專利名稱：一種快速篩選水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治用藥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治藥物的篩選，具體是一種快速篩選水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治用藥的方法。
背景技術(shù)：
細(xì)菌性疾病是由細(xì)菌引起的水產(chǎn)動(dòng)物疾病，是水產(chǎn)養(yǎng)殖中最常見(jiàn)也是危害最大的一類疾病，其在各年病害爆發(fā)病例中比例最大，給水產(chǎn)養(yǎng)殖造成的經(jīng)濟(jì)損失最為嚴(yán)重。因此，能夠有針對(duì)性的、及時(shí)準(zhǔn)確地使用藥物殺滅病原菌是有效控制水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性病害的重要措施。目前，水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治藥物篩選方法一般先進(jìn)行病原菌的分離純化后再通過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選出敏感性藥物，這個(gè)過(guò)程一般至少需要4飛天，而市場(chǎng)上銷售的快速篩選試劑盒也因保藏時(shí)間短、容易污染而未受到廣大漁民的充分認(rèn)可。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種快速篩選水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治用藥的方法。
本發(fā)明提供的一種快速篩選水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治用藥的方法，包括如下步驟1)選取瀕死的患病水產(chǎn)動(dòng)物，用75%酒精反復(fù)擦拭體表后置于無(wú)菌操作臺(tái)中，取其病灶組織于含營(yíng)養(yǎng)肉湯的具塞塑料離心管中，于35 37°C、200r/min振蕩1 至具塞塑料離心管中的營(yíng)養(yǎng)肉湯渾濁；2)無(wú)菌條件下用ImL玻璃移液管吸取0.2 mL具塞塑料離心管中渾濁液體于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，在用消毒的涂布棒在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上反復(fù)涂布均勻后，再用消毒的鑷子夾取不同藥敏紙片分別貼到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，最后將貼有不同藥敏紙片的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板于35 37°C 培養(yǎng)12 1他后測(cè)定抑菌環(huán)直徑(mm)，并根據(jù)杭州天和微生物試劑有限公司的紙片法藥敏試驗(yàn)抑菌環(huán)直徑判定標(biāo)準(zhǔn)，篩選出高度敏感藥物作為防治藥物。
所述的藥敏紙片為復(fù)方新諾明、復(fù)合磺胺、氟哌酸、慶大霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、左氟沙星、氨芐青霉素和多粘菌素等的藥敏紙片。
所述的水產(chǎn)動(dòng)物為草魚(yú)、鯽魚(yú)、鰱魚(yú)或虎紋蛙等。
與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明能夠及時(shí)準(zhǔn)確地篩選出水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性病害的防治藥物， 可提高水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥的準(zhǔn)確性與時(shí)效性。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例11.材料與方法 1. 1實(shí)驗(yàn)材料具有典型細(xì)菌性敗血癥病癥的草魚(yú)，采集于上海崇明水產(chǎn)技術(shù)推廣站的養(yǎng)殖池中；復(fù)方新諾明、復(fù)合磺胺、氟哌酸、慶大霉素、恩諾沙星、氧氟沙星、左氟沙星、氨芐青霉素、多粘菌素等藥敏紙片，購(gòu)于杭州天和微生物試劑有限公司；具塞塑料離心管、營(yíng)養(yǎng)肉湯、營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；含營(yíng)養(yǎng)肉湯的具塞塑料離心管，將營(yíng)養(yǎng)肉湯分裝于50 mL具塞塑料離心管，20 mL/管，于121°C滅菌20min，4°C冰箱保存?zhèn)溆?；ImL玻璃移液管，于121°C滅菌20min備用。
1. 2防治藥物的快速篩選方法 1. 2. 1解剖用具的消毒實(shí)驗(yàn)用剪刀、鑷子、解剖盤、涂布棒等均用75%酒精反復(fù)擦拭消毒，于無(wú)菌操作臺(tái)中紫外照射備用1. 2. 2病灶組織的選取與溫控振蕩選取瀕死的患病草魚(yú)，用75%酒精反復(fù)擦拭體表后在無(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行常規(guī)無(wú)菌操作，取其病灶組織于含營(yíng)養(yǎng)肉湯的具塞塑料離心管中，于35 37°C、200r/min振蕩1 至具塞塑料離心管中的營(yíng)養(yǎng)肉湯渾濁。
1.2.3防治藥物的篩選無(wú)菌條件下用ImL玻璃移液管吸取0. 2 mL具塞塑料離心管中渾濁液體于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，在用消毒的涂布棒在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上反復(fù)涂布均勻后，再用消毒的鑷子夾取各藥敏紙片貼到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，最后將貼有藥敏紙片的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板于35 37°C培養(yǎng)12 1他后測(cè)定抑菌環(huán)直徑(mm)，并根據(jù)杭州天和微生物試劑有限公司的紙片法藥敏試驗(yàn)抑菌環(huán)直徑判定標(biāo)準(zhǔn)，篩選出高度敏感藥物作為防治藥物。
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各藥物在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上產(chǎn)生的抑菌環(huán)直徑大小依次為復(fù)方新諾明 > 慶大霉素 > 復(fù)合磺胺 > 氟哌酸 > 恩諾沙星 > 左氟沙星、多粘菌素 > 氧氟沙星>氨芐青霉素。根據(jù)紙片法藥敏試驗(yàn)抑菌環(huán)直徑判定標(biāo)準(zhǔn)，確定復(fù)方新諾明、慶大霉素、 多粘菌素為高敏藥物，為草魚(yú)細(xì)菌性敗血癥的首選防治藥物。
表1不同藥物在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上產(chǎn)生的抑菌環(huán)直徑及其敏感程度
權(quán)利要求
1.一種快速篩選水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治用藥的方法，其特征在于，包括如下步驟1)選取瀕死的患病水產(chǎn)動(dòng)物，用75%酒精反復(fù)擦拭體表后置于無(wú)菌操作臺(tái)中，取其病灶組織于含營(yíng)養(yǎng)肉湯的具塞塑料離心管中，于35 37°C、200r/min振蕩1 至具塞塑料離心管中的營(yíng)養(yǎng)肉湯渾濁；2)無(wú)菌條件下用ImL玻璃移液管吸取0.2 mL具塞塑料離心管中渾濁液體于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，在用消毒的涂布棒在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上反復(fù)涂布均勻后，再用消毒的鑷子夾取不同藥敏紙片分別貼到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，最后將貼有不同藥敏紙片的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板于35 37°C 培養(yǎng)12 1他后測(cè)定抑菌環(huán)直徑，并根據(jù)杭州天和微生物試劑有限公司的紙片法藥敏試驗(yàn)抑菌環(huán)直徑判定標(biāo)準(zhǔn)，篩選出高度敏感藥物作為防治藥物。
2.一種快速篩選水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治用藥的方法，其特征在于，所述的水產(chǎn)動(dòng)物為草魚(yú)、鯽魚(yú)、鰱魚(yú)或虎紋蛙。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種快速篩選水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性疾病防治用藥的方法，包括如下步驟1)選取瀕死的患病水產(chǎn)動(dòng)物，用酒精反復(fù)擦拭體表后取其病灶組織于含營(yíng)養(yǎng)肉湯的具塞塑料離心管中，于35~37℃、200r/min振蕩至具塞塑料離心管中的營(yíng)養(yǎng)肉湯渾濁；2)無(wú)菌條件下用1mL玻璃移液管吸取0.2mL具塞塑料離心管中渾濁液體于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板中，反復(fù)涂布均勻后，再取不同藥敏紙片貼到營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，并于35~37℃培養(yǎng)12~18h后測(cè)定抑菌環(huán)直徑，并根據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)，篩選出高度敏感藥物作為防治藥物。本發(fā)明能夠及時(shí)準(zhǔn)確地篩選出水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性病害的防治藥物，可提高水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥的準(zhǔn)確性與時(shí)效性。
文檔編號(hào)C12Q1/18GK102505040SQ20111034759
公開(kāi)日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月7日
發(fā)明者何珊, 衛(wèi)若鵬, 曹海鵬 申請(qǐng)人:上海海洋大學(xué), 山西衛(wèi)氏魚(yú)康實(shí)業(yè)有限公司