專利名稱：異基因過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病的細(xì)胞類生物藥物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于異基因過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病的藥物，尤其涉及一種過繼性細(xì)胞免疫治療MDS、或治療白血病的生物類藥物、及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前認(rèn)為多種血液系統(tǒng)疾病，包括紅細(xì)胞疾病，如再生障礙性貧血、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)等；白細(xì)胞疾病，如各種白血病、惡性淋巴瘤、惡性淋巴-網(wǎng)狀細(xì)胞增生癥、漿細(xì)胞病、組織細(xì)胞增生性疾病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生性疾病(真性紅細(xì)胞增多癥、特發(fā)性血小板增多癥、骨髓纖維化)等都是起源于造血干細(xì)胞或多能干細(xì)胞的克隆性 病。具有代表性的是骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic Syndromes，MDSXMDS是一種起源于造血髓系定向干細(xì)胞或多能干細(xì)胞的異質(zhì)性克隆性病，特點(diǎn)為骨髓增生活躍，異?？寺〖?xì)胞在骨髓中分化、成熟障礙，出現(xiàn)病態(tài)造血，在骨髓原位或釋放入血后不久被破壞，導(dǎo)致造血效率低下，外周血細(xì)胞減少，細(xì)胞功能異常，表現(xiàn)為難治性一系或多系細(xì)胞減少的血液病。MDS是一種高度克隆性的惡性血液系統(tǒng)疾病。發(fā)病率約10 / 10萬 12 / 10萬人口，全球范圍約有30萬患者。任何年齡均可發(fā)病，男女之比為2 :1。MDS多累及中老年人，約80%患者大于60歲。MDS臨床表現(xiàn)主要為貧血，幾乎所有的MDS患者有貧血癥狀，如乏力、疲倦。約60%的MDS患者有中性粒細(xì)胞減少，由于同時存在中性粒細(xì)胞功能低下，使得MDS患者容易發(fā)生感染，約有20%的MDS死于感染。約20%的MDS患者有出血表現(xiàn)，常見于皮膚，呼吸道，消化道等，也有顱內(nèi)出血者。部分患者可有肝，脾，淋巴結(jié)輕度腫大，少數(shù)患者可有胸骨壓痛，肋骨或四肢關(guān)節(jié)痛。40% 60%的MDS患者有血小板減少，隨著疾病進(jìn)展可出現(xiàn)進(jìn)行性血小板減少。根據(jù)血液學(xué)和骨髓形態(tài)學(xué)的特點(diǎn)，1982年FAB協(xié)作組將MDS分成5種類型I)難治性貧血(RA refractory anemia):臨床以貧血為主，網(wǎng)織紅細(xì)胞減少,夕卜周血中中性粒細(xì)胞和血小板大多也是減少的。外周血中原始細(xì)胞極少見(<1%)。骨髓增生活躍或明顯活躍，紅系增生多較明顯，環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞〈15%，紅細(xì)胞形態(tài)異常多見。粒系和巨核系細(xì)胞也有一定形態(tài)異常，但通常較輕。骨髓內(nèi)原始細(xì)胞〈5%。2)難治性貧血伴環(huán)形鐵粒細(xì)胞增多(RARS refractory anemia with ringsideroblasts):與RA的主要區(qū)別是出現(xiàn)環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞，占骨髓有核紅細(xì)胞的15%以上。外周血白細(xì)胞和血小板計數(shù)多數(shù)正常，血清鐵蛋白增高。3)難治性貧血伴原始細(xì)胞增多(RAEB refractory anemia with excess blasts)外周血中三系細(xì)胞大多數(shù)均有不同程度減少，少數(shù)病例只有兩系細(xì)胞減少。外周血常有原始細(xì)胞出現(xiàn)，但〈5%。骨髓中原始細(xì)胞在5% 19%間。粒系和紅系幼稚細(xì)胞數(shù)量增多，形態(tài)改變明顯。
4)慢性粒單核細(xì)胞白血病(CMML chronic myelomonocytic leukemia):多見于年老者。肝、脾腫大多見。有貧血及血小板減少。最主要的特點(diǎn)是血液和骨髓中有較多的單核細(xì)胞。外周血中單核細(xì)胞的絕對數(shù)>1X109 / L，常伴有中性粒細(xì)胞增多及形態(tài)異常。外周血中原始細(xì)胞〈5%。骨髓增生明顯活躍，粒紅比率增高，原始細(xì)胞在5% 20%。5)難治性貧血伴原始細(xì)胞增多轉(zhuǎn)變型(RAEB-T refractory anemia with excessblasts in transformation):血液及骨髓除具有RAEB的一些改變外,符合以下特點(diǎn)①外周血中原始細(xì)胞>;②骨髓中原始細(xì)胞> 20%，但〈30% ;③原始細(xì)胞中可見Auer小體；④約50%以上病人演變?yōu)榧毙园籽。颊呱鏁r間短，多數(shù)不超過一年。WHO提出了新的MDS分型標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為骨髓原始細(xì)胞達(dá)20 %即為急性白血病，將RAEB-t歸為急性髓系白血病(AML)，并將CMML歸為MDS / MPD (骨髓增生異常綜合征/骨髓增殖性疾病)，保留了 FAB的RA、RAS、RAEB ;并且將RA或RAS中伴有2系或3系增生異常 者單獨(dú)列為難治性細(xì)胞減少伴多系增生異常(refractory cytopenia with multilineagedysplasia，RCMD)，將僅有5號染色體長臂缺失的RA獨(dú)立為5q-綜合征；還新增加了 MDS未能分類(u-MDS)。目前臨床MDS分型中平行使用著FAB和WHO標(biāo)準(zhǔn)。RA和RAS患者多以貧血為主，臨床進(jìn)展緩慢，中位生存期3飛年，白血病轉(zhuǎn)化率約5% 15%。RAEB和RAEB-t多以全血細(xì)胞減少為主，貧血、出血及感染易見，可伴有脾腫大，病情進(jìn)展快，中位生存時間分別為12個月、5個月，白血病轉(zhuǎn)化率高達(dá)CMML以貧血為主，可有感染和出血，脾腫大常見，中位生存期約20個月，約30%轉(zhuǎn)變?yōu)锳ML。MDS通常起病緩慢，逐漸進(jìn)展，少數(shù)患者起病急劇，從發(fā)病開始一年之內(nèi)約有50%以上轉(zhuǎn)化為白血病，MDS具有較高的死亡率，其死亡原因除白血病之外，多數(shù)由于感染，出血，尤其是顱內(nèi)出血。原發(fā)性MDS的病因尚不明確，推測是由于生物、化學(xué)、或物理等因素引起基因突變，染色體異常使某個惡變的細(xì)胞克隆性增生，業(yè)已公認(rèn)，誘變劑如病毒、某些藥物(如化療藥)、輻射(放療)，工業(yè)反應(yīng)劑(如苯，聚乙烯)以及環(huán)境污染等的可致癌作用，誘變齊阿引起染色體的重排或基因重排，也可能只引起基因表達(dá)的改變導(dǎo)致MDS。繼發(fā)性MDS患者常有明顯發(fā)病誘因，苯類芳香烴化合物、化療藥物尤其是烷化劑、放射線均可誘導(dǎo)細(xì)胞基因突變而導(dǎo)致MDS或其他腫瘤發(fā)生。通過G6H)同工酶、限制性片段長度多態(tài)性分析等克隆分析技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，MDS是起源于造血干細(xì)胞的克隆性疾病。異?？寺〖?xì)胞在骨髓中分化、成熟障礙，出現(xiàn)病態(tài)造血，在骨髓原位或釋放入血后不久被破壞，導(dǎo)致無效造血。部分MDS患者可發(fā)現(xiàn)有原癌基因突變(如N-ras基因突變)或染色體異常(如+8、_7)，這些基因的異?？赡芤矃⑴cMDS的發(fā)生和發(fā)展。MDS終末細(xì)胞的功能，如中性粒細(xì)胞超氧陰離子水平、堿性磷酸酶也較正常低下。但上述基因改變多在MDS較晚期RAEB、RAEB-T型患者中發(fā)生，在MDS早期RA、RAS中較少，這說明用基因突變尚難解釋全部MDS患者發(fā)病原因。過度增生的異常造血干細(xì)胞克隆常有兩種演變途徑一為由于過度增生逐漸演變?yōu)樵煅芰λネ?，骨髓可轉(zhuǎn)為增生低下，臨床表現(xiàn)為造血功能衰竭，為半數(shù)以上MDS患者死亡原因。另一種途徑演變?yōu)榧毙园籽?，MDS病程中約有三分之一的患者轉(zhuǎn)化為白血病，多為 AML。治療MDS的主要目的是減少因貧血、白細(xì)胞減少、血小板減少引起的并發(fā)癥，提高患者的生活質(zhì)量。MDS國際預(yù)后積分系統(tǒng)(IPSS)是依據(jù)患者血細(xì)胞減少的數(shù)量、骨髓中原始細(xì)胞比例及染色體核型評價預(yù)后，是指導(dǎo)治療的一個基本工具低危O分；中危-I(Int-I) 0. 5 I分；中危-2 (Int-2) I. 5 2分；高危彡2. 5分。對于低?；蛘逫nt-I級患者治療主要是改善生活質(zhì)量，采用支持治療、促造血、誘導(dǎo)分化和生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑等治療，而Int-2級和高危組MDS主要是提高存活，采用AML的聯(lián)合化療方案和造血干細(xì)胞移植等。(一)支持治療對于繼發(fā)性MDS有病因可尋者應(yīng)盡可能停止接觸可疑致病因素的物質(zhì)或環(huán)境。根據(jù)病情選用成分輸血。有感染者根據(jù)病原菌選擇敏感抗生素及時控制感染。MDS伴巨幼貧血者可補(bǔ)充葉酸、維生素B12，RARS可給予維生素B6。(二)雄性激素，如司坦唑醇、11-庚酸睪丸酮等 司坦唑醇(康力龍)對核型正常的RA有效。達(dá)那唑?qū)盗垷o效者可能有效,對血小板減少有效。治療有效后血紅蛋白、粒細(xì)胞及血小板數(shù)量增加。(三)腎上腺皮質(zhì)激素對MDS合并自身免疫性疾病，如自身免疫性溶血性貧血、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、大血管炎或純紅細(xì)胞再生障礙性貧血有效。用藥3 4周后血象好轉(zhuǎn)，對造血細(xì)胞形態(tài)異常無作用。(三)造血生長因子，如G-CSF、紅細(xì)胞生成素(Epo)等適用于中、低?；颊?，以EPO應(yīng)用最廣泛、最安全，與G-CSF、GM-CSF聯(lián)用可增加療效，但是有促進(jìn)細(xì)胞向白血病轉(zhuǎn)化之慮。白細(xì)胞介素3 (IL-3)及TPO可酌情應(yīng)用。它們刺激粒細(xì)胞和血小板生成，很少影響紅細(xì)胞。(I) GM-CSF和G-CSF :可提高外周血中的粒細(xì)胞、單核細(xì)胞數(shù)，主要適用于白細(xì)胞減少并感染者，尤其是抗生素治療無效或疑有真菌感染者。(2)EP0 :對無輸血史，血清EPO < 100^200MU / ml的女性、核型正常，對輸血依賴性低者療效較好。EPO還能激活血小板活性，對血小板減少者有益。與維甲酸或G-CSF聯(lián)用可加強(qiáng)EPO作用。(3)干擾素有直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用，可抑制白血病克隆，目前臨床很少應(yīng)用。(五)誘導(dǎo)分化治療可使用全反式維A酸和1，1，25 (OH)2Vit D3，少部分患者血象改善。造血生長因子(如G-CSF聯(lián)合Epo)也有誘導(dǎo)分化劑作用。(I)維甲酸維甲酸顯示有抑制惡性克隆生長或促使白血病細(xì)胞分化作用。ATRA+EP0是治療低、中危MDS的一種有效的、能耐受的治療方案。(2) I，25 (OH)2Vit D3:羅蓋全2iig / d，至少用12周，與維甲酸合用可能效果更好?？梢种萍?xì)胞增殖、促進(jìn)分化和調(diào)節(jié)免疫功能，并有抗骨髓纖維化作用。(3)砷劑(AT0):三氧化二砷能抑制腫瘤細(xì)胞增殖，阻止腫瘤血管生成新生，誘導(dǎo)細(xì)胞分化成熟、凋亡，提高機(jī)體免疫功能等機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用。對白血病細(xì)胞有抑制生長與促凋亡作用，小劑量砷劑有誘導(dǎo)分化作用，對部分患者有效。三氧化二砷治療MDS有效，且較安全，不良反應(yīng)少，成為治療該病的一種新手段，總的有效率50%。(六)化學(xué)治療化學(xué)治療是清除MDS惡性克隆，恢復(fù)正常造血，治療高危MDS的主要方法。
(I)強(qiáng)烈化療含蒽環(huán)類的方案，I (IDA)A方案優(yōu)于F (氟達(dá)拉濱)A和T (拓?fù)涮婵?A方案。而中劑量Ara-C聯(lián)合IDA和拓?fù)涮婵祵﹄y治性/復(fù)發(fā)性AML和高危MDS有明顯療效，可作為挽救治療措施。含有米托蒽醌的方案不適宜老年的MDS患者。在化療方案中加入G-CSF則能夠提高緩解率、改善患者的臨床情況、增加能接受AIIo-SCT的病例數(shù)。(2)小劑量化療對于老年MDS患者，由于強(qiáng)烈化療的毒副作用明顯，不適宜強(qiáng)化療，則可選用小劑量化療以延長生存期，改善生存質(zhì)量。a)小劑量阿糖胞苷與G-CSF聯(lián)合應(yīng)用可提高療效，對于高危MDS，則可提高細(xì)胞數(shù)，減少輸血。劑量為5 25mg / d皮下注射10 20天為一療程，停藥2周后再重復(fù)此療程，副作用為骨髓抑制 。b)小劑量馬法蘭可試用于治療老年、高危MDS患者，其中骨髓增生減低性MDS對小劑量馬法蘭的反應(yīng)更好。常用劑量為2mg / d，口服，總量90 140mg。無明顯副作用。c)CAG 方案=Ara-C IOmg / m2，ql2hX 14 天，阿克拉霉素 14mg / m2，X4 天，G-CSF300 u g / d，X 14天，可試用于RAEB患者，取得了可喜的療效。d)小劑量(高)三尖杉酯堿小劑量高三尖杉酯堿具有誘導(dǎo)分化和細(xì)胞毒雙重作用。對老年體弱、有心、肝、腎損害的RAEB和RAEB-T患者，酌情應(yīng)用。(七)抗凋亡治療由于細(xì)胞凋亡異常在MDS發(fā)病中起著一定作用，故抗凋亡治療取得了一定的療效。(I)氨磷汀(阿米福汀，Amifostine)為磷酸化有機(jī)醇廣譜細(xì)胞保護(hù)劑，其體內(nèi)代謝產(chǎn)物有抗氧化保護(hù)正常干/祖細(xì)胞不被化療藥物殺傷的作用。能夠減少細(xì)胞凋亡和刺激骨髓造血祖細(xì)胞的生長。若加用EPO和G-CSF則可改善造血，且無明顯毒副作用。(2)己酮可可堿(Pentoxifiline)為黃嘌呤衍生物，可干擾TNF-a ,TNF-0與IL-1等因子，減少其在MDS發(fā)病中的促凋亡作用。(A)抗血管生成藥物沙利度胺(反應(yīng)停，thalidomide)具有抑制TNF- a的產(chǎn)生和抗血管生成作用，能夠有效改善某些MDS患者的細(xì)胞減少。用法150 200mg / d。對改善貧血，減少輸血依賴性有一定療效，骨髓中原始細(xì)胞數(shù)較少者療效好。副作用主要有乏力、嗜睡、便秘、水腫、肌肉痛、皮疹等。近來雷利度胺(來那度胺Lenalidomide)是一種具備抗血管增生和抗腫瘤活性的新一代免疫調(diào)節(jié)劑，臨床試驗證實該藥對伴5q_染色體異常的輸血依賴性低危和中危-I骨髓增生異常綜合征和多發(fā)性骨髓瘤療效肯定。(九)免疫抑制劑需進(jìn)行治療的低危或中?；颊?如果不適合進(jìn)行化療或干細(xì)胞移植(SCT),應(yīng)接受I個療程抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)或環(huán)孢菌素A治療。ATG和Csk :通過抑制Ts細(xì)胞來調(diào)節(jié)MDS的免疫反應(yīng)，促進(jìn)MDS造血細(xì)胞生長，二者無交叉耐藥。Csk同時有免疫抑制、抗凋亡雙重作用，并可逆轉(zhuǎn)耐藥，對⑶4 /⑶8比值倒置，TCR-a或-0基因重排的患者療效較好。(十)去甲基化藥物達(dá)珂(地西他濱DACOGEN) :Dacogen適用于IPSS評分系統(tǒng)中中危_2和高危的初治，復(fù)治骨髓增生異常綜合征(MDS)患者，包括原發(fā)性和繼發(fā)性的MDS，按照FAB分型所有的亞型。地西他濱是一個去甲基化藥物，屬于胞嘧啶核苷酸類似物，其作用機(jī)制獨(dú)特。它能逆轉(zhuǎn)異常DNA甲基化，摻入DNA序列捕獲DNA轉(zhuǎn)移酶，消耗細(xì)胞內(nèi)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，它具有比阿糖胞苷和氮雜包苷更高的體內(nèi)細(xì)胞毒性，它比氮雜包苷具有更強(qiáng)烈的誘導(dǎo)細(xì)胞分化能力和抑制甲基化的能力，因而，在腫瘤性疾病的治療中具有不可替代的優(yōu)勢和效率。地西他濱的使用方案為20mg / m2，每天一次，I小時靜脈注射，連續(xù)5天，每4周一個療程。地西他濱治療總體安全性較高，嚴(yán)重(3 4級)的不良反應(yīng)發(fā)生率低(< 5% )，主要副作用(不良反應(yīng))是中性粒細(xì)胞減少，血小板減少，貧血等骨髓抑制表現(xiàn)，但與強(qiáng)化化療相比，其治療相關(guān)死亡率明顯降低(P=O. 001)。其他毒副作用發(fā)生率相對較低，通過對癥處理或減量或延遲用藥可緩解。達(dá)珂禁用于已知對地西他濱過敏的患者。(-| )異基因造血干細(xì)胞移植異基因干細(xì)胞移植是目前將MDS治愈的唯一希望。AIIo-SCT的適應(yīng)證是年齡<55歲，有HLA相合供體的高危和中?；颊?，對低危患者應(yīng)嚴(yán)格掌握治療指征。而非清髓性干細(xì)胞移植適用于年齡較大或內(nèi)臟功能不全的患者。
由于MDS多為老年患者，移植相關(guān)死亡率偏高，低危患者既往較少移植。近來隨著降低強(qiáng)度的非清髓性造血干細(xì)胞移植技術(shù)日益成熟，移植能用于更多低危MDS患者。IPSS-Int-2和高危者，尤其是年輕、原始細(xì)胞增多和伴有預(yù)后不良染色體核型者首先應(yīng)考慮是否移植。目前對對于MDS缺乏良好的治療藥物，各種治療方法有效率(改善率)大約在30%左右，效果均不十分理想，病人生活質(zhì)量差。異基因造血干細(xì)胞移植是目前唯一能治愈MDS的療法，但有諸多限制條件，同時由于MDS多為老年患者，移植相關(guān)死亡率偏高。支持治療仍是目前的標(biāo)準(zhǔn)方案。

發(fā)明內(nèi)容
針對目前對于多種血液系統(tǒng)疾病，包括紅細(xì)胞疾病，如再生障礙性貧血、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)等；白細(xì)胞疾病，如各種白血病、惡性淋巴瘤、惡性淋巴-網(wǎng)狀細(xì)胞增生癥、漿細(xì)胞病、組織細(xì)胞增生性疾病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生性疾病(真性紅細(xì)胞增多癥、特發(fā)性血小板增多癥、骨髓纖維化)等大多數(shù)都沒有良好的治療藥物和方法的問題，本發(fā)明提供了一種用于一種制備用于異基因過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病，例如MDS或白血病藥物的藥物、以及所述藥物的制備方法。本發(fā)明的第一個目的是提供一種制備用于異基因過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病藥物的方法，步驟包括步驟1，將免疫細(xì)胞與抗原在液態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)基中置于培養(yǎng)容器中共同培養(yǎng)，從而獲得具有抗相應(yīng)抗原的特異性免疫細(xì)胞培養(yǎng)物；步驟2，從步驟I中獲得的培養(yǎng)物中分離具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞類生物藥物；其中，所述的液態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)基中，除免疫細(xì)胞外，還包括組分a) ^e)a)細(xì)胞有絲分裂原如刀豆素、植物血凝素、美洲商陸、脂多糖、葡聚糖、抗CD3抗體中的任意一種或幾種。b)抗原所述抗原為造血干細(xì)胞異常克隆細(xì)胞,可以是源于同種異體、異種、自身的抗原。c)超抗原可以是外源性超抗原和內(nèi)源性超抗原中的任意一種或兩種的組合，夕卜源性超抗原如細(xì)菌內(nèi)毒素，內(nèi)源性超抗原如逆轉(zhuǎn)錄病毒、熱休克蛋白中的任意一種或幾種。d)細(xì)胞因子如來源于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和其他細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子、單核因子、激活炎癥的細(xì)胞因子和刺激造血的細(xì)胞因子中的任意一種或幾種。e)免疫佐劑如無機(jī)佐劑、有機(jī)佐劑、合成佐劑和油劑中的任意一種或幾種。其中，所述培養(yǎng)液可以是基礎(chǔ)培養(yǎng)液加血清或無血清培養(yǎng)液。本發(fā)明所述的方法中，所述免疫細(xì)胞可以是異體細(xì)胞或自體細(xì)胞，本發(fā)明中優(yōu)選為異體細(xì)胞。 本發(fā)明所述的方法中，所述免疫細(xì)胞可以是野生型免疫細(xì)胞，也可以是基因改性細(xì)胞，并優(yōu)選為基因改性細(xì)胞。本發(fā)明所述的方法中，所述具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞，如腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、激活的殺傷性單核細(xì)胞、細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞。并優(yōu)選為淋巴細(xì)胞，如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等，最優(yōu)選為T細(xì)胞。其中，所述免疫細(xì)胞與特定抗原的細(xì)胞數(shù)量比例優(yōu)選為5 100 :1。其中，所述免疫細(xì)胞與特定抗原共同培養(yǎng)時間優(yōu)選為3 180天。根據(jù)本發(fā)明所述方法的一種優(yōu)選實施方式，其中，步驟I中還可以加入抗原遞呈細(xì)胞。其中，所述細(xì)胞培養(yǎng)容器優(yōu)選為三維大體積高密度細(xì)胞培養(yǎng)容器，但也可以是其它任意已知的培養(yǎng)容器，包括生物反應(yīng)器。根據(jù)本發(fā)明所述方法的一種優(yōu)選實施方式，其中，還包括細(xì)胞克隆步驟以步驟I中得到的培養(yǎng)物，或者步驟2中得到的具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞為原料，在所述培養(yǎng)基中進(jìn)行克隆，得到具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞株。所述克隆可以是1)間歇循環(huán)刺激法；2)連續(xù)刺激法。本發(fā)明的第二個目的是提供一種上述任意方法制備的用于過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病的細(xì)胞類生物藥物，所述藥物由上述第一個目的中所述方法制備。所述血液系統(tǒng)疾病包括1)紅細(xì)胞疾病，如再生障礙性貧血、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)等；2)白細(xì)胞疾病，如各種白血病、惡性淋巴瘤、惡性淋巴-網(wǎng)狀細(xì)胞增生癥、漿細(xì)胞病、組織細(xì)胞增生性疾病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生性疾病(真性紅細(xì)胞增多癥、特發(fā)性血小板增多癥、骨髓纖維化)等。本發(fā)明所述的藥物，可以制成任意可用的劑型、和/或通過任意可用途徑輸入患者或需求者體內(nèi)。本發(fā)明第三個目的是提供一種用于異基因過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病的生物制劑，包括容器，以及置于所述容器中的、本發(fā)明第二個目中的所述的藥物。其中，所述生物制劑還可以包括生理鹽水、白蛋白、以及其他穩(wěn)定劑中的任意一種。本發(fā)明上述內(nèi)容中，所述“藥物”也包括用于預(yù)防MDS和白血病的疫苗。本發(fā)明所述方法制備的含T淋巴細(xì)胞的藥物中，T淋巴細(xì)胞可以是來自異體的細(xì)胞，使用時不會出現(xiàn)異體排異反應(yīng)，安全性高；并且通過實驗驗證。例如使用本發(fā)明所提供的藥物治療MDS，血色素、白細(xì)胞、紅細(xì)胞等指標(biāo)明顯上升，伴隨臨床癥狀體征的明顯改善，體力恢復(fù)正常；治療后的骨髓穿刺、骨髓活檢和骨髓干細(xì)胞培養(yǎng)均有造血功能明顯改善。治療過程中病人耐受良好。


圖I為患者使用本發(fā)明藥物治療前(2011年3月7日)的骨髓活檢照片；圖2為患者開始使用本發(fā)明藥物治療后(2011年9月27日)骨髓活檢照片；圖3為患者使用本發(fā)明藥物治療后(2012年4月2日)骨髓活檢照片。
具體實施例方式本發(fā)明提供了一種用于治療MDS的藥物及其制備方法，制備步驟包括 步驟1，將免疫細(xì)胞與抗原在液態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)基中置于培養(yǎng)容器中共同培養(yǎng)，從而獲得具有抗相應(yīng)抗原的特異性免疫細(xì)胞培養(yǎng)物；步驟2，從步驟I中獲得的培養(yǎng)物中分離具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞類生物藥物；其中，所述的液態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)基中，除免疫細(xì)胞外，還包括組分a)、)a)細(xì)胞有絲分裂原如刀豆素、植物血凝素、美洲商陸、脂多糖、葡聚糖、抗CD3抗體中的任意一種或幾種。b)抗原所述抗原為造血干細(xì)胞異常克隆細(xì)胞,可以是源于同種異體、異種、自身的抗原。c)外源性超抗原、和/或內(nèi)源性超抗原如細(xì)菌內(nèi)毒素，內(nèi)源性超抗原如逆轉(zhuǎn)錄病毒、熱休克蛋白中的任意一種或幾種；可以是外源性超抗原和內(nèi)源性超抗原中的任意一種或兩種的組合。d)細(xì)胞因子如來源于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和其他細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子、單核因子、激活炎癥的細(xì)胞因子和刺激造血的細(xì)胞因子中的任意一種或幾種。e)免疫佐劑如無機(jī)佐劑、有機(jī)佐劑、合成佐劑和油劑中的任意一種或幾種。其中，所述培養(yǎng)液可以是基礎(chǔ)培養(yǎng)液加血清或無血清培養(yǎng)液。其中，所述免疫細(xì)胞可以是異體細(xì)胞或自體細(xì)胞，本發(fā)明中優(yōu)選為異體細(xì)胞。其中，所述免疫細(xì)胞可以是野生型免疫細(xì)胞，也可以是基因改性細(xì)胞，并優(yōu)選為基因改性細(xì)胞。其中，所述具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞，如腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、激活的殺傷性單核細(xì)胞、細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞。并優(yōu)選為淋巴細(xì)胞，如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等，最優(yōu)選為T細(xì)胞。其中，所述免疫細(xì)胞與特定抗原的重量比例優(yōu)選為5 100 :1。其中，所述免疫細(xì)胞與特定抗原共同培養(yǎng)時間優(yōu)選為3 180天。其中，步驟I中還可以加入抗原遞呈細(xì)胞。其中，所述細(xì)胞培養(yǎng)容器優(yōu)選為三維大體積高密度細(xì)胞培養(yǎng)容器，但也可以是其它任意已知的培養(yǎng)容器，包括生物反應(yīng)器。其中，還可以包括細(xì)胞克隆步驟以步驟I中得到的培養(yǎng)物，或者步驟2中得到的具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞為原料，在所述培養(yǎng)基中進(jìn)行克隆，得到具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞株。所述克隆可以是1)間歇循環(huán)刺激法；2)連續(xù)刺激法。本發(fā)明所述的藥物，可以制成任意可用的劑型、和/或通過任意可用途徑輸入患者或需求者體內(nèi)。本發(fā)明還提供一種生物制劑，包括容器，以及置于所述容器中的、本發(fā)明第二個目中的所述的藥物。其中，所述生物制劑還可以包括生理鹽水、白蛋白、以及其他穩(wěn)定劑等組分。實施例I源于異體的單個核細(xì)胞，與特定抗原(造血干細(xì)胞異?？寺〖?xì)胞)在液態(tài)培養(yǎng)基中共同培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基還包括刀豆素、外源性超抗原、淋巴因子、免疫佐劑，其中，刀豆素在培養(yǎng)基中用量為lug / L ;外源性超抗原(綠膿桿菌毒素)在培養(yǎng)基中用量為5 yg / L； 淋巴因子(白細(xì)胞介素II)在培養(yǎng)基中用量為IOOOu / L ;免疫佐劑(5%吐溫-80)用量為0. ImL / L0T淋巴細(xì)胞與特定抗原(Raji (Burkitt ^ s淋巴瘤細(xì)胞))的比例為5 :1 (細(xì)胞數(shù)
量比)。將T淋巴細(xì)胞與特定抗原共同培養(yǎng)30天，獲得具有抗相應(yīng)抗原的特異性免疫細(xì)胞培養(yǎng)物。從培養(yǎng)物中分離出具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞，主要為細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞。實施例2源于異體的單個核細(xì)胞(基因改性T淋巴細(xì)胞)，與特定抗原(造血干細(xì)胞異常克隆細(xì)胞)在液態(tài)培養(yǎng)基中共同培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基還包括植物血凝素、內(nèi)源性超抗原、淋巴因子、免疫佐劑，其中，植物血凝素(PHA)在培養(yǎng)基中用量為5 ii g / L ;內(nèi)源性超抗原(綠膿桿菌毒素)在培養(yǎng)基中用量為lug / L ;淋巴因子(干擾素)在培養(yǎng)基中用量為IOOOu / L ;免疫佐劑(5%吐溫-80)用量為0. ImL / L0T淋巴細(xì)胞與特定抗原(M0LT-4 (急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞))比例為50 1 (細(xì)胞數(shù)量比)。將T淋巴細(xì)胞與特定抗原共同培養(yǎng)90天，獲得具有抗相應(yīng)抗原的特異性免疫細(xì)胞培養(yǎng)物。從培養(yǎng)物中分離出具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞，主要為細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞。實施例3源于異體的單個核細(xì)胞(基因改性T淋巴細(xì)胞)，與特定抗原(造血干細(xì)胞異?？寺〖?xì)胞)在液態(tài)培養(yǎng)基中共同培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基包括植物血凝素、外源性超抗原、淋巴因子、免疫佐劑。其中，植物血凝素在培養(yǎng)基中用量為IOyg / L ;外源性超抗原(綠膿桿菌毒素)在培養(yǎng)基中用量為5iig / L ;淋巴因子(白細(xì)胞介素II)在培養(yǎng)基中用量為500u / L;免疫佐劑(5%吐溫-80)用量為0. ImL / L0T淋巴細(xì)胞與特定抗原(K-562 (慢性髓原白血病細(xì)胞))的比例為100 1 (細(xì)胞數(shù)
量比)。將T淋巴細(xì)胞與特定抗原共同培養(yǎng)10天，獲得具有抗相應(yīng)抗原的特異性免疫細(xì)胞培養(yǎng)物。從培養(yǎng)物中分離出具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞，主要為細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞。
實施例4源于異體的單個T淋巴細(xì)胞，與特定抗原(造血干細(xì)胞異?？寺〖?xì)胞)在液態(tài)培養(yǎng)基中共同培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基包括刀豆素、外源性超抗原、淋巴因子、免疫佐劑，其中，植物血凝素(PHA)在培養(yǎng)基中用量為IOy g / L ;外源性超抗原(綠膿桿菌毒素)在培養(yǎng)基中用量為lug / L ;淋巴因子(白細(xì)胞介素II)在培養(yǎng)基中用量為800u / L ;免疫佐劑(5%吐溫-80)用量為0. ImL / L0T淋巴細(xì)胞與Dami (巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞)的比例為10 :1 (細(xì)胞數(shù)量比)。將抗原與T淋巴細(xì)胞(單個核細(xì)胞)在37°C、5%C02條件下培養(yǎng)I天。重懸，經(jīng)離心收集界面細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度，加入經(jīng)過照射的自身MNC，以未照射的自身細(xì)胞為飼養(yǎng)細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞，培養(yǎng)7天，重復(fù)該步驟。收集細(xì)胞，有限稀釋后，在上述條件下繼續(xù)培養(yǎng)，傳代并經(jīng)間歇刺激培養(yǎng)。
從上述培養(yǎng)物中分離出具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞株。實施例5源于異體的單個T淋巴細(xì)胞，與特定抗原(造血干細(xì)胞異?？寺〖?xì)胞)在液態(tài)培養(yǎng)基中共同培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基為無血清培養(yǎng)基，加入包括刀豆素、外源性超抗原、淋巴因子、有機(jī)溶劑，其中，植物血凝素(PHA)在培養(yǎng)基中用量為IOiig / L ;外源性超抗原(綠膿桿菌毒素)在培養(yǎng)基中用量為Iu g / L ;淋巴因子(白細(xì)胞介素II)在培養(yǎng)基中用量為800u / L0T淋巴細(xì)胞與HEL299 (紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞)的比例為10 :1 (細(xì)胞數(shù)量比)。將抗原與T淋巴細(xì)胞(單個核細(xì)胞)在37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)I天。將所培養(yǎng)細(xì)胞加入大體積細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器，進(jìn)行高密度細(xì)胞培養(yǎng)30天。從培養(yǎng)物中分離出具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞，主要為細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞。效果實施例姓名林XX 性別男性年齡18歲臨床診斷MDS因皮膚蒼白，乏力頭暈，勞累后心悸氣短半年于2010-12-30入院。檢查發(fā)現(xiàn)三系減少，白細(xì)胞2. 34X109 / L、紅細(xì)胞2. 14X 109/L、血色素81g / L、血小板86X 109 / L。胸骨穿刺顯示三系增生伴輕度病態(tài)造血骨髓象。病情進(jìn)展較快，第一次診斷后的五個月即需輸血，其后靠輸血維持，五個多月期間共輸血4300mL。第一次入院至第二次入院(2011年I月4日至2011年3月7日，天津血研所)臨床表現(xiàn)皮膚蒼白，頭暈乏力加重，活動后心悸氣短血象檢查結(jié)果白細(xì)胞，2. 34-5. 25X IO9 / L，紅細(xì)胞I. 9-2. 42X IO9 / L，血紅蛋白 78.2-96g / L，血小板 77-107 X IO9 / L。骨髓象檢查診斷意見結(jié)合病史，粒紅兩系增生減低骨髓象。2011年3月7日骨髓活檢(送檢組織I. OcmXO. 2cmX0.2cm)照片見圖1，骨髓增生極度低下，造血細(xì)胞缺乏，未見巨核細(xì)胞。網(wǎng)狀纖維染色陰性。第二次入院確診到異基因過繼性細(xì)胞免疫治療前(2011-03-08到2011_07_12，包
括第三次住院)臨床表現(xiàn)為皮膚蒼白，頭暈乏力明顯加重,活動后心悸氣短,需要輸血1200mL?；颊叩难Ｒ?guī)白細(xì)胞，2. 60-4. 66X IO9 / L、紅細(xì)胞I. 3-2. 83X IO9 / L、血紅蛋白48. 2-92g / L、血小板 83-119X 109 / L。
骨髓象檢查診斷意見此部位骨髓粒巨兩系增生，紅系比例減低，粒紅兩系形態(tài)異
堂
巾O開始細(xì)胞免疫治療至第四次入院(2011年7月13日到2011年9月28日，天津血研所)臨床表現(xiàn)病情尚無明顯好轉(zhuǎn)。輸血2000ml。7月15日至9月21日進(jìn)行14次細(xì)胞免疫治療，大約每:T4天一次。血象檢查結(jié)果白細(xì)胞，2.4-4. 23X IO9 / L，紅細(xì)胞I. 33-2. 55X IO9 / L，血紅蛋白 48-76g / L，血小板 51-115 X IO9 / L。 骨髓象檢查診斷意見診斷意見粒紅巨三系增生減低骨髓象。2011年9月27日骨髓活檢照片見圖2，骨髓增生極度低下(< 10%)，極少數(shù)偏成熟階段粒紅系細(xì)胞。未見巨核細(xì)胞。未見原始細(xì)胞增多。第四次入院至第五次入院(2011年9月29到2011年12月22日，天津血研所)輸血臨床表現(xiàn)病情開始穩(wěn)定，輸血需求量減少(1100ml，最后一次為2011-11-25)細(xì)胞治療11-29到12-7，五次治療，每2-3天一次血象檢查結(jié)果白細(xì)胞，3.0-5. 55X IO9 / L、紅細(xì)胞2. 04-2. 97X IO9 / L、血紅蛋白 61-93g / L、血小板 40-100X 109 / L。骨髓象檢查診斷意見粒紅巨三系增生減低骨髓象。骨髓活檢顯示，骨髓增生極度低下，脂肪細(xì)胞增生，粒紅細(xì)胞和巨核細(xì)胞缺乏，網(wǎng)狀纖維染色陰性。第五次入院至第六次入院(2011年12月23日到2012年4月2日，天津血研所)臨床表現(xiàn)病情開始好轉(zhuǎn)，癥狀體征減輕，不需要再輸血。細(xì)胞治療2012年2月9日到2012年2月17日，四次治療，每2-3天一次。血象檢查結(jié)果白細(xì)胞，3. 03-7. 16X IO9 / L、紅細(xì)胞2. 28-3. 39X IO9 / L、血紅蛋白 87-123g / L、血小板 43-78 X IO9 / L。骨髓象檢查診斷意見結(jié)合病史，與2011年12月22日骨髓相比，三系增生程度增力口，原始細(xì)胞易見伴成熟紅細(xì)胞明顯異型性。2012年4月2日骨髓活檢顯示，骨髓增生較活躍(80%)，粒紅比例減小，粒紅系各階段細(xì)胞可見，均已中幼及以下階段細(xì)胞為主，粒系幼稚階段細(xì)胞輕度增多，巨核細(xì)胞易見，分葉核為主，可見單圓核巨核細(xì)胞和多圓核巨核細(xì)胞，網(wǎng)狀纖維染色( + )，照片見圖3。第六次入院至今(2012年4月21日到2012年8月26日)臨床表現(xiàn)病情進(jìn)一步明顯好轉(zhuǎn)，癥狀體征明顯減輕，體力逐步恢復(fù)正常細(xì)胞治療2012年5月12日到2012年5月18日，四次治療，每2天一次。2012年6月15日到2012年6月22日，五次治療，每1-2天一次。血象檢查結(jié)果白細(xì)胞，4. 18-7. 46X IO9 / L、紅細(xì)胞2. 61-4. 45X IO9 / L、血紅蛋白 99-162g / L、血小板 47-69 X IO9 / L。患者從發(fā)病后的第七個月開始進(jìn)行異基因過繼性細(xì)胞免疫治療。一年來共治療30次，采用細(xì)胞為上述實施例中制備的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CD8+T細(xì)胞，約95%)。每次細(xì)胞數(shù)量為1X109，靜脈滴注。從第二次入院確診到異基因過繼性細(xì)胞免疫治療前(2011-03-08到 2011-07-12)，患者的血常規(guī)白細(xì)胞 2. 60-4. 66X 109/L、紅細(xì)胞 I. 3-2. 83X109 / L、血紅蛋白48. 2-92g / L、血小板83-119X109 / L。治療兩個多月后，輸血次數(shù)及數(shù)量減少，四個月后不用再輸血維持。治療近一年時(2012-04-21到2012-09-08)，血常規(guī)白細(xì)胞 4. 18-7. 46X109 / L、紅細(xì)胞 2. 61-4. 45X 109 / L、血紅蛋白 99_162g / L、血小板，47-69X109 / L0其中血色素逐步從最低4. 8g / L上升到16. 2g / L，升高了極其顯著的11. 4g / L，伴隨臨床癥狀體征的明顯改善，體力恢復(fù)正常。治療后的骨髓穿刺、骨髓活檢和骨髓干細(xì)胞培養(yǎng)均有造血功能明顯改善。治療過程中病人耐受很好，除治療當(dāng)天有不需特殊處理的短暫畏寒、寒戰(zhàn)和發(fā)熱夕卜，沒有任何其他毒副作用。未觀察到腹瀉，皮疹，肝功能損害等移植物抗宿主反應(yīng)的表現(xiàn)。 表I，治療前后血象變化
權(quán)利要求
1.一種制備用于異基因過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病藥物的方法，其特征在于，步驟包括 步驟1，將免疫細(xì)胞與抗原在液態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)基中置于培養(yǎng)容器中共同培養(yǎng)，從而獲得具有抗相應(yīng)抗原的特異性免疫細(xì)胞培養(yǎng)物； 步驟2，從步驟I中獲得的培養(yǎng)物中分離具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞類生物藥物； 其中，所述的液態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)基中，除免疫細(xì)胞外，還包括組分a) ^e) a)細(xì)胞有絲分裂原； b)抗原所述抗原為造血干細(xì)胞異常克隆細(xì)胞； c)超抗原； d)細(xì)胞因子； e)免疫佐劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，細(xì)胞有絲分裂原選自刀豆素、植物血凝素、美洲商陸、脂多糖、葡聚糖、抗CD3抗體中的任意一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述超抗原選自外源性超抗原和內(nèi)源性超抗原中的任意一種或其組合；外源性超抗原為細(xì)菌內(nèi)毒素，內(nèi)源性超抗原選自逆轉(zhuǎn)錄病毒、熱休克蛋白中的任意一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，細(xì)胞因子選自來源于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和其他細(xì)胞產(chǎn)生的淋巴因子、單核因子、激活炎癥的細(xì)胞因子和刺激造血的細(xì)胞因子中的任意一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)液選自基礎(chǔ)培養(yǎng)液加血清、或無血清培養(yǎng)液中的任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞選自異體細(xì)胞或自體細(xì)胞的任意一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞選自不經(jīng)基因改性的免疫細(xì)胞或基因改性的免疫細(xì)胞的任意一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、6或7所述的方法，其特征在于，所述具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞選自腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、激活的殺傷性單核細(xì)胞、細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞和/或樹突狀細(xì)胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟I中還加入抗原遞呈細(xì)胞。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞培養(yǎng)容器為三維大體積高密度細(xì)胞培養(yǎng)容器。
11.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，還包括細(xì)胞克隆步驟以步驟I中得到的培養(yǎng)物，或者步驟2中得到的具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞為原料，在所述培養(yǎng)基中進(jìn)行克隆，得到具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞株。
12.—種如權(quán)利要求I所述方法制備的用于過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病的細(xì)胞類生物藥物，其特征在于，所述血液系統(tǒng)疾病包括紅細(xì)胞疾病，白細(xì)胞疾病。
13.根據(jù)權(quán)利要求I所述的生物藥物，其特征在于，所述紅細(xì)胞疾病包括再生障礙性貧血、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥；所述白血病疾病包括白血病、惡性淋巴瘤、惡性淋巴-網(wǎng)狀細(xì)胞增生癥、漿細(xì)胞病、組織細(xì)胞增生性疾病、骨髓增生異常綜合征、骨髓增生性疾病。
14.一種用于異基因過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病的生物制劑，其特征在于，包括容器，以及置于容器內(nèi)的、權(quán)利要求12所述的用于過繼性細(xì)胞免疫治療MDS的細(xì)胞類生物藥物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種制備用于異基因過繼性細(xì)胞免疫治療血液系統(tǒng)疾病，例如MDS或白血病的細(xì)胞類生物藥物、生物制劑、以及制備方法。將免疫細(xì)胞與抗原在液態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)基中置于培養(yǎng)容器中共同培養(yǎng)，從而獲得具有抗相應(yīng)抗原的特異性免疫細(xì)胞培養(yǎng)物；從獲得的培養(yǎng)物中分離具有免疫應(yīng)答反應(yīng)的細(xì)胞類生物藥物。免疫細(xì)胞可以是異體細(xì)胞，使用時不會出現(xiàn)異體排異反應(yīng)，安全性高；治療MDS后的骨髓穿刺、骨髓活檢和骨髓干細(xì)胞培養(yǎng)均有造血功能明顯改善。治療過程中病人耐受良好。本發(fā)明通過提高機(jī)體的免疫力這一全新的病因治療策略來治療MDS，有效地恢復(fù)了患者體內(nèi)造血功能，對于包括白血病在內(nèi)的其他造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病的治療具有良好前景。
文檔編號C12N5/0783GK102847143SQ20121035297
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
發(fā)明者劉華 申請人:上海星華生物醫(yī)藥科技有限公司