CA101-6)421mg，兩步總產率16％。CA101-6核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.45–7.34(m,13H),7.31–7.27(m,10H),7.24–7.16(m,7H),7.03–6.91(m,2H),5.99(d,J＝6.6Hz,1H),5.67–5.56(m,1H),5.55–5.45(m,1H),5.34(dd,J＝15.4,6.7Hz,1H),4.36–4.24(m,1H),4.21(dd,J＝13.7,7.3Hz,1H),3.48(d,J＝33.1Hz,2H),3.25–3.07(m,2H),2.62–2.31(m,5H),2.24–2.14(m,2H),2.11–1.97(m,2H),1.86–1.70(m,2H),1.60–1.49(m,1H),1.39–1.28(m,5H),1.19–1.07(m,1H),0.89–0.91(m,9H)。步驟五，制備CA101-7：CA101-7的結構式為：稱取原料CA101-6(406mg，0.398mmol)溶解于二氯甲烷(5mL)中，在冰浴條件下伴隨攪拌依次加入三乙基硅烷(334mg，1.99mmol，459μL)、三氟乙酸(453mg，3.98mmol，296μL)，繼續攪拌10分鐘后移走冰浴，室溫攪拌反應2小時后原料反應完全，將反應液旋干，再加入適量甲苯再次旋干兩次，所得混合物用二氯甲烷溶解后 拌粗硅膠旋干，柱層析分離，用PE/EA＝2/1洗脫液洗出第一組分后換洗脫液為DCM/MeOH＝10/1，得到白色固體(CA101-7)143mg，產率67.5％，由于產物不穩定，直接投下一步。步驟六，制備CA101：取原料CA101-7(141mg，0.26mmol)，溶解于5mL無水N,N-二甲基甲酰胺中，冰浴條件下依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(200mg，1.04mmol)、1-羥基苯并三唑(141mg，1.04mmol)和碳酸氫鈉(175mg，2.08mmol)，攪拌10分鐘后緩慢滴加正辛酸(93.6mg，103μL，0.65mmol)，加料完成后冰浴攪拌10分鐘，然后室溫攪拌反應16小時。然后冰浴下加入10mL蒸餾水，用EA萃取(5mL×5)，合并有機相，用飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾后拌粗硅膠旋干，柱層析分離純化，PE/EA＝2/1洗脫，得無色油狀產物(CA101)75mg，產率36.8％。CA101核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.48(d,J＝7.4Hz,1H),7.11(d,J＝8.1Hz,1H),6.21(d,J＝6.1Hz,1H),5.85–5.65(m,2H),5.48(dd,J＝15.5,6.7Hz,1H),4.55(s,1H),4.36(s,1H),4.24(dd,J＝13.8,5.7Hz,1H),3.45(t,J＝6.3Hz,2H),3.27(s,1H),2.91(dd,J＝15.4,8.2Hz,2H),2.67–2.48(m,7H),2.31(dd,J＝12.8,5.9Hz,2H),2.00(d,J＝5.9Hz,1H),1.66(dd,J＝14.5,7.3Hz,5H),1.32(dd,J＝40.3,8.4Hz,25H),1.04–0.83(m,15H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ199.52,172.72,172.23,170.25,170.02,132.38,128.29,70.87,67.57,58.83,54.74,44.13,44.04,40.61,37.91,35.29,32.29,31.59,31.57,31.52,29.67,28.94,28.89,28.87, 27.87,27.79,27.00,25.68,25.65,22.56,22.30,15.25,14.02,13.83,11.41。實施例2：合成CA102的具體制備方法包括以下步驟：步驟一，制備CA102-2：CA102-2結構式為：取CA102-1(2.4g，8.2mmol)，其結構式為溶于24mL二氯甲烷中，然后逐滴加入三氟乙酸4.8mL，10分鐘內加完。室溫攪拌2小時后，旋干，并用甲苯(5mL×2)帶兩遍。油泵1小時抽干后直接投下一步。步驟二制備CA102-3：CA102-3的結構式為：取CA102-2(1.57g，8.2mmol)溶于30mL無水N,N-二甲基甲酰胺中，0℃下，依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(3.1g，16.4mmol)、1-羥基苯并三唑(2.1g，16.4mmol)和碳酸氫鈉(4.2g，49.2mmol)，然后加入N-Boc-丙氨酸(1.87g，9.8mmol)，0℃攪拌10分鐘，室溫攪拌12小時。然后加入100mL 蒸餾水、40mL乙酸乙酯，室溫攪拌10分鐘后，分液，水相用乙酸乙酯(40mL×3)萃取，合并有機相，依次用水(40mL)、飽和食鹽水(40mL)洗。有機相用無水硫酸鈉干燥。旋干過柱(PE/EA＝4/1-2/1),得產物(CA102-3)3g，淡黃色油狀物，產率80％。CA102-3核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.41(s,1H),5.06(d,J＝6.8Hz,1H),4.09(tt,J＝11.3,5.7Hz,1H),4.00–3.89(m,2H),3.67(s,3H),3.44(d,J＝4.6Hz,1H),2.89(d,J＝31.2Hz,1H),2.54(dd,J＝16.5,2.2Hz,1H),2.44(dd,J＝16.5,8.5Hz,1H),2.10(d,J＝35.5Hz,1H),1.92(dt,J＝6.7,4.6Hz,1H),1.41(s,9H),1.33(dd,J＝15.8,7.1Hz,3H),1.28–1.21(m,1H),1.12(tt,J＝14.7,7.4Hz,1H),0.95–0.76(m,6H)。步驟三，制備CA102-4：該步驟的制備方法和CA101-2的制備方法相同，添加同樣的反應溶劑得到CA102-4。CA102-4的結構式為：步驟四，制備CA102-5：該步驟的制備方法和CA101-4的制備方法相同，添加同樣的反應溶劑得到CA102-5。CA102-5的結構式為：CA102-5核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.42(d,J＝7.6Hz,6H),7.37–7.26(m,6H),7.22(dd,J＝14.2,7.0Hz,3H),6.45(d,J＝9.8Hz,1H),6.28(d,J＝7.5Hz,1H),5.68–5.56(m,1H),5.45(dd,J＝15.0,5.9Hz,1H),4.39(ddd,J＝20.9,16.0,10.1Hz,3H),4.01(dd,J＝13.6,9.9Hz,2H),3.72(s,1H),2.94(d,J＝29.0Hz,2H),2.67–2.40(m,5H),2.32–2.18(m,2H),2.17–2.07(m,3H),1.36(d,J＝7.0Hz,9H),0.91(t,J＝6.9Hz,10H)。步驟五，制備CA102-6：該步驟的制備方法和CA101-5的制備方法相同，添加同樣的反應溶劑得到CA102-6。CA102-6的結構式為：步驟六，制備CA102-7：該步驟的制備方法和CA101-6的制備方法相同，添加同樣的反應溶劑得到CA102-7。CA102-7的結構式為：CA102-7核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.42(d,J＝7.4Hz,6H),7.31(d,J＝7.3Hz,6H),7.23(t,J＝7.2Hz,3H),5.75–5.58(m,1H),5.50(dd,J＝13.4,6.6Hz,1H),5.40(dd,J＝15.4,6.6Hz,1H),4.38(dd,J＝14.5,7.5Hz,1H),4.26–4.10(m,1H),3.96(s,1H),3.88(s,1H),3.77(t,J＝6.3Hz,1H),2.59–2.32(m,3H),2.29–2.15(m,2H),2.07(d,J＝3.8Hz,2H),1.92–1.85(m,1H),1.78(d,J＝6.1Hz,1H),1.65(dd,J＝18.2,7.3Hz,3H),1.48–1.22(m,10H),0.92(t,J＝6.0Hz,9H)。步驟七，制備CA102-8：該步驟的制備方法和CA101-7的制備方法相同，添加同樣的反應溶劑得到CA102-8。CA102-8的結構式為：CA102-8核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.49(d,J＝9.0Hz,1H),5.76(dd,J＝13.8,7.1Hz,1H),5.64–5.47(m,2H),4.48–4.28(m,1H),4.14(d,J＝6.8Hz,1H),3.97(d,J＝26.3Hz,2H),2.64–2.51(m,4H),2.45–2.32(m,3H),1.91–1.72(m,3H),1.63(d,J＝7.1Hz,3H),1.46–1.20(m,12H),1.04–0.82(m,9H)。步驟八，制備CA102：取CA102-8(190mg，0.38mmol)溶于5mL無水N,N-二甲基甲酰胺中，0℃下，依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(146mg， 0.72mmol)、1-羥基苯并三唑(103mg，0.72mmol)、碳酸氫鈉(191.5mg，2.28mmol)，然后加入辛酸(67μL，0.42mmol)，0℃攪拌10分鐘，室溫攪拌12小時。然后加入20mL水、5mL乙酸乙酯，室溫攪拌10分鐘后，分液，水相用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有機相，依次用水10mL、飽和食鹽水10mL洗，用無水硫酸鈉干燥。旋干過柱(DCM/MeOH＝100/1-40/1)，得產物(CA102)150mg，白色固體，產率63.3％。CA102核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),7.64(d,J＝10.1Hz,1H),6.52(s,1H),5.86–5.68(m,1H),5.54(dt,J＝9.5,6.2Hz,2H),4.42(dd,J＝14.5,7.8Hz,1H),4.16(s,1H),3.97–3.76(m,2H),3.49(s,1H),2.92(t,J＝7.4Hz,2H),2.62–2.53(m,2H),2.52–2.37(m,3H),2.33(dt,J＝7.3,6.7Hz,3H),1.75(dd,J＝12.2,6.0Hz,2H),1.66(t,J＝8.2Hz,5H),1.45–1.17(m,15H),1.04–0.77(m,12H)。13CNMR(101MHz,CDCl3)δ199.74,174.20,174.02,171.09,169.68,131.71,128.92,71.92,67.79,56.47,53.30,44.15,42.24,37.93,34.50,32.92,32.31,31.62,28.91,28.90,27.89,27.68,26.64,25.68,22.58,22.32,16.01,14.47,14.05,13.91,11.26。實施例3：合成CA103的具體制備方法包括以下步驟：取CA102(20mg，0.03mmol)溶于1mL重蒸二氯甲烷中，氮氣保護。0℃冰浴下，加入戴斯-馬丁氧化劑(DMP)(34mg，0.075mmol)，0℃攪拌10分鐘，室溫攪拌12小時。TLC監測反應完畢后，降溫至0℃，加入1mL二氯甲烷稀釋，然后依次加入飽和碳酸氫鈉1mL及1M硫代硫酸鈉1mL，攪拌 10分鐘后分液，水相用二氯甲烷(3mL×3)萃取，合并有機相，用飽和食鹽水3mL洗，無水硫酸鈉干燥。旋干過柱(DCM/MeOH＝50/1)，得無色油狀物(CA103)，15mg，產率75.4％。CA103核磁數據：1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(d,J＝8.4Hz,1H),7.60(d,J＝7.1Hz,1H),7.01(d,J＝6.7Hz,1H),5.76–5.57(m,2H),5.42(dd,J＝15.4,6.5Hz,1H),4.37–4.10(m,3H),3.45(dd,J＝67.4,16.6Hz,2H),2.81(t,J＝7.2Hz,2H),2.47(dd,J＝14.8,7.7Hz,2H),2.22(dd,J＝13.6,6.7Hz,4H),1.61–1.54(m,3H),1.44(t,J＝12.9Hz,3H),1.20(d,J＝9.2Hz,15H),0.92–0.73(m,12H)。13CNMR(101MHz,CDCl3)δ201.80,199.40,173.05,172.92,170.52,166.75,132.44,128.35,72.35,62.18,54.81,51.40,45.46,44.12,41.55,34.13,32.19,31.59,30.72,29.67,28.88,28.05,27.78,27.03,25.63,22.55,22.34,16.52,14.98,14.02,13.89,11.52。體外活性驗證試驗：1.結直腸癌細胞株(HCT-116、SW480)體外活性試驗：1)試劑配制：2)培養基的配制：細胞株培養基SW480DMEM+10％FBSHCT116DMEM+10％FBS3)化合物的制備：用DMSO稀釋CA101，CA102，CA103和5-FU，使其最終濃度為10mM，其中5-FU(5-氟尿嘧啶)是結直腸癌臨床一線藥物。CA101，CA102，CA103和5-FU，4個候選化合物作用終濃度從100μM至0μM，4倍梯度稀釋，共10或12個濃度點。4)細胞培養：收集對數生長期細胞，計數，用完全培養基重新懸浮細胞，調整細胞濃度至合適濃度，接種96孔板，每孔接種100μl細胞懸液細胞在37℃，100％相對濕度，5％CO2培養箱中孵育24小時。5)IC50實驗：收集對數生長期細胞，計數，用完全培養基重新懸浮細胞，調整細胞濃度至合適濃度(依照細胞密度優化試驗結果確定)，接種96孔板，每孔加100μl細胞懸液。細胞在37℃，100％相對濕度，5％CO2培養箱中孵育24小時后，用DMSO稀釋待測化合物，4倍梯度稀釋8或10次；再將稀釋后的化合物用培養基稀釋20倍，共9或11個點，按25μl/孔加入細胞，化合物終濃度從100μM至0μM，4倍稀釋，共10或12個濃度點。細胞置于37℃，100％相對濕度，5％CO2培養箱中孵育72小時。吸棄培養基，加入含10％CCK-8的完全培養基置于37℃培養箱中孵育2-6小時。輕輕震蕩后在SpectraMaxM5MicroplateReader上測定450nm波長處的吸光度，以650nm處吸光度作為參比，計算抑制率。6)數據處理：按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率：腫瘤細胞生長抑制率％＝[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100％；As:樣品的OA(細胞+CCK-8+待測化合物)；Ac:陰性對照的OA(細胞+CCK-8+DMSO)；Ab:陽性對照的OA(培養基+CCK-8+DMSO)；采用軟件GraphpadPrism5擬合IC50曲線并計算出IC50值。7)實驗結果：本實驗測試了4個候選化合物(CA101，CA102，CA103和5-FU)對2個人源腫瘤細胞株(HCT116和SW480)的抗增值作用?；衔镒饔媒K濃度從100μM至0μM，4倍梯度稀釋，共10或12個點，實驗結果如下表1和表2所示：表1和表2分別為各化合物分別在不同細胞株的IC50值，曲線圖分別見附圖1和2。結果：其中3個化合物CA101，CA102和CA103對這2個腫瘤細胞株(HCT-116和SW480)的增殖均具有較強的抑制作用，IC50值在1-50nM之間。表1化合物在腫瘤細胞株HCT11中的IC50值化合物5-FUCA101CA102CA103IC50值(nM)13004.9472.73945.34表2化合物在腫瘤細胞株SW480中的IC50值化合物5-FUCA101CA102CA103IC50值(nM)95906.63110.4243.632.乳腺癌細胞株(MCF-7)的體外活性試驗：1)試劑配制：2)培養基的配制：細胞株培養基MCF-71640培養液+10％FBS3)化合物的制備：用DMSO稀釋CA101，CA102，CA103和TAX，使終濃度為10mM。其中TAX(紫杉醇)是治療乳腺癌的一線藥物。CA101，CA102，CA103和TAX，4個候選化合物作用終濃度從10μM至1nM，10倍梯度稀釋，共5個濃度點。4)細胞培養：收集對數生長期細胞，計數，用完全培養基重新懸浮細胞，調整細胞濃度至合適濃度，接種96孔板，每孔接種100μl細胞懸液細胞在37℃，100％相對濕度，5％CO2培養箱中孵育24小時。5)IC50實驗：收集對數生長期細胞，計數，用完全培養基重新懸浮細胞，調整細胞濃度至合適濃度(依照細胞密度優化試驗結果確定)，接種96孔板，每孔加100μl細胞懸液。細胞在37℃，100％相對濕度，5％CO2培養箱中孵育24小時后，用DMSO稀釋待測化合物，4倍梯度稀釋8或10次；再將稀釋后的化合物用培養基稀釋20倍，共5個點，按25μl/孔加入細胞，化合物終濃度從10μM至1nM，10倍稀釋，共5個濃度點。細胞置于37℃，100％相對濕度，5％CO2培養箱中孵育72小時。吸棄培養基，加入含10％CCK-8的完全培養基置于37℃培養箱中孵育2-6小時。輕輕震蕩后在SpectraMaxM5MicroplateReader上測定450nm波長處的吸光度，以650nm處吸光度作為參比，計算抑制率。6)數據處理：按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率：腫瘤細胞生長抑制率％＝[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100％。As:樣品的OA(細胞+CCK-8+待測化合物)；Ac:陰性對照的OA(細胞+CCK-8+DMSO)；Ab:陽性對照的OA(培養基+CCK-8+DMSO)；采用軟件GraphpadPrism5擬合IC50曲線并計算出IC50值。7)實驗結果：本實驗測試了4個候選化合物(CA101，CA102，CA103和TAX)對人乳腺癌細胞系MCF-7的抗增值作用?；衔镒饔媒K濃度從10μM至1nM，10倍梯度稀釋，共5個點，實驗結果如下表3所示：表3為上述各化合物分別在不同細胞株的IC50值，曲線圖見附圖3。結果：相關文獻報道藥物作用48h后紫杉醇對MCF-7的IC50為0.4μmol/L，與本實驗測得的0.211μmol/L的結果相近。其中3個化合物CA101，CA102和CA103對這1個腫瘤細胞株MCF-7的增殖均具有較強的抑制作用,IC50值在10-500nM之間。表3化合物在乳腺癌細胞系MCF-7中的IC50值化合物TAXCA101CA102CA103IC50值(nM)211.1335.272335.99919.643以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明，對于本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。當前第1頁1 2 3