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用于鑒定三種藥用蛇的引物組合及其應用的制作方法

文檔序號:11145833閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.引物組合,由引物對I、引物對II和引物對III組成;

所述引物對I由引物F1和引物F2組成;

所述引物F1為如下(a1)或(a2):

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子;

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子;

所述引物F2為如下(a3)或(a4):

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子;

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子;

所述引物對II由引物F3和引物F4組成;

所述引物F3為如下(a5)或(a6):

(a5)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子;

(a6)將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子;

所述引物F4為如下(a7)或(a8):

(a7)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子;

(a8)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子;

所述引物對III由引物F5和引物F6組成;

所述引物F5為如下(a9)或(a10):

(a9)序列表的序列5所示的單鏈DNA分子;

(a10)將序列5經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列5具有相同功能的DNA分子;

所述引物F6為如下(a11)或(a12):

(a11)序列表的序列6所示的單鏈DNA分子;

(a12)將序列6經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列6具有相同功能的DNA分子。

2.權利要求1所述引物組合的應用,為如下(b1)至(b6)中的任意一種:

(b1)鑒別蘄蛇、烏梢蛇和金錢白花蛇;

(b2)制備用于鑒別蘄蛇、烏梢蛇和金錢白花蛇的試劑盒;

(b3)鑒定待測蛇是否為蘄蛇、烏梢蛇或金錢白花蛇;

(b4)制備用于鑒定待測蛇是否為蘄蛇、烏梢蛇或金錢白花蛇的試劑盒;

(b5)鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇和/或烏梢蛇和/或金錢白花蛇;

(b6)制備用于鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇和/或烏梢蛇和/或金錢白花蛇的試劑盒。

3.含有權利要求1所述引物組合的試劑盒;所述試劑盒的用途為如下(c1)或(c2)或(c3):

(c1)鑒別蘄蛇、烏梢蛇和金錢白花蛇;

(c2)鑒定待測蛇是否為蘄蛇、烏梢蛇或金錢白花蛇;

(c3)鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇和/或烏梢蛇和/或金錢白花蛇。

4.權利要求3所述試劑盒的制備方法,包括將各條引物單獨包裝的步驟。

5.鑒別蘄蛇、烏梢蛇和金錢白花蛇的方法,為如下方法I或方法II;

所述方法I包括如下步驟:提取待測蛇基因組DNA;以所述基因組DNA為模板,采用權利要求1所述的引物組合進行PCR擴增,如果擴增產物中含有339-359bp的DNA片段、待測蛇為蘄蛇,如果擴增產物中含有114-134bp的DNA片段、待測蛇為烏梢蛇,如果擴增產物中含有555-575bp的DNA片段、待測蛇為金錢白花蛇;

所述方法II包括如下步驟:檢測待測蛇的基因組DNA中是否含有權利要求1所述的引物組合中的引物對I的靶序列、引物對II的靶序列或引物對III的靶序列;如果所述基因組DNA中含有引物對I的靶序列、待測蛇為蘄蛇,如果所述基因組DNA中含有引物對II的靶序列、待測蛇為烏梢蛇,如果所述基因組DNA中含有引物對III的靶序列、待測蛇為金錢白花蛇。

6.鑒定待測蛇是否為蘄蛇、烏梢蛇或金錢白花蛇的方法,為如下方法III或方法IV或方法V;

所述方法III包括如下步驟:提取待測蛇的基因組DNA;以所述基因組DNA為模板,采用權利要求1所述的引物組合進行PCR擴增,如果采用擴增產物中含有339-359bp的DNA片段、待測蛇為蘄蛇,如果擴增產物中含有114-134bp的DNA片段、待測蛇為烏梢蛇,如果擴增產中含有555-575bp的DNA片段、待測蛇為金錢白花蛇,如果擴增產物中不含有339-359bp的DNA片段、114-134bp的DNA片段或555-575bp的DNA片段、待測蛇為非蘄蛇且非烏梢蛇且非金錢白花蛇;

所述方法IV包括如下步驟:提取待測蛇的基因組DNA;以所述基因組DNA為模板,采用權利要求1所述的引物組合進行PCR擴增;如果擴增產物加入SYBR Green I熒光染料后可以檢測到綠色熒光、待測蛇為蘄蛇或烏梢蛇或金錢白花蛇,如果擴增產物加入SYBR Green I熒光染料后不可以檢測到綠色熒光、待測蛇為非蘄蛇且非烏梢蛇且非金錢白花蛇;

所述方法V包括如下步驟:檢測待測蛇的基因組DNA中是否含有權利要求1所述的引物組合中的引物對I的靶序列、引物對II的靶序列或引物對III的靶序列;如果所述基因組DNA中含有引物對I的靶序列、待測蛇為蘄蛇,如果所述基因組DNA中含有引物對II的靶序列、待測蛇為烏梢蛇,如果所述基因組DNA中含有引物對III的靶序列、待測蛇為金錢白花蛇,如果所述基因組DNA中不含有引物對I、引物對II或引物對III的靶序列、待測蛇為非蘄蛇且非烏梢蛇且非金錢白花蛇。

7.鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇和/或烏梢蛇和/或金錢白花蛇的方法,為如下方法VI或方法VII或方法VIII;

所述方法VI包括如下步驟:提取待測樣品的基因組DNA;以所述基因組DNA為模板,采用權利要求1所述的引物組合進行PCR擴增,如果擴增產物中含有339-359bp的DNA片段、待測樣品中含有蘄蛇,如果擴增產物中含有114-134bp的DNA片段、待測樣品中含有烏梢蛇,如果擴增產物中含有555-575bp的DNA片段、待測樣品中含有金錢白花蛇,如果擴增產物中不含有339-359bp的DNA片段、114-134bp的DNA片段或555-575bp的DNA片段、待測樣品中不含有蘄蛇且不含有烏梢蛇且不含有金錢白花蛇;

所述方法VII包括如下步驟:提取待測樣品的基因組DNA;以所述基因組DNA為模板,采用權利要求1所述的引物組合進行PCR擴增;如果擴增產物加入SYBR Green I熒光染料后可以檢測到綠色熒光、待測樣品中含有蘄蛇或烏梢蛇或金錢白花蛇,如果擴增產物加入SYBR Green I熒光染料后不可以檢測到綠色熒光、待測樣品中不含有蘄蛇且不含有烏梢蛇且不含有金錢白花蛇;

所述方法VIII包括如下步驟:檢測待測樣品的基因組DNA中是否含有權利要求1所述的引物組合中的引物對I的靶序列、引物對II的靶序列或引物對III的靶序列;如果所述基因組DNA中含有引物對I的靶序列、待測樣品中含有蘄蛇,如果所述基因組DNA中含有引物對II的靶序列、待測樣品中含有烏梢蛇,如果所述基因組DNA中含有引物對III的靶序列、待測樣品中含有金錢白花蛇,如果所述基因組DNA中不含有引物對I、引物對II或引物對III的靶序列、待測樣品中不含有蘄蛇且不含有烏梢蛇且不含有金錢白花蛇。

8.引物對I或引物對II;

所述引物對I由引物F1和引物F2組成;

所述引物F1為如下(a1)或(a2):

(a1)序列表的序列1所示的單鏈DNA分子;

(a2)將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子;

所述引物F2為如下(a3)或(a4):

(a3)序列表的序列2所示的單鏈DNA分子;

(a4)將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子;

所述引物對II由引物F3和引物F4組成;

所述引物F3為如下(a5)或(a6):

(a5)序列表的序列3所示的單鏈DNA分子;

(a6)將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子;

所述引物F4為如下(a7)或(a8):

(a7)序列表的序列4所示的單鏈DNA分子;

(a8)將序列4經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列4具有相同功能的DNA分子。

9.權利要求8所述引物對I在制備試劑盒甲中的應用,或,所述引物對II在制備試劑盒乙中的應用;

所述試劑盒甲的用途為如下(d1)或(d2):

(d1)鑒定待測蛇是否為蘄蛇;

(d2)鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇;

所述試劑盒乙的用途為如下(d3)或(d4):

(d3)鑒定待測蛇是否為烏梢蛇;

(d4)鑒定待測樣品中是否含有烏梢蛇。

10.含有權利要求8所述引物對I的試劑盒甲,或,含有權利要求8所述引物對II的試劑盒乙;

所述試劑盒甲的用途為如下(d1)或(d2):

(d1)鑒定待測蛇是否為蘄蛇;

(d2)鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇;

所述試劑盒乙的用途為如下(d3)或(d4):

(d3)鑒定待測蛇是否為烏梢蛇;

(d4)鑒定待測樣品中是否含有烏梢蛇。

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