本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域中的魚類遺傳性別鑒定技術(shù)，尤其涉及一種覆蓋黑脊倒刺鲃雄性7個indel位點的遺傳性別特異性分子標記及其應用。

背景技術(shù)：

1、性別決定是兩性生殖生物繁衍的基礎，通過精確的性別分化保障了種群的正常繁殖與延續(xù)，性別往往與生長速率、代謝需求等生物學特征相關(guān)。魚類在性別決定機制研究中具有重要地位，其作為脊椎動物進化中的關(guān)鍵類群，展現(xiàn)出多樣化的性別決定方式。魚類物種豐富且分布廣泛，為揭示性別決定的遺傳與環(huán)境調(diào)控機制提供了理想模型。許多魚類在性別相關(guān)的生長速率上存在顯著差異，開發(fā)精準的遺傳性別分子標記不僅能輔助單性育種，提高水產(chǎn)養(yǎng)殖效率，還能深化對性別發(fā)育和進化適應機制的科學理解。這些研究為生物多樣性保護和水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供了重要理論支持和技術(shù)手段。

2、黑脊倒刺鲃(spinibarbushollandi)，是一種淡水魚類，隸屬于鯉形目，鯉科，倒刺鲃屬。其肉質(zhì)鮮美，具有一定的漁業(yè)價值。此外，由于其對水質(zhì)要求較高，也可作為環(huán)境指示物種，用于監(jiān)測水體健康。在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)及生態(tài)環(huán)境保護領(lǐng)域，黑脊倒刺鲃展現(xiàn)出潛在的應用價值。黑脊倒刺鲃具有雌雄二態(tài)性，雌性個體和雄性個體在體型上存在差異，雌性個體大于雄性個體，為單性育種和水產(chǎn)養(yǎng)殖提供了方向。通過鑒別遺傳性別并培育全雌苗種，可顯著提高黑脊倒刺鲃養(yǎng)殖效益。

3、性別分子標記技術(shù)是近年來生物學研究和應用中的重要工具，具有廣泛的前景和深遠的意義。性別分子標記技術(shù)可大大提高水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的效率，尤其在魚類和其他水生物種中。通過準確地鑒定性別，可以實現(xiàn)單性育種，選擇性地培育具有更高經(jīng)濟價值的性別個體。在性腺發(fā)育成熟之前，黑脊倒刺鲃的雌雄個體在形態(tài)學上未表現(xiàn)出顯著差異，因此，開發(fā)一種能夠鑒別其遺傳性別的分子標記，對于單性育種技術(shù)的應用具有重要的實踐意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明目的在于提供一種覆蓋黑脊倒刺鲃雄性7個indel位點的遺傳性別特異性分子標記及其應用。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)：

3、本發(fā)明的第一方面提供了一種用于鑒別黑脊倒刺鲃遺傳性別的分子標記，所述分子標記定位于黑脊倒刺鲃的第46號染色體上，覆蓋7個indel位點，具體位置坐標為36,036,398bp至36,036,651bp。

4、本發(fā)明的第二方面提供了上述一種分子標記的引物，所述引物的核苷酸序列為：p11-3-f：5’-cccagttcagcttcaaaccg-3’，p11-3-r：5’-acaggttcagtaatgtcctttag-3’。

5、本發(fā)明的第三方面提供了一種用于鑒別黑脊倒刺鲃遺傳性別的試劑盒，所述試劑盒包括上述的引物。

6、本發(fā)明的第四方面提供了上述的分子標記、引物、試劑盒在鑒別黑脊倒刺鲃遺傳性別方面的應用。

7、本發(fā)明的第五方面提供了上述的分子標記、引物、試劑盒在黑脊倒刺鲃人工養(yǎng)殖中的應用。

8、本發(fā)明的第六方面提供了一種鑒別黑脊倒刺鲃遺傳性別的方法，采用上述的引物或試劑盒，對待測黑脊倒刺鲃的基因組dna進行pcr擴增，通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)對pcr產(chǎn)物進行檢測，從而實現(xiàn)對黑脊倒刺鲃遺傳性別的鑒別；

9、進一步的，所述pcr擴增的反應體系為：2×taq?master?mix?10.0μl，引物p11-3-f0.8μl，引物p11-3-r?0.8μl，dna模板1.0μl，加ddh2o補齊至20.0μl；

10、進一步的，所述pcr擴增的反應程序為：95℃預變性3min；95℃變性25s；56℃退火25s；72℃延伸30s，24個循環(huán)；72℃延伸5min；4℃冷卻保存；

11、進一步的，所述瓊脂糖凝膠電泳的檢測結(jié)果出現(xiàn)380bp和360bp兩條條帶時，說明待測黑脊倒刺鲃為雄性；所述瓊脂糖凝膠電泳的檢測結(jié)果僅出現(xiàn)380bp一條條帶時，說明待測黑脊倒刺鲃為雌性；

12、進一步的，所述瓊脂糖凝膠電泳的濃度為3％。

13、本發(fā)明公開了以下技術(shù)效果：

14、本發(fā)明公開的黑脊倒刺鲃性別分子標記，利用黑脊倒刺鲃的基因組dna作為模板，通過pcr擴增和瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，實現(xiàn)對不同黑脊倒刺鲃個體遺傳性別的快速、穩(wěn)定鑒別。該技術(shù)具有成本低廉、操作簡便、結(jié)果精確等優(yōu)勢。其應用有助于推動黑脊倒刺鲃單性繁殖技術(shù)的發(fā)展，進而提升黑脊倒刺鲃養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟效益。此外，本發(fā)明所提供的分子標記，為深入研究黑脊倒刺鲃性別決定機制等基礎科學研究提供了重要的理論支撐。

技術(shù)特征：

1.一種用于鑒別黑脊倒刺鲃遺傳性別的分子標記，其特征在于：所述分子標記定位于黑脊倒刺鲃的第46號染色體上，覆蓋7個indel位點，具體位置坐標為36,036,398bp至36,036,651bp。

2.一種權(quán)利要求1所述的分子標記的引物，其特征在于：所述引物的核苷酸序列為：p11-3-f：5’-cccagttcagcttcaaaccg-3’，p11-3-r：5’-acaggttcagtaatgtcctttag-3’。

3.一種用于鑒別黑脊倒刺鲃遺傳性別的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權(quán)利要求2所述的引物。

4.權(quán)利要求1所述的分子標記、權(quán)利要求2所述的引物、權(quán)利要求3所述的試劑盒在鑒別黑脊倒刺鲃遺傳性別方面的應用。

5.權(quán)利要求1所述的分子標記、權(quán)利要求2所述的引物、權(quán)利要求3所述的試劑盒在黑脊倒刺鲃人工養(yǎng)殖中的應用。

6.一種鑒別黑脊倒刺鲃遺傳性別的方法，其特征在于：采用權(quán)利要求2所述的引物或權(quán)利要求3所述的試劑盒，對待測黑脊倒刺鲃的基因組dna進行pcr擴增，通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)對pcr產(chǎn)物進行檢測，從而實現(xiàn)對黑脊倒刺鲃遺傳性別的鑒別。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述pcr擴增的反應體系為：2×taqmaster?mix?10.0μl，引物p11-3-f?0.8μl，引物p11-3-r?0.8μl，dna模板1.0μl，加ddh2o補齊至20.0μl。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述pcr擴增的反應程序為：95℃預變性3min；95℃變性25s；56℃退火25s；72℃延伸30s，24個循環(huán)；72℃延伸5min；4℃冷卻保存。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述瓊脂糖凝膠電泳的檢測結(jié)果出現(xiàn)380bp和360bp兩條條帶時，說明待測黑脊倒刺鲃為雄性；所述瓊脂糖凝膠電泳的檢測結(jié)果僅出現(xiàn)380bp一條條帶時，說明待測黑脊倒刺鲃為雌性。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述瓊脂糖凝膠電泳的濃度為3%。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種覆蓋黑脊倒刺鲃雄性7個InDel位點的遺傳性別特異性分子標記及其應用。該分子標記通過全基因組重測序，結(jié)合全基因組關(guān)聯(lián)分析方法，成功識別了性別間特異性的插入或缺失序列（InDel）。通過常規(guī)引物進行聚合酶鏈式反應（PCR）擴增，結(jié)合瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)，實現(xiàn)了對黑脊倒刺鲃遺傳性別的快速、穩(wěn)定鑒別。該分子標記覆蓋了黑脊倒刺鲃雄性7個InDel位點，在遺傳性別鑒定方面展現(xiàn)出操作簡便、結(jié)果精確的優(yōu)勢，對于研究黑脊倒刺鲃性別決定機制具有重要意義，并可為單性生殖技術(shù)提供輔助，進而提升水產(chǎn)養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益。

技術(shù)研發(fā)人員：張東玲,吳琰念,李楊,葉小軍,王茂元,黃洪貴,王志勇
受保護的技術(shù)使用者：集美大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/28