本發明屬于生物醫藥，具體涉及絞股藍來源的三萜皂苷類化合物及其在制備抗疲勞產品中的應用。

背景技術：

1、中藥絞股藍為葫蘆科絞股藍屬多種植物的全草，如絞股藍(gynostemmapentaphyllum(thunb.)makino)、長梗絞股藍(g.longipes?c.y.wu?ex?c.y.wu?ets.k.chen)、扁果絞股藍(g.compressum)、喙果絞股藍(g.yixingense)及緬甸絞股藍(g.burmanicum)等。絞股藍為我國常用中藥與習用涼茶，收錄于2015版《中國藥典》之“成方制劑中未收載的藥材和飲片”部分，同時也被我國原衛生部收錄入《可用于保健食品的中藥材名單》目錄中。已有化學成分研究表明，絞股藍含有三萜皂苷、黃酮、多糖等多種化學成分，其中達瑪烷型四環三萜類皂苷為絞股藍的主要活性成分，又被稱為絞股藍皂苷。截至目前已從絞股藍中分離鑒定三萜皂苷類化合物近500種。相關藥理研究表明，絞股藍具有降脂、增強免疫、延緩衰老、提高大腦機能等廣泛的藥理活性。

2、然而絞股藍分布廣泛，中間存在天然雜交，不同地域產的絞股藍中皂苷類成分差異很大。例如，tae?young?kim等申請了一種絞股藍莖葉提取物用于抗疲勞的醫藥用途及其制備方法的專利(us20190201468a1)，該提取物的主要成分為絞股藍皂苷l及絞股藍皂苷li，其特征為在c-2和c-12位均有羥基取代；楊軍麗等申請并獲得授權的《一種絞股藍活性成分達瑪烷型三萜皂苷及其分離和應用》的專利cn113135978a，該活性成分其結構特征為c-17位側鏈均環合成五元環。

3、本發明系統采集了全國主要產區的絞股藍，并對其化學成分及抗疲勞作用進行研究，發現不同地域絞股藍中皂苷類成分雖然均為三萜皂苷，但其抗疲勞作用卻差異顯著。

技術實現思路

1、本發明的目的是提供一種來源于絞股藍的三萜皂苷類化合物，其具有特定的結構特征，顯示出顯著的抗疲勞活性。

2、第一方面，本發明提供的三萜皂苷類化合物，選自下述化合物1至化合物29中的一種或多種：

3、

4、第二方面，本發明還提供了上述三萜皂苷類化合物的提取及分離方法，包括如下步驟：將絞股藍水提醇沉，取上清液濃縮，通過分離純化，得到化合物1至化合物29中的一種或多種。

5、具體地，上述三萜皂苷類化合物的提取及分離方法，包括如下步驟：

6、(1)將絞股藍水提，濃縮，利用90％乙醇醇沉，取上清液濃縮，取上清液濃縮后進行d101大孔吸附樹脂柱層析，再使用乙醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數20％、70％、85％乙醇水溶液)，濃縮干燥，得到3個組分fr.d1～fr.d3；

7、(2)取步驟(1)得到的fr.d1進行sp825大孔吸附樹脂柱層析，使用乙醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為30％、40％、50％、60％、70％乙醇水溶液)，濃縮干燥，得到5個組分fr.d1a～fr.d1e；

8、(3)取步驟(2)得到的組分fr.d1b進行mci樹脂柱層析，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為40％、50％、60％、70％、80％、90％甲醇水溶液)，經uhplc-cad檢識后合并，得到6個組分fr.d1b1～fr.d1b6；

9、(4)取步驟(3)得到的fr.d1b3，使用反相c18色譜柱分離，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％甲醇水溶液)，得到7個組分fr.d1b3a～fr.d1b3g；其中，fr.d1b3d經制備液相分離純化得到化合物28，fr.d1b3e經制備液相分離純化得到化合物9、化合物10、化合物15、化合物16和化合物29，fr.d1b3f經制備液相分離純化得到化合物5和化合物27；

10、(5)取步驟(3)得到的fr.d1b4，使用反相c18色譜柱分離，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為40％、50％、60％、70％、80％甲醇水溶液)，經uhplc-cad檢識合并，得到5個組分fr.d1b4a-fr.d1b4e；其中，fr.d1b4c經制備液相分離純化得到化合物21和化合物24，fr.d1b4d經制備液相分離純化得到化合物25和化合物26；

11、(6)取步驟(1)得到的fr.d3，進行硅膠柱色譜分離，使用三氯甲烷-甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積比為95:5:0.5、90:10:1、85:15:1.5、80:20:6、75:25:7.5、70:30:9、100:0:0)，經tlc檢識合并，得到fr.d3-1～fr.d3-22；將組分fr.d3-10～fr.d3-13，合并后利用反相c18色譜柱分離，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、100％甲醇水溶液)，經uhplc-cad分析后合并，共得到9個組分fr.d3-10a～fr.d3-10h；其中，fr.d3-10g經制備液相分離純化，得到化合物14和化合物23；

12、(7)取步驟(6)得到的fr.d3-14進行反相c18色譜柱層析，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、100％甲醇水溶液)，經uhplc-cad檢識合并后得到27個組分fr.d3-14-1～fr.d3-14-27；其中，fr.d3-14-8經制備液相分離純化，得到化合物12、化合物13、化合物17、化合物18、化合物19、化合物20和化合物22；

13、(8)取步驟(6)得到的fr.d3-15進行反相c18色譜柱分離純化，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、100％甲醇水溶液)，經uhplc-cad檢識合并后得到21個組分fr.d3-15a～fr.d3-15u；其中，fr.d3-15i經制備液相分離純化，得化合物6和化合物8；fr.d3-15j經制備液相分離純化，得到化合物7；

14、(9)取步驟(1)得到的fr.d2，利用硅膠柱色譜分離純化，使用三氯甲烷-甲醇-水溶劑系統梯度洗脫(洗脫程序為：體積比為95:5:0.5、90:10:1、85:15:1.5、80:20:6、75:25:7.5、70:30:9、100:0:0)，經tlc檢識合并后得到22個組分fr.d2-1～fr.d2-22；其中，fr.d2-8通過反相c18色譜柱分離，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為50％、60％、70％、80％、90％、100％甲醇水溶液)，經uhplc-cad檢識合并后得到18個組分fr.d2-8a～fr.d2-8r；其中，fr.d2-8j經制備液相分離純化，得化合物11；fr.d2-8n經制備液相分離純化，得化合物4；

15、(10)取步驟(9)得到的fr.d2-14進行反相c18色譜柱分離，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、100％甲醇水溶液)，經uhplc-cad檢識合并后得8個組分fr.d2-14a～fr.d2-14h；其中，fr.d2-14h經制備液相分離純化，得到化合物3；

16、(11)取步驟(9)得到的fr.d2-18通過反相c18色譜柱分離，使用甲醇-水溶劑系統進行梯度洗脫(洗脫程序為：體積分數為50％、60％、70％、80％、90％、100％甲醇水溶液)，經uhplc-cad檢識合并后得6個組分fr.d2-18a～fr.d2-18f；其中，fr.d2-18e經制備液相分離純化，得到化合物1和化合物2。

17、第三方面，本發明還提供了三萜皂苷化合物在制備抗疲勞產品中的應用；

18、所述三萜皂苷化合物的結構如通式i所示：

19、

20、其中，

21、r3為-oh，-o-glc，

22、r12為-oh或氧代(＝o)；

23、r20為-oh，-o-glc，

24、r22為或與c-12位羥基環合形成七元環

25、其中，結構式中出現的縮寫如下定義：

26、glc：葡萄糖(glucose)；rha：鼠李糖(rhamnmose)；xyl：木糖(xylose)；ac：乙酰基(acetyl)。

27、所述應用中，所述產品包括抗體力疲勞產品、抗腦力疲勞產品和增肌產品。

28、所述應用中，所述產品為食品、膳食補充劑或藥物。

29、所述應用中，所述藥物的劑型為顆粒劑、口服液、膠囊、片劑、泡騰片、粉針劑、水針劑或注射劑；

30、所述應用中，所述藥物包括單方劑型或復方劑型。

31、所述絞股藍提取物在制備通過下述指標中的至少一種實現在抗疲勞產品中的應用：

32、1)提高股四頭肌和腓腸肌的重量；

33、2)促進肌管細胞的atp生產；

34、3)拮抗fxr信號。

35、第四方面，本發明還提供了一種抗疲勞組合物，包括三萜皂苷類化合物，所述三萜皂苷類化合物選自上述化合物1至化合物29中的一種或多種。

36、與現有技術相比，本發明取得的有益效果是：

37、1、本發明提供的化合物1至化合物29具有新穎的結構特征，并具有顯著的抗疲勞活性。

38、2、本發明提供的來源于絞股藍的具有通式i所示結構的三萜皂苷類化合物具有顯著的抗疲勞活性，可作為先導化合物開發相關抗疲勞產品。