禽流感病毒陽性質粒的構建的制作方法
【專利摘要】本發明公開了禽流感病毒陽性質粒的構建，其特征在于，步驟如下：首先提取所需的AIV病毒的ＲＮＡ的提取，至少提前24小時在零下85攝氏度的環境下進行冷藏保存；進行ＰＣＲ反應；然后回收PCR產物，并使其連接至Ｃ載體；篩選出來后設計出上下游引物；一起模版再加入對應的上下游引物；與體系進行ＰＣＲ擴增；零下65－75攝氏度環境下進行保存備用。基因片段需要按照核苷酸序列的順序設計成含有互補堿基對的核苷酸片段，所述互補堿基對的核苷酸片段需要在等溫條件下延伸獲得。本發明的有益效果是：操作簡單，成本較低，純度較高，再現性強，數據精確。
【專利說明】禽流感病毒陽性質粒的構建
【技術領域】
[0001]本發明涉及生化實驗領域，具體涉及禽流感病毒陽性質粒的構建。
【背景技術】
[0002]禽流感病毒(AIV)屬甲型流感病毒。流感病毒屬于RNA病毒的正黏病毒科，分甲、乙、丙3個型。其中甲型流感病毒多發于禽類，一些亞型也可感染豬、馬、海豹和鯨等各種哺乳動物及人類；乙型和丙型流感病毒則分別見于海豹和豬的感染。一般來說，禽流感病毒與人流感病毒存在受體特異性差異，禽流感病毒是不容易原形畢露的h5nl型禽流感病毒感染給人的。個別造成人感染發病的禽流感病毒可能是發生了變異的病毒。變異的可能性一是兩種以上的病毒進入同一細胞進行重組，如豬既可感染人流感病毒，又可能感染禽流感病毒，每種病毒都具有8個基因片段，從理論上講，可以形成256個新的重組病毒；二是病毒基因位點由于某種因素的影響。美國賓夕法尼亞州曾暴發H5N2型病毒引起的雞和火雞低致病性禽流感，由于沒有及時得到有效控制，到同年10月份，同樣的H5N2型毒株突然由低致病性變成高致病性，造成禽類大量死亡。

【發明內容】

[0003]本發明要解決的技術問題在于，針對現有技術缺陷，提供一種技術方案:
禽流感病毒陽性質粒的構建，步驟如下:首先提取所需的AIV病毒的RNA的提取，至少提前2 4小時在零下8 5攝氏度的環境下進行冷藏保存；進行P C R反應；然后回收PCR產物，并使其連接至C載體；篩選出來后設計出上下游引物；一起模版再加入對應的上下游引物；與體系進行P C R擴增；零下6 5 - 7 5攝氏度環境下進行保存備用。
[0004]本發明中，基因片段需要按照核苷酸序列的順序設計成含有互補堿基對的核苷酸片段。
[0005]本發明中，所述互補堿基對的核苷酸片段需要在等溫條件下延伸獲得。
[0006]本發明的有益效果是:操作簡單，成本較低，純度較高，再現性強，數據精確。【具體實施方式】
禽流感病毒陽性質粒的構建，步驟如下:首先提取所需的AIV病毒的RNA的提取，至少提前2 4小時在零下8 5攝氏度的環境下進行冷藏保存；進行P C R反應；然后回收PCR產物，并使其連接至C載體；篩選出來后設計出上下游引物；一起模版再加入對應的上下游引物；與體系進行P C R擴增；零下6 5 - 7 5攝氏度環境下進行保存備用，基因片段需要按照核苷酸序列的順序設計成含有互補堿基對的核苷酸片段，所述互補堿基對的核苷酸片段需要在等溫條件下延伸獲得。
[0007]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.禽流感病毒陽性質粒的構建，其特征在于，步驟如下:首先提取所需的AIV病毒的RNA的提取，至少提前2 4小時在零下8 5攝氏度的環境下進行冷藏保存；進行P C R反應；然后回收PCR產物，并使其連接至C載體；篩選出來后設計出上下游引物；一起模版再加入對應的上下游引物；與體系進行P C R擴增；零下6 5 — 7 5攝氏度環境下進行保存備用。
2.如權利要求1所述的禽流感病毒陽性質粒的構建，其特征在于，基因片段需要按照核苷酸序列的順序設計成含有互補堿基對的核苷酸片段。
3.如權利要求1所述的禽流感病毒陽性質粒的構建，其特征在于，所述互補堿基對的核苷酸片段需要在等溫條件下延伸獲得。
【文檔編號】C12N15/66GK103614401SQ201310537920
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月5日 優先權日:2013年11月5日
【發明者】辛竹 申請人:辛竹