專利名稱：一種乳酸菌的誘變及選育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種乳酸菌的誘變及選育方法，具體地說，涉及菌株Lactobacillus 1. 2131的誘變及選育方法。
背景技術(shù)：
乳酸是重要的有機(jī)酸，乳酸、乳酸鹽及其衍生物，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于食品、飼料、醫(yī) 藥、皮革、印染、化工等領(lǐng)域。在食品工業(yè)上廣泛用作酸味劑、防腐劑和還原劑。近年來，在為 消除塑料制品所帶來的“白色污染”所造成的環(huán)境危機(jī)的研究中，開發(fā)出以L-乳酸為單體 經(jīng)化學(xué)合成的生物工程材料聚L-乳酸，是一種生物可降解塑料，可完全為生物降解吸收， 最終形成二氧化碳和水，不污染環(huán)境。由于人體只能代謝L-乳酸，世界衛(wèi)生組織提倡在食 品、醫(yī)藥領(lǐng)域廣泛使用L-乳酸，L-乳酸的需求量在不斷擴(kuò)大。乳酸可以通過化學(xué)合成法、酶法或發(fā)酵法三種方式得到，但是基于發(fā)酵法能夠?qū)?一的得到L-乳酸或D-乳酸，并且清潔無污染，因此發(fā)酵法被廣泛應(yīng)用于L-乳酸的生產(chǎn)。利 用乳酸菌發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸具有高溫發(fā)酵不易染菌，光學(xué)純度高，菌體易于發(fā)酵液分離等特 點(diǎn)，利用乳酸菌發(fā)酵成為大規(guī)模生產(chǎn)L-乳酸的趨勢。為了降低L-乳酸的制備成本，提高乳酸生產(chǎn)質(zhì)量，國內(nèi)外對乳酸生產(chǎn)過程進(jìn)行了 大量研究，主要包括低價原料的開發(fā)利用，發(fā)酵強(qiáng)度的優(yōu)化，乳酸分離提取工藝的優(yōu)化這 三個方面。目前用于L-乳酸生產(chǎn)的原料主要有淀粉、蔗糖、葡萄糖、糖蜜等。我國每年浪費(fèi) 或低質(zhì)量利用的木質(zhì)纖維材料總共約10億噸，其中農(nóng)作物秸稈一項就大約有7億多噸，其 主要成分為纖維素、半纖維素、木質(zhì)素，利用酸化處理農(nóng)作物秸稈制備秸稈糖，以秸稈糖作 為發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸的原料，具有廣闊的市場前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種乳酸菌的誘變及選育方法，誘變后的菌種可以有效利用 秸稈糖發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種乳酸菌的誘變及選育方法，其是將出發(fā)菌株 Lactobacillus 1. 2131用無菌水配制成菌懸液后在紫外燈下照射，然后涂布于篩選平板上 進(jìn)行培養(yǎng)，得到突變株；其中，篩選平板的培養(yǎng)基配方為葡萄糖50克/升、木糖5 25克/升、酵母粉10 克/升、碳酸鈣20克/升、瓊脂粉10克/升，其余成分為水，pH為6. 0。葡萄糖20-60克/ 升、木糖5 25克/升、酵母粉5-10克/升、碳酸鈣10-40克/升、瓊脂粉5_10克/升，其 余成分為水，PH為6. 0。優(yōu)選篩選平板的培養(yǎng)基配方為葡萄糖30-50克/升、木糖10 20克/升、酵母粉8-10克/升、碳酸鈣20-40克/升、瓊脂粉8-10克/升，其余成分為水， pH 為 6.0。本發(fā)明的目的還可以采用以下的技術(shù)措施來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的一種乳酸菌的誘變及選育方法，包括步驟
1)在室溫下，從菌種Lactobacillus 1. 2131的斜面上刮菌，用無菌水配制成菌懸 液濃度為IO6 IO8個細(xì)胞/mL。2)用紫外線對菌懸液進(jìn)行照射，紫外線燈為20 30w，照射距離為20 40cm(垂 直距離)，照射時間為30 150s。優(yōu)選照射的垂直距離為30 35cm，照射時間為60 120s。3)把經(jīng)紫外線照射處理的菌懸液用無菌水稀釋100 10000倍后，涂布于篩選平 板上進(jìn)行培養(yǎng)，獲得誘變的、遺傳性狀穩(wěn)定的、秸稈糖發(fā)酵單位提高的突變株。本發(fā)明以不能完全利用秸稈糖作為發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸原料的菌種Lactobacillus 1. 2131作為出發(fā)菌株，通過紫外線照射的方法誘變得到遺傳性狀穩(wěn)定的、秸稈糖發(fā)酵單位 提高10%以上的突變株。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1在室溫下，從菌種Lactobacillus 1. 2131的斜面上刮菌，用無菌水配制成菌懸液 濃度為IO6 IO8個細(xì)胞/mL。取5mL菌懸液移入帶有玻璃珠的無菌三角燒瓶中，置于20W 紫外燈下30cm處(垂直距離)，邊攪拌邊照射，照射時間為90s。處理后的菌懸液稀釋100 倍后涂布于篩選平板(葡萄糖40克/升、木糖25克/升、酵母粉9克/升、碳酸鈣30克/ 升、瓊脂粉9克/升，其余成分為水，pH為6. 0)上培養(yǎng)。篩選得到1株能夠有效利用含木 糖的培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸原料的突變株。實(shí)施例2在室溫下，從菌種Lactobacillus 1. 2131的斜面上刮菌，用無菌水配制成菌懸液 濃度為IO6 IO8個細(xì)胞/mL。取5mL菌懸液移入帶有玻璃珠的無菌三角燒瓶中，置于20W 紫外燈下35cm處(垂直距離)，邊攪拌邊照射，照射時間為120s。處理后的菌懸液稀釋1000 倍后涂布于篩選平板(葡萄糖30克/升、木糖20克/升、酵母粉8克/升、碳酸鈣20克/ 升、瓊脂粉8克/升，其余成分為水，pH為6. 0)上培養(yǎng)。篩選得到1株能夠有效利用含木 糖的培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸原料的突變株。實(shí)施例3在室溫下，從菌種Lactobacillus 1. 2131的斜面上刮菌，用無菌水配制成菌懸液 濃度為IO6 IO8個細(xì)胞/mL。取5mL菌懸液移入帶有玻璃珠的無菌三角燒瓶中，置于30W 紫外燈下20cm處(垂直距離)，邊攪拌邊照射，照射時間為60s。處理后的菌懸液稀釋10000 倍后涂布于篩選平板(葡萄糖50克/升、木糖15克/升、酵母粉10克/升、碳酸鈣40克 /升、瓊脂粉10克/升，其余成分為水，PH為6. 0)上培養(yǎng)。篩選得到1株能夠有效利用含 木糖的培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸原料的突變株。實(shí)施例4在室溫下，從菌種Lactobacillus 1. 2131的斜面上刮菌，用無菌水配制成菌懸液 濃度為IO6 IO8個細(xì)胞/mL。取5mL菌懸液移入帶有玻璃珠的無菌三角燒瓶中，置于30W 紫外燈下40cm處(垂直距離)，邊攪拌邊照射，照射時間為90s。處理后的菌懸液稀釋1000 倍后涂布于篩選平板(葡萄糖30克/升、木糖10克/升、酵母粉10克/升、碳酸鈣20克/升、瓊脂粉10克/升，其余成分為水，PH為6. 0)上培養(yǎng)。篩選得到1株能夠有效利用含 木糖的培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸原料的突變株。實(shí)施例5在室溫下，從菌種Lactobacillus 1. 2131的斜面上刮菌，用無菌水配制成菌懸液 濃度為IO6 IO8個細(xì)胞/mL。取5mL菌懸液移入帶有玻璃珠的無菌三角燒瓶中，置于20W 紫外燈下20cm處(垂直距離)，邊攪拌邊照射，照射時間為60s。處理后的菌懸液稀釋10000 倍后涂布于篩選平板(葡萄糖50克/升、木糖10克/升、酵母粉8克/升、碳酸鈣40克/ 升、瓊脂粉8克/升，其余成分為水，pH為6. 0)上培養(yǎng)。篩選得到1株能夠有效利用含木 糖的培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)L-乳酸原料的突變株。試驗例將實(shí)施例1 5得到的突變株進(jìn)行發(fā)酵實(shí)驗，以原始Lactobacillusl. 2131作為 陰性對照，發(fā)酵實(shí)驗使用的木糖培養(yǎng)基為葡萄糖30-50克/升、木糖25克/升、酵母粉 8-10克/升、碳酸鈣20-40克/升、瓊脂粉8-10克/升，其余成分為水，pH為6. 0。發(fā)酵48 小時，結(jié)果如表1所示表1本發(fā)明的突變株發(fā)酵實(shí)驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種乳酸菌的誘變及選育方法，其特征在于，將出發(fā)菌株Lactobacillus 1. 2131用 無菌水配制成菌懸液后在紫外燈下照射，然后涂布于篩選平板上進(jìn)行培養(yǎng)，得到突變株；其中，篩選平板的培養(yǎng)基配方為葡萄糖20-60克/升、木糖5 25克/升、酵母粉5-10 克/升、碳酸鈣10-40克/升、瓊脂粉5-10克/升，其余成分為水，pH為6. 0。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，用無菌水配制成的菌懸液濃度為IO6 IO8個細(xì)胞/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，照射菌懸液的紫外燈為20 30w，照 射的垂直距離為20 40cm，照射時間為30 150s。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，照射的垂直距離為30 35cm，照射時間 為 60 120s。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，篩選平板的培養(yǎng)基配方為葡萄糖 30-50克/升、木糖10 20克/升、酵母粉8-10克/升、碳酸鈣20-40克/升、瓊脂粉8_10 克/升，其余成分為水，pH為6. 0。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種乳酸菌的誘變及選育方法，該方法包括以下過程在室溫下，將出發(fā)菌株Lactobacillus 1.2131用無菌水配制成菌懸液，然后將菌懸液移至裝有玻璃珠的三角燒瓶內(nèi)，用紫外線照射一定時間，然后把經(jīng)紫外線照射處理的菌懸液經(jīng)無菌水稀釋后，涂布于篩選平板上進(jìn)行培養(yǎng)，獲得誘變的、遺傳性狀穩(wěn)定的、秸稈糖發(fā)酵單位提高的突變株。
文檔編號C12N15/01GK102134565SQ20101061087
公開日2011年7月27日 申請日期2010年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月23日
發(fā)明者尚海濤, 崔剛, 莊韜, 李榮杰 申請人:安徽豐原發(fā)酵技術(shù)工程研究有限公司