本發明總體上涉及腫瘤治療和分子免疫學領域。具體而言，本發明涉及特異性結合人vsig4的新型抗體或其抗原結合片段以及含有所述抗體或其抗原結合片段的組合物。此外，本發明涉及編碼所述抗體或其抗原結合片段的核酸、包含所述多核苷酸的載體、包含所述核酸或載體的宿主細胞。此外，本發明涉及這些抗體或其抗原結合片段在疾病尤其是腫瘤的治療和/或預防中的應用。

背景技術：

1、v-set免疫球蛋白結構域4(v-set?immunoglobulin-domain-containing?4，vsig4)是1型跨膜ig超家族成員，以兩種交替剪接形式存在。該基因位于人類x染色體的中心點周圍區域，人源和鼠源vsig4都位于x染色體上膜鐵轉運輔助蛋白和膜突蛋白之間的xq12[16530040]，在人體組織的肝臟、肺部和胎盤中高度表達，而鼠源vsig4(mvsig4)基因則是編碼單個igv型結構域。人源vsig4有長形式hvsig4(l)和短形式hvsig4(s)[16530040]。hvsig4(l)的胞外結構包含潛在的o糖基化位點，而胞內結構域包含兩個潛在磷酸化位點s311和t-333[11004523]。hvsig4(s)胞內結構域包含兩個潛在磷酸化位點s217和t239[27045607]。hvsig4(l)編碼v型和c2型末端ig域，其短形式編碼單個v型ig域。同時人和小鼠vsig4的胞質結構域分別包含ap-2內化基序yarl和dsqali。hvsig4(s)與mvsig4具有67％的序列同源性，其中83％位于igv結構域。

2、vsig4是一種膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族補體受體(crig)。生理條件下，vsig4在胸腺髓質、腹膜、肺泡、滑膜、脂肪、心臟、肝、胎盤和動脈粥樣硬化泡沫細胞等巨噬細胞中特異性表達[11004523/19017980/18752851/16882875/18727628/17016562/11997108]。vsig4陽性巨噬細胞主要通過補體和t細胞在肝臟炎癥、類風濕關節炎、狼瘡腎炎等炎癥或免疫性疾病中表現出抗炎、穩態和清除作用[22711680/17548523/25988858]。vsig4也可以通過結合補體成分c3b，從而介導c3b調理的病原體清除，如單核細胞增生性李斯特菌和金黃色葡萄球菌(16530040)。除了補體系統和細胞免疫外，vsig4還在調節某些途徑和某些物質的產生中發揮重要作用，從而調節疾病的發展。vsig4被認為是癌癥中重要的免疫檢查點分子，可以作為腫瘤的獨立預后因素或免疫治療的潛在靶點[28498255/32924090]。

3、wo2021044014a1中公開了能夠結合vsig4的長形式hvsig4(l)和短形式hvsig4(s)的抗vsig4抗體。目前，仍然需要開發新的對vsig4的長形式hvsig4(l)和短形式hvsig4(s)均具有較高的結合親和力，并能夠有效治療vsig4相關疾病，尤其是腫瘤的新型抗vsig4抗體。

技術實現思路

1、本發明提供了一組新型抗vsig4抗體，其與人vsig4-ecd-hfc和人vsig4-短-ecd-hfc蛋白的均能結合。顯示出與hvsig4-ecd-hfc蛋白的高結合親和力，其od450nm>3.0；所有抗體(mab004、mab009、mab019除外)均顯示出與hvsig4-短-fc蛋白的結合親和力，其od450nm>3.0。因此，mab004、mab009和mab019僅結合在hvsig4-ecd-fc蛋白的igc2結構域，而其它抗體結合在hvsig4-ecd-fc蛋白的igv結構域。

2、因而，在第一方面，本發明提供了抗vsig4抗體或其抗原結合片段，其中：

3、i)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：1、2和3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：4、5和6所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

4、ii)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：7、8和9所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：10、11和12所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

5、iii)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：13、14和15所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：16、17和18所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

6、iv)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：19、20和21所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：22、23和24所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

7、v)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：25、26和27所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：28、29和30所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

8、vi)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：31、32和33所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：34、35和36所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

9、vii)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：37、38和39所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：40、41和42所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

10、viii)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：43、44和45所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：46、47和48所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

11、ix)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：49、50和51所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：52、53和54所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

12、x)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：55、56和57所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：58、59和60所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

13、xi)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：61、62和63所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：64、65和66所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

14、xii)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：67、68和69所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：70、71和72所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

15、xiii)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：73、74和75所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：76、77和78所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，

16、xiv)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：79、80和81所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：82、83和84所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，或

17、xv)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：85、86和87所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：88、89和90所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；其中i)至xv)的cdr序列是根據kabat編號系統確定的；或者

18、xvi)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：136、137和138所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：139、140和141所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，或

19、xvii)所述重鏈可變區包含分別如seq?id?no：142、143和144所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3，和所述輕鏈可變區包含分別如seq?id?no：145、146和147所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中xvi)至xvii)的cdr序列是根據imgt編號系統確定的。

20、在具體的實施方案中，本發明的抗vsig4抗體或其抗原結合片段具有至少一種以下的活性：

21、1)以高親和力結合人、小鼠和食蟹猴的vsig4；

22、2)與hvsig4-ecd-hfc和hvsig4-短-fc均結合；

23、3)對a33和jam-a蛋白沒有結合活性；

24、4)以高親和力阻斷hvsig4-his和hc3b的相互作用，和

25、5)體內和體外的抗腫瘤活性。

26、另一方面，本發明進一步提供了編碼本發明的抗vsig4抗體或其抗原結合片段的多核苷酸。

27、另一方面，本發明進一步提供了包含所述多核苷酸的載體。

28、另一方面，本發明進一步提供了包含所述載體的細胞。

29、另一方面，本發明進一步提供了用于治療癌癥的藥物組合物，其包含特異性結合vsig4的抗體或其抗原結合片段、以及藥學上的賦形劑、稀釋或載體。

30、此外，本發明進一步提供了治療癌癥的方法，其包括向有需要的受試者施用治療有效量的本發明的抗vsig4抗體或其抗原結合片段、或包含其的藥物組合物。

31、另一方面，本發明提供了根據本發明所述的抗vsig4抗體或其抗原結合片段、或藥物組合物、在制備用于治療疾病或病癥的藥物中的用途，其中所述疾病或病癥選自癌癥。

32、在具體的實施方案中，本發明中的癌癥選自膀胱癌、乳腺癌、宮頸癌、結腸癌、子宮內膜癌、食道癌、輸卵管癌、膽囊癌、胃腸道癌、頭頸癌、血癌(例如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤)、喉癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、間皮瘤、卵巢癌、原發性腹膜癌、唾液腺癌、肉瘤、胃癌、甲狀腺癌、胰腺癌、腎細胞癌、膠質母細胞瘤和前列腺癌。