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一種敲除arcA提高克雷伯氏菌1,3?丙二醇產量的方法與流程

文檔序號:11125948閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種敲除arcA基因提高克雷伯氏菌1,3-丙二醇產量的方法,其特征在于,是將克雷伯氏菌屬(Klebsiella)細菌的TCA循環抑制蛋白基因(arcA)敲除實現微氧條件下TCA循環的正常運作,得到可實現微氧條件下1,3-丙二醇高效積累的產1,3-丙二醇克雷伯氏菌基因工程菌。

2.按照權利要求1所述的方法,其特征在于,利用Red重組系統敲除了對于TCA循環有重要調控作用的arcA基因,包括以下步驟:

A.以pKD13為模板,設計引物構建出所敲除基因的打靶片段。

B.將A中所克隆的片段電轉入含有氯霉素抗性的pKD46質粒的克雷伯氏菌中,并篩選出陽性菌。

C.消除B中陽性菌株中的pKD46質粒,然后電轉入pCP20質粒,進行卡那霉素抗性標記的剔除,并PCR篩選出陽性菌株,此菌株即為缺失了arcA基因的克雷伯氏菌。

3.根據權利要求1、2所述的方法構建得到的克雷伯氏菌基因工程菌。

4.權利要求3所述的敲除arcA基因的克雷伯氏菌基因工程菌在生產1,3-丙二醇中的應用。

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