趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了趕黃草提取物在制備降血糖藥物治療藥物中的應用。本發明所述趕黃草提取物通過實驗：（1）體外α-淀粉酶抑制活性實驗，結果顯示趕黃草提取物對α-淀粉酶有顯著的抑制作用。（2）趕黃草提取物對小鼠淀粉耐量實驗，結果表明本發明趕黃草提取物能明顯降低小鼠的給淀粉后的血糖濃度。（3）趕黃草提取物灌胃對小鼠的急性毒性試驗,結果顯示對高血糖治療的同時并無明顯毒副作用。因此，本發明為臨床防治糖尿病提供了新的途徑，本發明趕黃草提取物制備方法簡便，有較大的臨床應用價值。
【專利說明】趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥提取物，具體涉及中藥提取物的應用，尤其涉及趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]由于生活水平的提高、飲食結構的改變、日趨緊張的生活節奏以及少動多坐的生活方式等諸多因素，全球糖尿病發病率增長迅速，糖尿病已經成為繼腫瘤、心血管病變之后第三大嚴重威脅人類健康的慢性疾病。當糖尿病患者經過飲食和運動治療后，血糖的控制仍不能達到治療目標時，需采用藥物治療。為此，研究和開發有效的降血糖的藥物有著極其重要的意義。目前，用于降血糖的藥物主要有口服降糖藥物和注射降糖藥物。其中口服降糖藥物以非胰島素類藥物為主，分為a-糖苷酶抑制劑(阿卡波糖)、雙胍(二甲雙胍)類，促胰島素分泌劑類和胰島素增敏劑。a -糖苷酶抑制劑、雙胍類及胰島素增收劑單獨使用一般不會引起低血糖，但與其他藥物連用時仍可能發生；而雙胍類的降糖藥對腸胃的傷害較大，容易導致消化不良，嚴重時可能會導致酮尿和乳酸酸中毒。現代藥理研究證明，很多單味中藥具有降糖作用，中醫藥治療糖尿病不僅降低血糖，更重要的是注重防治糖尿病并發癥，起到提高生活質量和延長壽命的作用。趕黃草(Penthorum chinense Pursh)又名扯根菜、水澤蘭、山珍珠等，據《天寶本草》、《救荒本草》等記載，趕黃草具有通絡活血、祛瘀除濕、活血散瘀等作用。文獻報道趕黃草具有防治肝炎、肝保護的藥理活性，但至今尚未見趕黃草提取物治療聞血糖的報道。

【發明內容】

[0003]本發明所要解決的技 術問題在于研究設計趕黃草提取物在制藥中的用途。
[0004]本發明提供了趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應用。
[0005]本發明所述趕黃草提取物是通過下列方法制得的:
[0006]趕黃草全草粉碎后，用20%~80%的乙醇熱提(80°C)3次，每次用量為趕黃草重量的10倍量W/L，每次提取時間為I小時，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后在50~60°C環境下烘干至恒重，得到趕黃草提取物。
[0007]趕黃草原料可以通過市售得到。
[0008]本發明所述趕黃草提取物通過下列藥效實驗，證明其具有降血糖的作用。
[0009]( I)體外a -淀粉酶抑制活性試驗
[0010]樣品溶解于DMS0,配制成10mg/ml的溶液，a -淀粉酶的活性按照Caraway方法(Am.J.Clin.Path.，1959，32，97-99，)檢測，測得趕黃草提取物能抑制a -淀粉酶的活性。實驗結果顯示趕黃草提取物在278ug/ml濃度下a-淀粉酶的抑制活性超過陽性藥(阿卡波糖)。因此趕黃草提取物有較強降血糖的作用，可用于非正常高血糖疾病的治療。
[0011](2 )體內小鼠淀粉耐量實驗
[0012]采用小鼠淀粉耐量模型，觀察本發明趕黃草提取物灌胃給藥后的降血糖作用。實驗結果顯示，與模型組比較，趕黃草提取物高、中、低劑量組對小鼠有顯著的降血糖作用，并且高、中、低三劑量組呈現一定的量效關系。
[0013](3 )小鼠灌胃給予趕黃草提取物的最大耐受量MTD>8.0g/kg,為趕黃草提取物有效劑量(200mg/kg)的40倍，并未見到小鼠有明顯異常。因此趕黃草提取物對高血糖治療的同時并無明顯毒副作用。
[0014]因此，本發明趕黃草提取物可用于制備降血糖的藥物。
[0015]本發明所述藥物為由趕黃草提取物作為活性成分與藥用輔料組成的藥物組合物。
[0016]本發明趕黃草提取物制備方法簡便，具有明顯的降血糖活性，為防治非正常高血糖提供了基礎，為臨床治療聞血糖提供了新的中藥，療效確切，副作用小，有較大的臨床應用價值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1趕黃草20%，50%, 80%乙醇提取物HPLC對照圖
[0018]縱坐標為響應強度，單位(AU)，橫坐標為時間，單位(分鐘)
[0019]A:趕黃草20%乙醇提取物；B:趕黃草50%乙醇提取物；C:趕黃草80%乙醇提取物。
[0020]圖2趕黃草提取物對小鼠餐后血糖的降低作用
[0021]縱坐標為血糖值，單位(m mol)，橫坐標為時間，單位(分鐘)
[0022]A:模型對照組；B:低劑量組；C:陽性藥組；D:中劑量組；E:空白對照組；F:高劑量組
[0023]圖3趕黃草提取物降小鼠餐后血糖的量效關系
[0024]縱坐標為AUC:曲線下面積,單位(mmol/L ? min)
[0025]橫軸為不同組別:A:模型對照組；B:趕黃草提取物200mg/kg組；C:趕黃草提取物400mg/kg組；D:趕黃草提取物600mg/kg組；E:陽性對照組；F:空白組
[0026]注廣給藥組跟模型組比較P < 0.05
【具體實施方式】:
[0027]下面用非限定性實施例，對本發明作進一步描述。
[0028]實施例所用原料市售得到。
[0029]實施例1趕黃草提取物的制備
[0030]將5kg趕黃草(市售)全草粉碎后，用80%的乙醇50L浸泡過夜，80%的乙醇熱提(80°C)3次，每次用量50L，每次提取時間為I小時，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后在50~60°C環境下烘干至恒重(564g)，按生藥量計得率為11.3%。制備得的趕黃草提取物按實施例4進行HPLC (高效液相)檢測。
[0031]實施例2趕黃草提取物的制備
[0032]將5kg趕黃草(市售)全草粉碎后，用50%的乙醇50L浸泡過夜，50%的乙醇熱提(80°C)3次，每次用量50L，每次提取時間為I小時，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后在50~60°C環境下烘干至恒重(541g)，按生藥量計得率為10.8%。制備得的趕黃草提取物按實施例4進行HPLC (高效液相)檢測。
[0033]實施例3趕黃草提取物的制備[0034]將5kg趕黃草(市售)全草粉碎后，用20%的乙醇50L浸泡過夜，20%的乙醇熱提(80°C)3次，每次用量50L，每次提取時間為I小時，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后在50~60°C環境下烘干至恒重(516g)，按生藥量計得率為10.3%。制備得的趕黃草提取物按實施例4進行HPLC (高效液相)檢測。
[0035]實施例4趕黃草20%，50%, 80%乙醇提取物HPLC對照圖
[0036]將實施例1、2、3得到的趕黃草提取物分別進高效液相進行比對，結果發現3種提取方法得到的趕黃草提取物成分幾乎沒有差異，見圖1。
[0037]所米用HPLC 條件如下:色譜柱:Diamonsil C18column (4.6mmX 250mm, 5 u m, Dikma);流動相:A相為乙腈，B相為0.2%甲酸緩沖液(pH=3.0);梯度洗脫:0min-65min-70min,流動相A:B的比例為10 =90-50:50-90:10 ;流速:1.0ml/min，運行時間70min，檢測波長280nm，柱溫為300C ;進樣量IOu 10
[0038]實施例5趕黃草提取物體外a -淀粉酶抑制活性試驗
[0039]I材料與方法
[0040]1.1試驗藥物
[0041]實施例1制 備的趕黃草提取物
[0042]1.2實驗材料
[0043]阿卡波糖(拜耳，50mg/片)，葡萄糖檢測試劑盒(葡萄糖氧化酶_過氧化酶法，上海榮盛生物技術有限公司，)a -淀粉酶(Wako Pure Chemicals Ind., Osaka, Japan),酶標儀(EIx800, Biotek),96 孔細胞培養板(Corning/Costar)
[0044]1.3實驗方法
[0045]1.3.1顯色劑:先將苯甲酸鈉10.8克，碘化鉀5克溶于400ml水中，然后定容至500mlo
[0046]1.3.2用25mM的PIPES緩沖液將a -淀粉酶配制成27.8mg/L溶液(PH=6.9)。稱量趕黃草提取物(實施例1制得，)用DMSO配成10mg/ml的溶液，再用水分別稀釋成139ug/ml和278ug/ml,同時將阿卡波糖用蒸懼水配制成濃度為278ug/ml溶液；將淀粉用蒸懼水配制成濃度為0.16%的淀粉溶液。
[0047]1.3.3用96孔細胞培養板，實驗分為4組，分別為空白組對照(蒸餾水)，陽性對照組(阿卡波糖)，2個樣品測定組，每組各設6個復孔。
[0048]1.3.4分別將上述2個濃度的趕黃草提取物及阿卡波糖溶液加入板孔上編組的相應各孔，每孔25ul樣品溶液，空白對照組加等量蒸餾水，分別于每組其中三個孔加入12.5ul a -淀粉酶溶液，另三個孔加入12.5ul蒸餾水，37°C溫孵lOmin，最后分別于各孔加A 500uL顯色試劑終止反應，在酶標儀630nm波長下測定吸光度(A)，按下劉方法計算抑制
率(％):抑制率(％) - [I (A樣品不加酶A樣品瞞)/ (A空白對照不加酶A空白對照；(jn酶)]X 100%
[0049]2實驗結果
[0050]表2趕黃草提取物體外a -淀粉酶抑制活性(n=3, i±s)組別抑制率
空白組O
[0051]陽性對照組65 ±2,0%

139ug/ml趕黃草提取物83 土 2.0%

278ug/ml趕黃草提取物80 土 3.0%
[0052]3 結論
[0053]趕黃草提取物體外a -淀粉酶抑制活性實驗結果表明:給藥后，趕黃草提取物能明顯抑制a -淀粉酶活性；其在139ug/ml、278ug/ml濃度下，a -淀粉酶抑制活性甚至超過陽性藥(阿卡波糖)，表現出較強的降糖效果。 [0054]實施例6趕黃草提取物體內小鼠淀粉耐量實驗
[0055]I材料與方法
[0056]1.1實驗材料
[0057]阿卡波糖(拜耳,50mg/片)，玉米淀粉(一招鮮，袋裝,458g),血糖測定試紙(Major II)
[0058]1.2實驗動物
[0059]ICR小鼠(上海斯萊克實驗動物有限公司，動物合格證號:SCXK (滬)2012-0002 ;體重:20g左右;性另Ij:雄性；每組10只)。
[0060]1.3趕黃草提取物
[0061]趕黃草提取物由實施例1制備，烘干(50~60°C環境下烘干至恒重)，然后分別精密稱取趕黃草提取物400mg、800mg、1200mg，加入IOml0.5%羧甲基纖維素鈉，分別配成濃度為40mg/ml、80mg/ml和120mg/ml的懸浮液與2.5g/kg淀粉等體積混合后，作為趕黃草提取物低、中、高劑量組，其趕黃草提取物的濃度分別為20mg/ml、40mg/ml和60mg/ml。
[0062]1.4給藥方法
[0063]給藥體積均為0.lml/10g體重，模型對照組給等體積的淀粉，全部采用灌胃法給藥。確定趕黃草提取物的給藥量分別為200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg。
[0064]1.5實驗方法
[0065]將60只ICR小鼠隨機分成6組，在適應性飼養2_3天后，稱取體重，按體重隨機分組(每組體重相等)，每組10只。撤除食物及墊料饑餓12h，分為空白組、模型組、陽性對照組(阿卡波糖，給藥劑量25mg/kg)，趕黃草提取物低、中、高劑量組，然后一起灌胃給藥。空白組按0.lml/10g體重給予0.5%羧甲基纖維素鈉。給糖前測定血糖,在給糖后30min,60min,120min時各測定血糖
[0066]一次,然后計算AUC (area under the curve),計算公式如下:
AUr fm.mol/fl ? h1- _0 + 關昶 y a c ,鶴m * BG60
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[0067]‘
A c B<360+BuS20 ,
X 0.5+ ----x I
2
[0068]注:BG:bloodglucose 血糖[0069]實驗數據采用SPSS13.0進行統計分析，組間多項數據比較采用單因素
[0070]方差分析，數據以(x±s )表示，P < 0.05作為顯著性差異。
[0071]2實驗結果
[0072]小鼠各組體重情況，見表3
[0073]表3給藥前小鼠的體重情況(數據以均數x表示，g，n=10)
【權利要求】
1.趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述趕黃草提取物在制備降血糖藥物中的應用，其特征在于，所述趕黃草提取物通過下列方法制得:趕黃草全草粉碎后，用20%~80%的乙醇熱提80°C 3次，每次用量為趕黃草重量的10倍量W/L，每次提取時間為I小時，合并3次提取液后50~60°C減壓濃縮至干，然后50~60°C環境下進一步干燥至恒重，得到趕黃草提取物。
3.如權利要求1所述應用，其特征在于，所述藥物為由趕黃草提取物作為活性成分與藥用輔料組成的 藥物組合物。
【文檔編號】A61K36/185GK103638073SQ201310608323
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月26日 優先權日:2013年11月26日
【發明者】孫連娜, 黃豆豆, 李君麗, 孫蕾, 黃光輝, 陳萬生 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學