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一種水稻抗稻瘟病基因Pi2的功能分子標(biāo)記Pi2?1及應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):11145830閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種水稻抗稻瘟病基因Pi2的功能分子標(biāo)記Pi2-1,其特征在于,所述功能分子標(biāo)記所擴(kuò)增的DNA片段包含水稻抗稻瘟病基因Pi2基因組序列的第1543-1545位核苷酸,某些水稻感稻瘟病品種在該位點(diǎn)存在ACA 3個(gè)堿基缺失,由引物對(duì)SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2從水稻基因組中擴(kuò)增出抗稻瘟病基因Pi2的DNA片段,經(jīng)電泳檢測(cè)DNA片段大小,從而確定水稻抗稻瘟病基因Pi2的完整性,進(jìn)而確定其稻瘟病抗性。

2.一種水稻抗稻瘟病基因Pi2的功能分子標(biāo)記Pi2-1的引物對(duì),其特征在于,所述引物對(duì)的正向引物如SEQ ID NO.1所示,所述引物對(duì)的反向引物如SEQ ID NO.2所示。

3.一種鑒定水稻抗稻瘟病基因Pi2的方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)通過(guò)常規(guī)PCR法擴(kuò)增及測(cè)序,獲得水稻抗稻瘟病基因Pi2的1個(gè)抗病等位基因與1個(gè)感病等位基因序列;

2)將步驟1)所獲得的序列進(jìn)行比對(duì),得到水稻抗稻瘟病基因Pi2的第1543-1545位點(diǎn)處存在ACA 3個(gè)堿基缺失,該差異位于該基因的外顯子;

3)對(duì)不同水稻的總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)驗(yàn)證,獲得與水稻抗稻瘟病基因Pi2呈特異性帶型的核苷酸片段;

4)對(duì)步驟3)所獲得的分子標(biāo)記在不同的水稻品種中進(jìn)行帶型顯色和基因型分型,從而確定水稻抗稻瘟病基因Pi2的完整性,進(jìn)而確定其稻瘟病抗性。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定水稻抗稻瘟病基因Pi2的方法,其特征在于,所述步驟3)中的PCR反應(yīng)體系如下:

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定水稻抗稻瘟病基因Pi2的方法,其特征在于,所述電泳檢測(cè)中的8%聚丙烯酰胺凝膠的組成如下:

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的鑒定水稻抗稻瘟病基因Pi2的方法,其特征在于,所述顯色中的聚丙烯酰胺凝膠顯色液100ml的組成如下:

7.權(quán)利要求1所述的水稻抗稻瘟病基因Pi2的功能分子標(biāo)記Pi2-1在篩選和鑒定水稻稻瘟病抗性品種中的應(yīng)用。

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