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一種植物乳桿菌凍干粉的制備方法與流程

文檔序號:12096968閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種植物乳桿菌凍干粉的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

1)菌種劃線培養:將植物乳桿菌菌粉用無菌水稀釋后,于MC培養基上分區劃線,劃線結束后,平皿倒置,35℃培養箱恒溫培養40~72小時;

2)一級純化培養:挑取平皿上溶鈣圈較大的單菌落接種至裝有MRS液體培養基的試管中,試管密封,35℃培養箱恒溫靜置培養15~20小時;

3)二級純化培養:按3~5%接種量,將一級純化培養好的菌懸液接種至裝有MRS液體培養基的三角瓶中,三角瓶密封,35℃培養箱恒溫靜置培養15~20小時;

4)菌種保存:對二級純化培養得到的菌懸液進行離心,12000rpm離心10分鐘后得到菌泥,將菌泥溶解于混合液中,得菌泥混合液,將菌泥混合液分裝在已滅菌的凍存管中,封口膜密封,凍存于-40~-80℃低溫冰箱內,得植物乳桿菌菌泥凍存管,備用;

5)凍存菌種復蘇:取存于低溫冰箱內的植物乳桿菌菌泥凍存管,立即放入35℃水浴鍋內進行菌種復蘇,30~45s,至凍存管內液體全部融化;

6)菌種一級培養:將復蘇好的1~2ml菌泥混合液直接接種至裝有基礎培養基的三角瓶A中,三角瓶密封,35℃培養箱恒溫靜置培養16~24小時;

7)菌種二級培養:按照2~6%接種量,將一級培養結束的菌懸液接種至裝有基礎培養基的三角瓶中B,三角瓶密封,35℃培養箱恒溫靜置培養16~24小時;

8)菌種三級培養:按照2~6%接種量,將二級培養結束的菌懸液接種至裝有基礎培養基的發酵罐中,開啟發酵罐攪拌槳,轉速為100rpm,通氣量為0,35℃恒溫培養7~12小時;

9)菌種四級發酵:按照2~8%接種量,將三級培養結束的菌懸液接種至裝有優化培養基的發酵罐中,開啟發酵罐攪拌槳,轉速為100rpm,通氣量為0,35℃恒溫培養,在發酵開始3小時后,通過流加食品級NaOH溶液來維持恒定pH為4.80~5.30,培養周期6~12小時,直至監測到菌液OD600值停止增長或呈負增長,立即停止發酵;

10)發酵液離心:四級發酵結束后,將發酵罐罐體溫度調低,當罐內發酵液溫度低于20℃時準備離心,離心設備采用管式離心機,離心前對轉鼓進行蒸汽滅菌30min,離心轉速為10000~15000rpm;

11)菌泥收集:離心結束后,收集轉鼓內的菌泥;

12)凍干保護劑添加,菌泥收集完畢后,按照菌泥:凍干保護劑=1:1~2的質量體積比,添加凍干保護劑,并攪拌、得到混合均勻的菌液;

13)冷凍干燥:將混合均勻的菌粉,分裝到凍干機托盤中,然后將凍干機托盤放入凍干機內進行菌粉的凍干,真空度0~1.0Pa,溫度-25℃,持續凍干43~58小時;

14)凍干粉收集;

15)粉碎、包裝:按質量要求進行粉碎后包裝。

2.如權利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟3)中MRS液體培養基的體積占三角瓶容積的40%~60%。

3.如權利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟4)中混合液與離心前二級純化培養得到的菌懸液的體積比為1:10。

4.如權利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟4)中混合液由MRS液體培養基與50%甘油溶液按體積比為1:1~1.5的比例配制混合而成。

5.如權利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟7)中基礎培養基的體積占三角瓶B容積的40%~60%;步驟8)中基礎培養基的體積占發酵罐容積的40%~60%。

6.如權利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟6)、7)、8)中基礎培養基的配制,按照配方比例為:酵母蛋白胨8.0~15.0g/L、葡萄糖15.0~25.0g/L、酵母浸出物3.0~6.0g/L、乙酸鈉4.0~6.0g/L、硫酸鎂0.1~0.6g/L、吐溫80 0.5~0.75g/L、磷酸二氫鉀1.5~3.0g/L、余量為無菌水,稱量各組分,混合、加熱溶解,用1mol/L食品級NaOH溶液調培養基pH值至6.20~6.60,于115℃下滅菌30min。

7.如權利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟9)中優化培養基裝液的體積占發酵罐容積的40%~60%。

8.如權利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟9)中優化培養基的配制,按照配方比例為:酵母蛋白胨13.0~18.0g/L、葡萄糖25.0~35.0g/L、酵母浸出物8.0~12.0g/L、乙酸鈉8.0~12.0g/L、硫酸鎂0.1~0.2g/L、吐溫80 0.5~0.75g/L、磷酸二氫鉀1.5~3.0g/L、余量為無菌水,稱量各組分,混合、加熱溶解,用1mol/L食品級NaOH溶液調培養基pH值至6.20~6.60,115℃下滅菌30min。

9.如權利要求1所述的制備方法,其特征在于,步驟12)中凍干保護劑的配制,按照比例為:脫脂奶粉60.0~100.0g/L、麥芽糊精20.0~40.0g/L、海藻糖80.0~200.0g/L、吐溫80 0.5~0.75g/L、甘油8.0~12.0g/L、谷氨酸鈉0.8~1.5g/L、抗壞血酸鈉0.8~1.5g/L、余量為無菌水,對各組分進行稱量、混、溶解,于115℃滅菌30min,待溫度降至室溫后,冷藏于-4℃冰箱內備用。

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