1.一種敲除豬胚胎p66shc基因的方法，其特征在于：所述方法包括以下操作步驟，
（1）設計 Oligo DNA 序列
在p66shc基因的表達 DNA 區域中設計一對 20bp 左右的 oligo DNA，可以通過在線工具設計；按照得分優先選擇1-3對的Oligo合成；另外，需在位點上下游各設計一條引物，用于后續PCR或測序檢測陽性克隆，引物能擴增約300bp的DNA片段，上游引物距突變位點約100bp，下游引物距突變位點約200bp；將設計后的序列送到值得信賴的公司合成，純化級別為PAGE，準備進行下面的實驗；
（2）Oligo的連接
將合成的 2 條單鏈 Oligo DNA 稀釋至 1μg/μl后，退火形成雙鏈 DNA，再與載體連接；pGLKO（Genloci公司購買）是線性載體，無需酶切處理，可直接用于 T4 DNA連接酶連接反應；
（3）構建好的質粒轉化與擴增
將上述產物按照常規分子克隆技術方法轉化到大腸桿菌感受態細胞，篩選陽性克隆，挑取陽性克隆擴增培養后，大量提取質粒，得到構建好的包含敲除p66shc基因的CRISPR-Cas9系統的表達質粒，保存備用；
（4）質粒轉染細胞驗證敲除效率
首先解凍培養293T細胞，待生長培養傳代2次后，進行轉染操作；共轉染前提，稀釋至質粒濃度為1μg/μl，轉染前48小時，接種細胞至備用生產慢病毒的孔板或是培養皿中，轉染時，細胞匯合度約為70%-80%為最佳感染狀態，活力≥95%以上；以轉染時間為起始點，一次收獲時間為24h后收獲上清，保存于4℃下，如長期保存則在-84℃下；接種適量靶細胞，加入上述收集的含有質粒的病毒顆粒溶液，混勻；將靶細胞有限稀釋后，分到96孔板中進行單克隆培養，待細胞長好后，取 1000 個左右的細胞，提基因組；然后使用T7核酸內切酶初步篩選陽性克隆，并且對篩選后的陽性克隆進行測序分析，并對堿基缺失結果進行比對分析，從而可以驗證該p66shc基因CRISPR-Cas9系統的有效性；
（5）p66shc基因的CRISPR-Cas9系統構建
設計好上述質粒上Cas9的引物，試劑盒mMESSAGEmMACHINE Ultra Kit (Ambion)其擴增上述得到的Cas9 mRNA，同時用設計好的引物利用試劑盒MEGAshortscript (Ambion)擴增gRNA的序列；得到PCR產物后分別用1.5% 凝膠進行電泳，辨認其得到的片段大小；得到p66shc基因的CRISPR-Cas9系統mRNA 后，保存備用；
（6）豬p66shc基因敲除胚胎生產
把構建好的豬胚胎，在受精后17h進行胞質注射上述p66shc基因的CRISPR-Cas9系統mRNA，按照濃度為10ng/ul，其每個胚胎注射的總量為3 ul；在培養后，利用后續的系統檢驗該基因的敲除效果，評價其敲除效率；
（7）p66shc基因敲除結果驗證
PCR克隆囊胚后的p66shc基因DNA序列（一般產物在0.5-1K為好），其引物設計注意得到的產物的突變位點不要位于中間比較好，利用T7內切酶酶切后，凝膠電泳分析，確認其是不是已經敲除；同時，還可以結合利用PCR產物測序后對比分析得出結論。