1.用于哈蟆油真偽鑒別的引物對,為能擴增出DNA片段A的引物對;
所述DNA片段A是以哈蟆油為模板,用序列1和序列2所示引物對進行擴增得到的產物。
2.根據權利要求1所述的引物對,其特征在于:所述DNA片段A的核苷酸序列為序列5;
或,所述引物對由引物1和引物2組成;
所述引物1為如下1)或2):
1)為序列1所示的單鏈DNA分子;
2)為序列1刪除和/或增加和/或改變一個或幾個核苷酸得到的單鏈DNA分子;
所述引物2為如下3)或4):
3)為序列2所示的單鏈DNA分子;
4)為序列2刪除和/或增加和/或改變一個或幾個核苷酸得到的單鏈DNA分子。
3.一種用于鑒定或輔助哈蟆油的PCR試劑,包括權利要求1或2所述的引物對、DNA聚合酶和dNTP。
4.根據權利要求3所述的PCR試劑,其特征在于:
所述引物對中每條引物在所述PCR試劑中的濃度均為2nmol/l;
和/或,各個dNTP在所述PCR試劑中的濃度具體為2.5nmol/l;
和/或,所述DNA聚合酶具體為SpeedStar HS Taq DNA聚合酶或Phanta Max Super-Fidelity DNA聚合酶。
5.一種鑒定或輔助鑒定哈蟆油的試劑盒,包括權利要求1或2所述的引物或權利要求3或4所述的PCR試劑。
6.權利要求1或2所述的引物中的所述DNA片段A。
7.權利要求1或2所述的引物或權利要求3或4所述的PCR試劑或權利要求5所述的試劑盒或權利要求6所述的DNA片段A在如下(A1)-(A5)中任一種中的應用:
(A1)鑒定或輔助鑒定哈蟆油;
(A2)鑒別或輔助鑒別哈蟆油;
(A3)鑒別或輔助鑒別哈蟆油及其偽品;
(A4)鑒定或輔助鑒定待測樣品是否為哈蟆油;
(A5)鑒定或輔助鑒定待測樣品是哈蟆油還是其偽品。
8.一種檢測或輔助檢測待測樣品是否為哈蟆油的方法,包括如下步驟:檢測待測樣品中是否含有權利要求6所述的DNA片段A;如果含有,則待測樣品為或候選為哈蟆油;如果不含有,則待測樣品不為或候選不為哈蟆油。
9.根據權利要求8所述的方法,其特征在于:
所述檢測待測樣品中是否含有DNA片段A的方法包括如下步驟:
1)用權利要求1或2所述的引物對待測樣品進行PCR擴增,得到PCR擴增產物;
2)用如下a或b檢測所述PCR擴增產物:
a、向所述PCR擴增產物中加入DNA熒光染料,紫外檢測,若PCR擴增產物有熒光,則待測樣品含有所述DNA片段A,若PCR擴增產物無熒光,則待測樣品不含有所述DNA片段A;
b、檢測所述PCR擴增產物大小,若大小為520-530bp,則所述待測樣品含有所述DNA片段A,若大小不為520-530bp,則所述待測樣品不含有所述DNA片段A。
10.根據權利要求8或9所述的方法,其特征在于:
所述PCR擴增的模板為待測樣品的基因組DNA;
所述PCR擴增條件為90℃3s,62℃20s,32個循環。