本發(fā)明屬于組織工程支架材料領(lǐng)域，特別涉及一種聚合物組織工程多孔支架材料及其制備方法。

背景技術(shù)：

組織工程是近年來(lái)興起的一門(mén)新興學(xué)科，通過(guò)在體外培養(yǎng)正常的組織細(xì)胞，附著在一種細(xì)胞相容性好并且可被生物降解的支架材料上形成細(xì)胞-支架材料的復(fù)合體，將該復(fù)合體植入機(jī)體組織或者器官病損部分，細(xì)胞機(jī)體中逐步形成新的組織結(jié)構(gòu)，而支架材料逐漸被生物體降解吸收，從而達(dá)到修復(fù)和重建組織體的目的。在組織工程中有三個(gè)核心要素：種子細(xì)胞、組織工程支架材料以及生長(zhǎng)因子。支架材料在組織工程中占有重要的地位，這是因?yàn)樵隗w外細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞需要貼壁生長(zhǎng)，對(duì)于生長(zhǎng)的環(huán)境有者特殊的要求，支架在其中充當(dāng)細(xì)胞外基質(zhì)的作用，為細(xì)胞提供生存空間，使細(xì)胞獲得充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，進(jìn)行代謝交換，并使細(xì)胞形成特定的形態(tài)。

目前，制備組織工程支架的方法有很多種，如凍干法、成孔劑析出法、氣體發(fā)泡法等。但這些方法均存在不同程度的缺陷，如凍干法得到的組織工程多孔支架，在制備過(guò)程中需采用溶劑(一般為有機(jī)溶劑)溶解聚合物，不可避免的會(huì)有有機(jī)溶劑殘留；成孔劑析出法采用一些粒子致孔劑作為致孔相，在后期處理過(guò)程中不能完全去除，制得支架會(huì)存在成孔劑殘留。成孔劑/有機(jī)溶劑的殘留對(duì)于組織工程細(xì)胞培養(yǎng)有嚴(yán)重的不利影響，于細(xì)胞的增殖不利，甚至?xí)?dǎo)致細(xì)胞死亡或者畸變。近年來(lái)，超臨界流體技術(shù)的研究愈發(fā)深入，開(kāi)發(fā)出一種利用超臨界流體發(fā)泡技術(shù)制備組織工程支架材料的方法。該方法制備的支架材料無(wú)任何有機(jī)溶劑的殘留，且操作簡(jiǎn)單，但由于僅通過(guò)超臨界流體發(fā)泡，因而制備得到的支架材料的孔洞一般為閉孔結(jié)構(gòu)，即孔洞之間的連通性較差。由于在組織工程中細(xì)胞培養(yǎng)需要與外界進(jìn)行物質(zhì)交換，閉孔結(jié)構(gòu)非常不利于細(xì)胞的代謝過(guò)程。現(xiàn)有技術(shù)報(bào)道了一種采用超臨界發(fā)泡技術(shù)與不相容聚合物共混制備組織工程支架材料的方法，通過(guò)不相容聚合物(聚乳酸/聚苯乙烯)共混得到聚合物共混物，然后將其中一相(PS相)用有機(jī)溶劑刻蝕掉，即得到多孔的支架材料(Zhou CC,et al.Biofabrication,2011,3(4):1-8)。公開(kāi)號(hào)為CN104592543A的專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了一種具有雙峰孔結(jié)構(gòu)的多孔聚合物材料及其制備方法，通過(guò)熔融共混得到聚合物共混物，經(jīng)超臨界流體處理并發(fā)泡制備得到具有閉孔結(jié)構(gòu)小泡孔的聚合物發(fā)泡材料，再將聚合物發(fā)泡材料通過(guò)刻蝕去除聚合物共混物中一種，得到開(kāi)孔結(jié)構(gòu)的大泡孔。這些方法雖然可以避免超臨界發(fā)泡方法帶來(lái)的支架材料孔洞為閉孔結(jié)構(gòu)的問(wèn)題，但因刻蝕使用有機(jī)溶劑，又會(huì)存在產(chǎn)物中殘留有機(jī)溶劑的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種聚合物組織工程支架材料的制備方法，以獲得無(wú)有機(jī)溶劑殘留并具有開(kāi)孔結(jié)構(gòu)的組織工程多孔支架材料。

本發(fā)明所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法，工藝步驟如下：

(1)以具有生物相容性的非水溶性熱塑性聚合物Ⅰ和水溶性熱塑性聚合物Ⅱ?yàn)樵希凑諢崴苄跃酆衔铫衽c熱塑性聚合物Ⅱ的體積比為(2.5～1):1在室溫下將兩種聚合物進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，然后將預(yù)混物進(jìn)行熔融共混得到熔融共混物；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物真空模壓成坯體，冷卻定型，得到共混坯體；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體后升溫、加壓至該發(fā)泡氣體的超臨界點(diǎn)以上使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓，待超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)后，保持溫度不變以5～15MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，然后經(jīng)冷卻定型，得到發(fā)泡坯體；

(4)將步驟(3)所得發(fā)泡坯體浸入蒸餾水中進(jìn)行刻蝕，刻蝕結(jié)束后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，干燥后得到無(wú)有機(jī)溶劑殘留的組織工程多孔支架材料。

上述方法中，所述水溶性熱塑性聚合物Ⅱ?yàn)榫垡蚁┻量┩橥蚓垡叶嫉取?/p>

上述方法中，所述非水溶性熱塑性聚合物Ⅰ為聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚己內(nèi)酯等中的一種。

上述方法中，所述發(fā)泡氣體為二氧化碳、氮?dú)狻⒖諝庵幸环N。

上述方法中，步驟(4)將聚合物發(fā)泡坯體浸入蒸餾水中進(jìn)行刻蝕的時(shí)間為4～48h，刻蝕過(guò)程中每4h更換一次蒸餾水，蒸餾水的溫度為25℃～50℃。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

1.本發(fā)明所述方法以具有生物相容性的非水溶性熱塑性聚合物Ⅰ和水溶性熱塑性聚合物Ⅱ?yàn)樵希瑢⒊R界流體發(fā)泡與發(fā)泡坯體的刻蝕相結(jié)合，在支架的整個(gè)制備過(guò)程中，不使用任何有機(jī)溶劑，因而所制備的支架材料既無(wú)有機(jī)溶劑殘留，又具有連通性較好、孔徑較大的開(kāi)孔結(jié)構(gòu)。

2、由于所制備的支架材料具有開(kāi)孔結(jié)構(gòu)且無(wú)有機(jī)試劑殘留，因而應(yīng)用于組織工程，更有利于細(xì)胞的培養(yǎng)與增殖。

3.本發(fā)明所述方法制備工藝簡(jiǎn)單，成本低，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，因而便于推廣。

附圖說(shuō)明

圖1是實(shí)施例1所制備的無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程支架材料斷面的掃描電鏡圖。

圖2是實(shí)施例2所制備的無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程支架材料斷面的掃描電鏡圖。

圖3是實(shí)施例3所制備的無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程支架材料斷面的掃描電鏡圖。

圖4是實(shí)施例4所制備的無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程支架材料斷面的掃描電鏡圖。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例并結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程支架材料及其制備方法作進(jìn)一步說(shuō)明。

以下各實(shí)施例中，聚乳酸(PLA)由NatureWorks公司生產(chǎn)，型號(hào)4032D；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，成都市科龍化工試劑廠，牌號(hào)K30；聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)，法國(guó)阿科瑪，LA/GA為75/25；聚乙二醇(PEG)，成都市科龍化工試劑廠，牌號(hào)20000。聚己內(nèi)酯(PCL)，Sigma-Aldrich公司生產(chǎn)。

實(shí)施例1

本實(shí)施例所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法：

(1)按體積比聚乳酸(PLA)∶聚乙烯吡咯烷酮(PVP)＝70∶30稱(chēng)取兩種聚合物，將兩種聚合物在室溫下進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，將預(yù)混物在常壓、180℃下于微型擠出機(jī)中，在80rpm轉(zhuǎn)速下進(jìn)行熔融共混8min，得到兩種聚合物的熔融共混；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物在真空模壓機(jī)上模壓成型，快速冷卻定型得到PLA/PVP片狀共混坯體，所述模壓成型的溫度為180℃，模壓壓力為10MPa，模壓時(shí)間為5min；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體二氧化碳后升溫加壓至溫度140℃、壓力15MPa使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓4h，使二氧化碳超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)，然后保持溫度不變以8MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，繼后停止加熱并通入冷卻水(反應(yīng)釜的夾層中)使高壓反應(yīng)釜降溫，經(jīng)冷卻定型，得到片狀發(fā)泡坯體；

(4)用液氮將步驟(3)得到的發(fā)泡坯體進(jìn)行脆斷后浸入到溫度為30℃的蒸餾水中刻蝕24h，每4h更換一次蒸餾水，刻蝕完成后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，在溫度30℃真空干燥12h，即得到聚乳酸組織工程多孔支架材料，采用掃描電鏡(SEM)對(duì)其斷面進(jìn)行觀察，結(jié)果見(jiàn)圖1，從圖1可以看出，本實(shí)例制備的多孔支架材料孔洞的連通性較好，并且呈現(xiàn)雙峰分布，同時(shí)無(wú)有機(jī)試劑殘留。

實(shí)施例2

本實(shí)施例所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法：

(1)按體積比聚乳酸(PLA)∶聚乙烯吡咯烷酮(PVP)＝60∶40稱(chēng)取兩種聚合物，將兩種聚合物在室溫下進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，將預(yù)混物在常壓、180℃下于微型擠出機(jī)中，在80rpm轉(zhuǎn)速下進(jìn)行熔融共混8min，得到兩種聚合物的熔融共混；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物在真空模壓機(jī)上模壓成型，快速冷卻定型得到PLA/PVP片狀共混坯體，所述模壓成型的溫度為180℃，模壓壓力為10MPa，模壓時(shí)間為5min；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體二氧化碳后升溫加壓至溫度140℃，壓力20MPa使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓4h，使二氧化碳超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)，然后保持溫度不變以10MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，繼后停止加熱并通入冷卻水使高壓反應(yīng)釜降溫，經(jīng)冷卻定型，得到片狀發(fā)泡坯體；

(4)用液氮將步驟(3)得到的發(fā)泡坯體進(jìn)行脆斷后浸入到溫度為30℃的蒸餾水中刻蝕24h，每4h更換一次蒸餾水，刻蝕技術(shù)后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，在溫度30℃真空干燥12h，即得到聚乳酸組織工程多孔支架材料，采用掃描電鏡(SEM)對(duì)其斷面進(jìn)行觀察，結(jié)果見(jiàn)圖2，從圖2可以看出，本實(shí)例制備的多孔支架材料孔洞的連通性較好，并且呈現(xiàn)雙峰分布，，同時(shí)無(wú)有機(jī)試劑殘留。

實(shí)施例3

本實(shí)施例所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法：

(1)按體積比聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)∶聚乙二醇(PEG)＝70∶30稱(chēng)取兩種聚合物，將兩種聚合物在室溫下進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，將預(yù)混物在常壓、140℃下于微型擠出機(jī)中，在80rpm轉(zhuǎn)速下進(jìn)行熔融共混8min，得到兩種聚合物的熔融共混；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物在真空模壓機(jī)上模壓成型，快速冷卻定型得到PLGA/PEG片狀共混坯體，所述模壓成型的溫度為140℃，模壓壓力為10MPa，模壓時(shí)間為3min；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體二氧化碳后升溫加壓至溫度40℃，壓力20MPa使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓4h，使二氧化碳超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)，然后保持溫度不變以10MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，繼后停止加熱并通入冷卻水使高壓反應(yīng)釜系統(tǒng)降溫，經(jīng)冷卻定型，得到片狀發(fā)泡坯體；

(4)用液氮將步驟(3)得到的發(fā)泡坯體進(jìn)行脆斷后浸入到溫度為30℃的蒸餾水中刻蝕24h，每4h更換一次蒸餾水，刻蝕技術(shù)后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，在溫度30℃真空干燥12h，即得到聚乳酸-羥基乙酸共聚物組織工程多孔支架材料，采用掃描電鏡(SEM)對(duì)其斷面進(jìn)行觀察，結(jié)果見(jiàn)圖3，從圖3可以看出，本實(shí)例制備的多孔支架材料孔洞的連通性較好，并且呈現(xiàn)雙峰分布，同時(shí)無(wú)有機(jī)試劑殘留。

實(shí)施例4

本實(shí)施例所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法：

(1)按體積比聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)∶聚乙二醇(PEG)＝60∶40稱(chēng)取兩種聚合物，將兩種聚合物在室溫下進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，將預(yù)混物在常壓、140℃下于微型擠出機(jī)中，在80rpm轉(zhuǎn)速下進(jìn)行熔融共混8min，得到兩種聚合物的熔融共混；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物在真空模壓機(jī)上模壓成型，快速冷卻定型得到PLGA/PEG片狀共混坯體，所述模壓成型的溫度為140℃，模壓壓力為10MPa，模壓時(shí)間為3min；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體二氧化碳后升溫加壓至溫度40℃，壓力20MPa使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓4h，使二氧化碳超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)，然后保持溫度不變以10MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，繼后停止加熱并通入冷卻水使高壓反應(yīng)釜系統(tǒng)降溫，經(jīng)冷卻定型，得到片狀發(fā)泡坯體；

(4)用液氮將步驟(3)得到的發(fā)泡坯體進(jìn)行脆斷后浸入到溫度為30℃的蒸餾水中刻蝕24h，每4h更換一次蒸餾水，刻蝕技術(shù)后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，在溫度30℃真空干燥12h，即得到聚乳酸-羥基乙酸共聚物組織工程多孔支架材料。采用掃描電鏡(SEM)對(duì)其斷面進(jìn)行觀察，結(jié)果見(jiàn)圖4，從圖4可以看出，本實(shí)例制備的多孔支架材料孔洞的連通性較好，并且呈現(xiàn)雙峰分布，同時(shí)無(wú)有機(jī)試劑殘留。

實(shí)施例5

本實(shí)施例所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法：

(1)按體積比聚己內(nèi)酯(PCL)∶聚乙二醇(PEG)＝70∶30稱(chēng)取兩種聚合物，將兩種聚合物在室溫下進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，將預(yù)混物在常壓、80℃下于微型擠出機(jī)中，在80rpm轉(zhuǎn)速下進(jìn)行熔融共混8min，得到兩種聚合物的熔融共混；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物在真空模壓機(jī)上模壓成型，快速冷卻定型得到PLGA/PEG片狀共混坯體，所述模壓成型的溫度為80℃，模壓壓力為10MPa，模壓時(shí)間為3min；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體二氧化碳后升溫加壓至溫度60℃，壓力20MPa使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓1h，使二氧化碳超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)，然后保持溫度不變以7MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，繼后停止加熱并通入冷卻水使高壓反應(yīng)釜系統(tǒng)降溫，經(jīng)冷卻定型，得到片狀發(fā)泡坯體；

(4)用液氮將步驟(3)得到的發(fā)泡坯體進(jìn)行脆斷后浸入到溫度為45℃的蒸餾水中刻蝕10h，每2h更換一次蒸餾水，刻蝕技術(shù)后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，在溫度30℃真空干燥12h，即得到聚己內(nèi)酯組織工程多孔支架材料。采用掃描電鏡(SEM)對(duì)其斷面進(jìn)行觀察，結(jié)果與圖1類(lèi)似。

實(shí)施例6

本實(shí)施例所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法：

(1)按體積比聚己內(nèi)酯(PCL)∶聚乙二醇(PEG)＝60∶40稱(chēng)取兩種聚合物，將兩種聚合物在室溫下進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，將預(yù)混物在常壓、80℃下于微型擠出機(jī)中，在80rpm轉(zhuǎn)速下進(jìn)行熔融共混8min，得到兩種聚合物的熔融共混；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物在真空模壓機(jī)上模壓成型，快速冷卻定型得到PLGA/PEG片狀共混坯體，所述模壓成型的溫度為80℃，模壓壓力為10MPa，模壓時(shí)間為3min；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體二氧化碳后升溫加壓至溫度60℃，壓力20MPa使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓1h，使二氧化碳超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)，然后保持溫度不變以15MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，繼后停止加熱并通入冷卻水使高壓反應(yīng)釜系統(tǒng)降溫，經(jīng)冷卻定型，得到片狀發(fā)泡坯體；

(4)用液氮將步驟(3)得到的發(fā)泡坯體進(jìn)行脆斷后浸入到溫度為25℃的蒸餾水中刻蝕48h，每6h更換一次蒸餾水，刻蝕技術(shù)后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，在溫度30℃真空干燥12h，即得到聚己內(nèi)酯組織工程多孔支架材料。采用掃描電鏡(SEM)對(duì)其斷面進(jìn)行觀察，結(jié)果與圖2類(lèi)似。

實(shí)施例7

本實(shí)施例所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法：

(1)按體積比聚乳酸(PLA)∶聚乙烯吡咯烷酮(PVP)＝70∶30稱(chēng)取兩種聚合物，將兩種聚合物在室溫下進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，將預(yù)混物在常壓、180℃下于微型擠出機(jī)中，在80rpm轉(zhuǎn)速下進(jìn)行熔融共混8min，得到兩種聚合物的熔融共混；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物在真空模壓機(jī)上模壓成型，快速冷卻定型得到PLA/PVP片狀共混坯體，所述模壓成型的溫度為180℃，模壓壓力為10MPa，模壓時(shí)間為5min；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體氮?dú)夂笊郎丶訅褐翜囟?30℃，壓力20MPa使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓5h，使超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)，然后保持溫度不變以10MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，繼后停止加熱并通入冷卻水使高壓反應(yīng)釜降溫，經(jīng)冷卻定型，得到片狀發(fā)泡坯體；

(4)用液氮將步驟(3)得到的發(fā)泡坯體進(jìn)行脆斷后浸入到溫度為30℃的蒸餾水中刻蝕24h，每4h更換一次蒸餾水，刻蝕技術(shù)后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，在溫度30℃真空干燥12h，即得到聚乳酸組織工程多孔支架材料。采用掃描電鏡(SEM)對(duì)其斷面進(jìn)行觀察，結(jié)果與圖1類(lèi)似。

實(shí)施例8

本實(shí)施例所述無(wú)有機(jī)溶劑殘留的聚合物組織工程多孔支架材料的制備方法：

(1)按體積比聚乳酸(PLA)∶聚乙烯吡咯烷酮(PVP)＝60∶40稱(chēng)取兩種聚合物，將兩種聚合物在室溫下進(jìn)行預(yù)混合得到預(yù)混物，將預(yù)混物在常壓、180℃下于微型擠出機(jī)中，在80rpm轉(zhuǎn)速下進(jìn)行熔融共混8min，得到兩種聚合物的熔融共混；

(2)將步驟(1)得到的熔融共混物在真空模壓機(jī)上模壓成型，快速冷卻定型得到PLA/PVP片狀共混坯體，所述模壓成型的溫度為180℃，模壓壓力為10MPa，模壓時(shí)間為5min；

(3)將步驟(2)所得共混坯體置于高壓反應(yīng)釜中，通入發(fā)泡氣體氮?dú)夂笊郎丶訅褐翜囟?30℃，壓力20MPa使其轉(zhuǎn)變?yōu)槌R界流體并保溫保壓5h，使超臨界流體在共混坯體中達(dá)到飽和狀態(tài)，然后保持溫度不變以10MPa/s的速率將高壓反應(yīng)釜中的壓力降至常壓使共混坯體發(fā)泡，繼后停止加熱并通入冷卻水使高壓反應(yīng)釜降溫，經(jīng)冷卻定型，得到片狀發(fā)泡坯體；

(4)用液氮將步驟(3)得到的發(fā)泡坯體進(jìn)行脆斷后浸入到溫度為30℃的蒸餾水中刻蝕24h，每4h更換一次蒸餾水，刻蝕技術(shù)后依次用乙醇、蒸餾水反復(fù)洗滌除去雜質(zhì)，在溫度30℃真空干燥12h，即得到聚乳酸組織工程多孔支架材料。采用掃描電鏡(SEM)對(duì)其斷面進(jìn)行觀察，結(jié)果與圖2類(lèi)似。