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一株稀有鮈鯽腸道細胞系的建立及應用

文檔序號:41737274發布日期:2025-04-25 17:10閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一株稀有鮈鯽腸道細胞系gbr-gut,其特征在于,保藏編號為gdmcc?no:65714。

2.權利要求1所述的稀有鮈鯽腸道細胞系的構建方法,其特征在于,包括以下步驟:

3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,所述原代細胞培養液為含20%v/v胎牛血清、1%v/v青霉素-鏈霉素-兩性霉素b三抗的l-15完全培養液,所述傳代細胞培養液為含10%v/v胎牛血清、0~1%v/v青霉素-鏈霉素-兩性霉素b三抗的l-15完全培養液。

4.根據權利要求2或3所述的方法,其特征在于,步驟(1)具體為:將健康稀有鮈鯽饑餓處理24h,在75%酒精中浸泡30-50s,無菌條件下沿側線解剖取出腸道組織,用鑷子去除表面粘液和腸道內部物質;將所述腸道組織剪成1mm2的組織塊,與含有2-5%青霉素-鏈霉素-兩性霉素b三抗的pbs緩沖液混合,離心分離得到沉淀物,重復2-3次混合、離心分離操作,得到預處理組織塊,加入5-12ml?0.25%胰酶消化1-2h,離心棄上清,加入原代細胞培養液重懸后得到細胞懸液,轉移至t-25細胞培養瓶28℃培養,至細胞長滿培養瓶底部后,得到稀有鮈鯽腸道的原代培養細胞。

5.根據權利要求2或3所述的方法,其特征在于,步驟(2)具體為:棄掉培養溶液后,用pbs緩沖液清洗,加入0.5-2ml0.25%胰酶消化處理,至細胞變圓后,加入10-20ml傳代細胞培養液重懸細胞,按1:2的比例進行傳代培養。

6.根據權利要求2或3所述的方法,其特征在于,步驟(3)中,凍存具體步驟為:將稀有鮈鯽腸道細胞系用pbs緩沖液清洗,加入0.5-2ml0.25%胰酶消化處理,至細胞變圓后,加入5-10ml傳代細胞培養液終止消化,離心得到沉淀物,加入含10%dmso的細胞凍存液重懸細胞,轉移至凍存管;將凍存管轉移至程序降溫盒中,置于-80℃環境4-24h后,將凍存管轉移到液氮中長期保存;復蘇具體步驟為:將凍存的稀有鮈鯽腸道細胞系從液氮中取出,置于28℃水浴使凍存管內液體融化,將管內細胞懸液轉移至5~9ml傳代細胞培養液中,離心得到沉淀物,加入5~10ml傳代細胞培養液重懸細胞,轉移至t-25培養瓶28℃培養,12-24h后更換新鮮的培養液繼續培養,得到復蘇的稀有鮈鯽腸道細胞。

7.一種基于權利要求1所述的基于稀有鮈鯽腸道細胞系的化學品急性毒性評估方法,其特征在于,包括如下步驟:

8.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,具體步驟為

9.根據權利要求7或8所述的方法,其特征在于,所述工作溶液a包括以下體積百分比的組分:10%的刃天青溶液、90%的dpbs緩沖液,所述工作溶液b包括以下體積百分比的組分:1-2%的中性紅溶液、98-99%的dpbs緩沖液。

10.根據權利要求8所述的方法,其特征在于,步驟(c)中,所述固定液制備方法為:2.5g的cacl2溶于200ml超純水,加入3.38ml的37%甲醛溶液,再用超純水定容至500ml;所述提取液制備方法為:5ml乙酸溶于100ml超純水,加入250ml無水乙醇,再用超純水定容至500ml。


技術總結
本發明公開了一株稀有鮈鯽腸道細胞的建立及應用,利用稀有鮈鯽的腸道構建了一株稀有鮈鯽腸道細胞系Gbr?gut,保藏編號為GDMCC?NO:65714;該稀有鮈鯽腸道細胞系的培養方法包括原代培養、傳代培養及其凍存與復蘇步驟。并基于該稀有鮈鯽腸道細胞系建立了一種化學品急性毒性評估方法,具體包括稀有鮈鯽腸道細胞的接種、化學品暴露和化學品對稀有鮈鯽腸道細胞的毒性作用檢測。本發明的稀有鮈鯽腸道細胞的建立方法及應用,擴展了稀有鮈鯽在化學品毒性檢測中的應用,為基于魚細胞的急性毒性測試提供參考。

技術研發人員:曾國驅,陶慧嫻,梅承芳,許玫英,陳桂蘭,許玉潔
受保護的技術使用者:廣東省科學院微生物研究所(廣東省微生物分析檢測中心)
技術研發日:
技術公布日:2025/4/24
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