專利名稱：一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養的技術領域，特別是涉及一種尾巨桉轉基因組織培養生根苗的一種簡易移栽方法。
背景技術：
桉樹(E.ucaIyptus)主要是桃金娘科(M. grtaceae)桉屬(E. ucalyptus)植物的統稱，是世界三大速生樹種之一。尾巨桉、E. urophyllaXE. grand is)是尾葉桉{E. urophylla)與巨桉iB. grandis)的雜交種，具有明顯的雜種優勢,其樹干通直、均勻，具有適應性廣、耐寒性強，速生豐產等優點，是優良的工業材料，其種植面積已占到了桉樹人工林面積的40%，成為我國南方熱帶、亞熱帶地區最重要的速生豐產造林樹種之一。近年來， 隨著桉樹人工林種植面積的不斷擴大和新品種的引進，桉樹病害爆發頻繁，給生產帶來巨大的損失。桉樹病害至今已發現有33種,其中葉部病害20種，枝干病害4種,根部病害5 種，苗期病害4種，在這些病害中，青枯病、猝倒病、灰霉病、白絹病、褐斑病、紫斑病、潰瘍病等是我國桉樹的常見病害。傳統育種方法雖然能利用作物本身或親緣種的抗性基因選育抗病品種，但存在著可利用的抗性品種資源少，選育時間長，耗資大等缺點。施用化學藥劑來防治桉樹病害并非完全有效，而且污染環境，易使病原物產生耐藥性等。近年來植物基因工程技術的不斷發展以及對植物和病原物相互作用的逐漸了解， 使得將外源抗性基因導入植物來提高抗病性成為一條有效途徑。通過轉基因技術可以打破傳統育種中種間不親和現象，消除雜交障礙，極大地拓寬了抗性基因的來源。基因工程育種可以通過外源基因的導入，針對目標性狀進行改良，具有快速性和定向性。因此，通過基因工程技術培育具有青枯菌抗性在內的廣譜抗性的桉樹新品種，可提高桉樹單位面積產量、 改善產品品質、減少農藥的用量，具有重要的經濟效益和生態效益。建立高效穩定的植物再生和遺傳轉化體系是轉基因的關鍵，而再生體系的建立又以高的移栽成活率為前提。在組培苗的培育過程中，尾巨桉苗從無菌室被移栽到外界環境時，由于各種因素的影響，使得移栽成活率受到很大的影響，嚴重時成活率為零。影響尾巨桉組培苗移栽成活率的因素很多，主要包括器官結構、生理功能和外界環境三個方面。器官結構方面，有些組培苗的根無根毛或有很少根毛，或是其輸導系統與莖的輸導系統不連通，移栽以后，根系吸收的水分和養分滿足不了植物本身的需求。葉片部分主要包括組培苗葉表角質層、蠟質層不發達或無；葉面無表皮毛或極少；葉組織間隙大，柵欄組織薄，易失水導致植株死亡。另外，由于組培苗幼嫩，結構較松散且含水量高，機械組織很不發達極易發生機械損傷，對病蟲害的抵抗力又很弱，組培苗移栽以后容易導致莖葉甚至整株死亡。生理功能方面，移栽前組培苗所需要的營養主要從培養基中獲得，光合作用效率低下，在這種情況下，葉片中的葉綠素含量很低，并且光合作用能力很弱。組培苗移栽以后會因為得不到足夠的有機營養而死亡，從而不利于移栽成活。外界環境方面，主要包括溫度、濕度、光照、微生物等因素。轉化植株由于被轉入了外源基因，在器官結構、生理和生化方面與未轉化的再生苗存在著一定的差異，同時又由于從子葉預培養到得到轉基因苗的培養時間與單純再生得到組培苗的時間相比明顯延長。長時間的高濕度生長環境影響了轉基因苗葉片的形態結構，如角質層變薄、氣孔調節失靈，從而導致轉基因苗移栽后散失的水分多于吸收的水分，對外界環境的變化所做出的反應也相應較大，因此，對轉基因苗來說，移栽成活變得更加因難。綜上所述，關于尾巨桉遺傳轉化過程中組培苗移栽方法偶見國內外文獻，但不系統，未見簡便有效的組培生根苗移栽管理方法的研究報道。

發明內容
本發明需要解決的技術問題在于提供一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，以提高尾巨桉轉基因組培苗的移栽成活率。為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，包括以下步驟
(1)、將生根良好的組培苗和培養瓶一起從恒溫光照培養箱移至室外自然環境中煉
苗；
(2)、煉苗完成后，用鑷子將培養瓶內的組培苗取出，用無菌水將組培苗根系上的瓊脂漂洗干凈；
(3)、將漂洗干凈的組培苗置于高錳酸鉀溶液中浸泡30秒，取出后，用無菌水漂洗；
(4)、將漂洗后的組培苗移植入栽培基質中，植入時以栽培基質覆蓋住組培苗的根系即
可；
(5)、移植完成后，用多菌靈噴一次組培苗，以濕潤栽培基質上部1/3 1/2即可；
(6)、對組培苗保濕保溫，直至組培苗新芽萌發；
(7 )、組培苗新芽萌發一個星期后，移入田間栽培。優選的，在步驟(I)中，煉苗時間為10 15天。優選的，所述的高錳酸鉀溶液的質量百分比濃度為0. 1%。優選的，在步驟(3)中，無菌水漂洗時間為I分鐘。優選的，所述的栽培基質由黃心土與腐殖土組成，黃心土與腐殖土的質量比例為 2 I0優選的，在步驟(4)中，先將所述的栽培基質置于高壓滅菌鍋中121°C滅菌50min， 栽培基質冷卻后再移植組培苗。優選的，所述的多菌靈的質量百分比濃度為0. 25%。優選的，在步驟(6)中，對組培苗進行保濕保溫的具體步驟為用透明塑料袋套住移栽組培苗的花盆，花盆邊緣四周用四根玻璃棒支撐塑料袋以形成一定的空間，用橡皮筋扎緊花盆外緣塑料袋以保濕，溫度維持在26°C 30°C。由于采用了上述的方法，本發明具有下述的有益效果
(I)操作簡便，容易實施，實用性強。(2)管理容易，成本低廉，移栽成活率可以達到98%以上。
具體實施方式
本發明所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，具體包括以下步驟
(I)、將生根良好的轉基因尾巨桉組培苗和培養瓶一起從恒溫光照培養箱移至室外自然環境中煉苗，煉苗時間為10 15天。(2)、煉苗完成后，用鑷子將培養瓶內的組培苗取出，用無菌水將組培苗根系上的瓊脂漂洗干凈，無菌水漂洗時間為I 2分鐘。(3)、將漂洗干凈的組培苗置于高錳酸鉀溶液中浸泡30秒，高錳酸鉀溶液的質量百分比濃度為0. 1%，浸泡后取出組培苗，用無菌水漂洗I分鐘，漂洗后的組培苗置于搪瓷盤上。(4)、將漂洗后的組培苗移植入栽培基質中。所述的栽培基質由黃心土 (或山地紅壤)與腐殖土組成，黃心土與腐殖土的質量比例為2 I。植入時，先將栽培基質裝于花盆當中，澆透水，然后置于高壓滅菌鍋中121°C滅菌50min。待滅菌栽培基質冷卻后，將組培苗移植入栽培基質中，以栽培基質輕輕覆蓋住組培苗的根系即可。(5)、移植完成后，用質量百分比濃度為0. 25%的多菌靈噴一次組培苗，以濕潤栽培基質上部1/3 1/2即可。(6)、對組培苗保濕保溫，直至組培苗新芽萌發。對組培苗進行保濕保溫的具體步驟為用透明塑料袋套住移栽組培苗的花盆，花盆邊緣四周用四根玻璃棒支撐塑料袋以形成一定的空間，用橡皮筋扎緊花盆外緣塑料袋以保濕，溫度維持在26 °C 30 °C，2周后可見新芽萌發，此時除去塑料袋。( 7 )、組培苗新芽萌發一個星期后，尾巨桉組培苗生長正常，移入田間栽培。總之，本發明雖然例舉了上述優選實施方式，但是應該說明，雖然本領域的技術人員可以進行各種變化和改型，除非這樣的變化和改型偏離了本發明的范圍，否則都應該包括在本發明的保護范圍內。
權利要求
1.一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于，包括以下步驟(1)、將生根良好的組培苗和培養瓶一起從恒溫光照培養箱移至室外自然環境中煉苗；(2)、煉苗完成后，用鑷子將培養瓶內的組培苗取出，用無菌水將組培苗根系上的瓊脂漂洗干凈；(3)、將漂洗干凈的組培苗置于高錳酸鉀溶液中浸泡30秒，取出后，用無菌水漂洗；(4)、將漂洗后的組培苗移植入栽培基質中，植入時以栽培基質覆蓋住組培苗的根系即可；(5)、移植完成后，用多菌靈噴一次組培苗，以濕潤栽培基質上部1/3 1/2即可；(6)、對組培苗保濕保溫，直至組培苗新芽萌發；(7)、組培苗新芽萌發一個星期后，移入田間栽培。
2.按照權利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于在步驟(I) 中，煉苗時間為10 15天。
3.按照權利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于所述的高錳酸鉀溶液的質量百分比濃度為0. 1%。
4.按照權利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于在步驟(3) 中，無菌水漂洗時間為I分鐘。
5.按照權利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于所述的栽培基質由黃心土與腐殖土組成，黃心土與腐殖土的質量比例為2 I。
6.按照權利要求5所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于在步驟(4) 中，先將所述的栽培基質置于高壓滅菌鍋中121°C滅菌50min，待栽培基質冷卻后再移植組培苗。
7.按照權利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于所述的多菌靈的質量百分比濃度為0. 25%。
8.按照權利要求I所述的一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法，其特征在于，在步驟(6) 中，對組培苗進行保濕保溫的具體步驟為用透明塑料袋套住移栽組培苗的花盆，花盆邊緣四周用四根玻璃棒支撐塑料袋以形成一定的空間，用橡皮筋扎緊花盆外緣塑料袋以保濕， 溫度維持在26°C 30°C。
全文摘要
本發明公開了一種尾巨桉組培苗簡易移栽方法。本發明包括以下步驟(1)、將生根良好的組培苗和培養瓶一起從恒溫光照培養箱移至室外自然環境中煉苗；(2)、煉苗完成后，用鑷子將培養瓶內的組培苗取出，用無菌水將組培苗根系上的瓊脂漂洗干凈；(3)、將漂洗干凈的組培苗置于高錳酸鉀溶液中浸泡30秒，取出后，用無菌水漂洗；(4)、將漂洗后的組培苗移植入栽培基質中，植入時以栽培基質覆蓋住組培苗的根系即可；(5)、移植完成后，用多菌靈噴一次組培苗，以濕潤栽培基質上部1/3～1/2即可；(6)、對組培苗保濕保溫，直至組培苗新芽萌發；(7)、組培苗新芽萌發一個星期后，移入田間栽培。本發明的移栽成活率可以達到98%以上。
文檔編號A01H4/00GK102524074SQ20121002492
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月6日 優先權日2012年2月6日
發明者曾富華, 歐陽樂軍, 黃真池 申請人:湛江師范學院