本發明涉及藥物領域，具體而言，涉及一種藥物組合物及其制備方法、應用。

背景技術：

皮膚老化是機體衰老的外在表現，是一個復雜的、多因素綜合作用的過程，可導致皮膚組織學和功能性損傷。皮膚衰老通常分為內源性衰老和外源性老化，前者即自然衰老，是由遺傳因素等引起的不可逆過程，后者是指由于環境因素如紫外線輻射、吸煙、風吹日曬或接觸有毒有害化學物質等引起的皮膚老化。

皮膚光老化的主要臨床表現為皮膚松弛、結節、皮革樣外觀、明顯干燥和脫屑，光老化部位皮膚呈黃色或灰黃色、較粗糙、用力伸展時皺紋不會消失，久之則出現色素斑點或類似老年斑等色素沉著異常，甚至表現為深淺不均的色素失調現象。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種藥物組合物及其制備方法、應用，其旨在減緩或者改善皮膚光老化的問題。

本發明提供一種技術方案：

一種藥物組合物，該藥物組合物的原料包括按重量份數計的以下組分：

玫瑰5-15份、甘草30-100份、珍珠露水草1-5份、廣藿香10-40份。

進一步地，上述玫瑰8-10份、甘草60-65份、珍珠露水草2-3份、廣藿香24-28份。

上述的藥物組合物的制備方法，其包括：將粉碎的藥物組合物的原料進行萃取；萃取為co2超臨界萃取、微波輔助萃取或者超聲波輔助提取中的一種。

進一步地，上述原料采用co2超臨界萃取，包括：

將裝有粉碎的原料的萃取釜在co2超臨界流體內浸泡，控制萃取釜中壓力為24-30mpa；然后將浸泡后的物質分離釜中進行分離，控制分離釜中壓力為5-7.5mpa，加溫至35-42℃，分離時間為1-5小時；去除co2得到有效成分。

進一步地，上述原料采用微波輔助萃取，包括：

將混合有原料與乙醇的混合物置于微波萃取儀中，萃取2-4次，每次萃取時間為20-30s，向萃取液中加入硫酸鈉或硫酸鎂，去除有機溶劑，得到有效成分。

進一步地，上述乙醇與原料的比例為3-5ml/g。

進一步地，上述原料采用超聲波輔助提取，包括：

將混合有原料與乙醚的混合物進行超聲提取20-40min，超聲的頻率為80-120hz，提取2-4次，回收提取液中的乙醚，得到有效成分。

進一步地，上述乙醚與原料的比例為8-12ml/g。

進一步地，上述制備方法還包括混合中鏈脂肪酸甘油酯nct、辛普高效增溶劑sf-410以及有效成分。

進一步地，上述藥物組合物在制備抗皮膚衰老藥物中的應用。

本發明實施例提供的一種藥物組合物及其制備方法、應用的有益效果是：

本發明提供的乳液、藥物組合物能顯著改善紫外線輻射誘導的皮膚宏觀損傷和組織病理學病變，并能顯著提高皮膚組織中抗氧化酶的活力，降低脂質過氧化物mda的含量，抑制炎癥因子的過度表達和細胞外基質的降解，維持彈性纖維、膠原纖維結構的完整性，從而保護皮膚免受紫外線輻射的損害。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1示出了對小鼠宏觀觀察統計學分析數據；

圖2示出了實驗期間各組皮膚厚度(n＝9)；

圖3示出了小鼠皮膚膠原纖維光密度值和膠原含量；

圖4示出了小鼠皮膚組織中cat(a)、gsh-px(b)和sod(c)活力以及mda(d)含量的測定結果；

圖5示出了小鼠皮膚組織中炎性因子il-1β(a)、il-6(b)、tnf-a(c)、cox-2(d)以及pge2(e)含量的測定結果；

圖6示出了小鼠皮膚組織中mmp-1(a)及mmp-3(b)含量的測定結果。

具體實施方式

為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。

下面對本發明實施例的一種藥物組合物及其制備方法、應用進行具體說明。

一種藥物組合物，該藥物組合物的原料包括按重量份數計的以下組分：

玫瑰5-15份、甘草30-100份、珍珠露水草1-5份、廣藿香10-40份。

本發明的原料中，玫瑰為薔薇科的灌木玫瑰的花；甘草為豆科植物甘草的根和根狀莖；珍珠露水草為鴨跖草科植物蛛絲毛藍耳草的根；廣藿香為唇形科植物廣藿香的干燥地上部分。

玫瑰具有理氣解郁、活血散淤的功效，能夠溫養人的心肝血脈，舒發體內郁氣，從而達到去除黑斑，防皺紋的目的。

廣藿香的化學成分主要為揮發油、黃酮和生物堿三大類。其中,揮發油是其主要的活性成分，主要成分為廣藿香醇、廣藿香酮以及廣藿香烯。廣藿香及其揮發油具有抗炎鎮痛、抗氧化、抗過敏、抗菌、止嘔、胃腸道調節和免疫調節等藥效。

從甘草中提取的甘草次酸對氧自由基具有清除作用。

從珍珠露水草中提取的蛻皮激素具有很強的滲透性，在液態狀態下能快速被皮膚吸收，增強細胞新陳代謝及活化，具有良好的去角質、去斑增白以及修復面部黃褐斑、外傷性黑斑、雀斑、黑色素沉著等作用，還能有效促進膠原蛋白的合成。

發明人發現采用按重量份數計的5-15份的玫瑰、30-100份的甘草、1-5份的珍珠露水草以及10-40份的廣藿香可以有效預防皮膚衰老，可以治療或者預防皮膚松弛、結節，老化部位呈黃色或灰黃色、較粗糙、用力伸展時皺紋不會消失，產生各種斑點等問題。

進一步地，上述的原料包括按重量份數計的：玫瑰8-10份、甘草60-65份、珍珠露水草2-3份以及廣藿香24-28份。具體地，在本實施例中，玫瑰9.5份、甘草62份、珍珠露水草2.5份、廣藿香26份。

本發明還提供一種上述的藥物組合物的制備方法，其包括：將粉碎的藥物組合物的原料進行提取；該提取方法為萃取為co2超臨界萃取、微波輔助萃取以及超聲波輔助提取中的一種。

具體地，將上述的藥物粉碎，粉碎后采用對原料中的有效組分進行提取，萃取的方法為：co2超臨界萃取、微波輔助萃取或者超聲波輔助提取中的一種。

進一步地，采用co2超臨界萃取，具體方法如下：將原料粉碎至粒徑為10-16目，將粉碎后的原料裝入萃取釜內，將萃取釜在co2超臨界流體內浸泡2小時，控制萃取釜中壓力為24-30mpa。

然后將浸泡后的物質置于分離釜中進行分離，控制分離釜中壓力為5-7.5mpa，加溫至35-42℃，分離時間為1-5小時；去除co2得到有效成分。

此外，如果采用微波輔助萃取法對原料進行提取，具體操作步驟如下：

將原料粉碎至30-50目，混合原料將混合有原料與乙醇的混合物置于微波萃取儀中，在300w的功率下萃取2-4次，每次萃取時間為20-30s，合并、過濾得到萃取液并靜置使其分層，去掉水層后加入適量的無水硫酸鈉或者無水硫酸鎂，旋蒸去除有機溶劑，得到有效成分。

進一步地，上述乙醇與原料的比例為3-5ml/g；具體地，乙醇與原料的比例為4ml/g。

在其他實施例中，采用超聲波輔助提取原料，具體操作步驟如下：

將原料粉碎至20-30目，將混合有原料與乙醚的混合物進行超聲提取20-40min，超聲的頻率為80-120hz，提取2-4次，去除提取液中的乙醚，得到有效成分。

進一步地，上述乙醚與原料的比例為8-12ml/g。具體地乙醚與原料的比例為10ml/g。

進一步地，上述制備方法好包括混合中鏈脂肪酸甘油酯nct、辛普高效增溶劑sf-410以及有效成分。

具體地，將中鏈脂肪酸甘油酯nct、辛普高效增溶劑sf-410以及上述的有效成分與水混合均勻，即可封裝。

本發明還提供一種方案，藥物組合物在制備抗皮膚衰老藥物中的應用。

在本發明的其他實施例中，也可將上述的藥物組合物制備為面膜等其他護膚品。

以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。

實施例1

本實施例提供了一種藥物組合物，該藥物組合物主要由以下步驟制得：

稱量原料：玫瑰50g、甘草300g、珍珠露水草10g以及廣藿香100g，混合上述原料后粉碎至10目，將粉碎后的原料裝入萃取釜內，將萃取釜在co2超臨界流體內浸泡2小時，控制萃取釜中壓力在24-30mpa的范圍內。然后將浸泡后的物質置于分離釜中進行分離，控制分離釜中壓力為5-7.5mpa，加溫至35℃，分離釜中分離時間為1小時；去除co2得到有效成分。

實施例2

本實施例提供了一種藥物組合物，該藥物組合物主要由以下步驟制得：

稱量原料：玫瑰500g、甘草3333g、珍珠露水草135g以及廣藿香1390g。

混合上述原料后粉碎至14目，將粉碎后的原料裝入萃取釜內，將萃取釜在co2超臨界流體內浸泡2小時，控制萃取釜中壓力在24-30mpa的范圍內。然后將浸泡后的物質置于分離釜中進行分離，控制分離釜中壓力為5-7.5mpa，加溫至42℃，分離釜中分離時間為5小時；去除co2得到有效成分。

實施例3

本實施例提供了一種藥物組合物，該藥物組合物主要由以下步驟制得：

稱量原料：稱量玫瑰150g、甘草1000g、珍珠露水草50g以及廣藿香400g。

混合上述原料后粉碎至30目，將粉碎后的原料與4800ml的乙醇裝入燒瓶中，將燒瓶置于微波萃取儀中，在300w的功率下萃取3次，每次萃取時間為25s；將3次的萃取液合并、過濾并靜置使其分層，去掉水層后加入適量無水硫酸鈉靜置過夜，旋轉蒸發除去有機溶劑，得揮發油有效成分。

實施例4

本實施例提供了一種藥物組合物，該藥物組合物主要由以下步驟制得：

稱量原料：稱量玫瑰80g、甘草600g、珍珠露水草20g以及廣藿香240g。

混合上述原料后粉碎至30目，將粉碎后的原料與3760ml的乙醇裝入燒瓶中，將燒瓶置于微波萃取儀中，在300w的功率下萃取2次，每次萃取時間為30s；將2次的萃取液合并、過濾并靜置使其分層，去掉水層后加入適量無水硫酸鎂靜置過夜，旋轉蒸發除去有機溶劑，得揮發油有效成分。

實施例5

本實施例提供了一種藥物組合物，該藥物組合物主要由以下步驟制得：

稱量原料：玫瑰500g、甘草3333g、珍珠露水草135g、廣藿香1390g。混合上述原料后粉碎至40目，將原料以及21432ml無水乙醇裝入燒瓶中，將燒瓶置于微波萃取儀中，在300w的功率下3次，每次萃取時間為25s；將3次的萃取液合并、過濾并靜置使其分層，去掉水層后加入適量無水硫酸鎂靜置過夜，旋轉蒸發除去有機溶劑，得揮發油有效成分。

實施例6

本實施例提供了一種藥物組合物，該藥物組合物主要由以下步驟制得：

稱量原料：玫瑰8g、甘草60g、珍珠露水草2g以及廣藿香24g。混合上述原料后粉碎至20目，將原料以及940ml乙醚裝入萃取瓶中，進行超聲提取20min，超聲的頻率為80hz，提取2次，收集、合并提取液后去除提取液中的乙醚，得到有效成分。

實施例7

本實施例提供了一種藥物組合物，該藥物組合物主要由以下步驟制得：

稱量原料：玫瑰10g、甘草65g、珍珠露水草3g以及廣藿香28g。混合上述原料后粉碎至30目，將原料以及848ml乙醚裝入萃取瓶中，進行超聲提取40min，超聲的頻率為120hz，提取4次，收集、合并提取液后去除提取液中的乙醚，得到有效成分。

實施例8

本實施例提供了一種藥物組合物，該藥物組合物主要由以下步驟制得：

稱量原料：玫瑰95g、甘草62g、珍珠露水草25g、廣藿香26g。混合上述原料后粉碎至20目，將原料以及1080ml乙醚裝入萃取瓶中，進行超聲提取40min，超聲的頻率為100hz，提取2次，收集、合并提取液后去除提取液中的乙醚，得到有效成分。

試驗例

將實施例1制得的藥物組合物抗小鼠皮膚光老化作用實驗。

將實施例1制得的有效成分溶于丙二醇-乙醇(8:2，vol/vol)的溶劑中，配制成濃度分別為4，8，16mg/ml的藥物組合物。

實驗小鼠：km小鼠，體重約18～22g，雌性，spf級，購于廣州中醫藥大學實驗動物中心，動物合格證號為：scxk(粵)2013-0020。

雌性km小鼠63只，動物在溫度為23±2℃、濕度為55±10％和光暗周期12h的spf級環境下飼養，自由飲水進食，正常飼養一周后，隨機平均分成7組，分別為：正常對照組(naivecontrol，nc)、脫毛對照組(shamcontrol，sc)、模型對照組(modelcontrol，mc)、溶媒對照組(vehiclecontrol，vc)、藥物組合物低劑量組(藥物-l)、藥物組合物中劑量組(藥物-m)、藥物組合物高劑量組(藥物-h)，實驗周期為十周。對上述km小鼠的分組與給藥情況如表1所示。表中：uv照射是指紫外線照射。

表1實驗小鼠分組處理與給藥情況

對上述實驗組每周五次(周三，周日除外)進行給藥，給藥情況如表1。

皮膚光老化動物模型的制備如下：

將3根uva燈管(波長：320-400nm，峰值：365nm)和7根uvb燈管(波長：285-350nm，峰值：310-315nm)并列穿插安裝于自制的紫外線輻射箱中，作為輻射光源。造模前，uv燈管預熱10min，并隔一定時間用紫外輻射儀(waldmannuv800,germany)進行紫外輻射強度測定，待光源穩定后，再將相應組別小鼠分別放入自制的不銹鋼鼠籠內，鼠籠與箱內uv燈管相距30cm進行照射。預實驗結果及相關參考文獻表明，最小紅斑量(med)為100mj/cm²。因此，uva聯合uvb的輻射劑量第一周按一個med(100mj/cm²)進行照射，每周照射5次，往后每周照射劑量比前一周遞增一個med，直至第四周4個med為止，之后保持4個med直至第十周實驗結束，紫外輻照總劑量達17j/cm2。

實施例1制得的藥物組合物抗小鼠皮膚光老化進行檢測，檢測過程以及檢測結果評價標準如下：

1.皮膚宏觀評價

實驗期間，每周六對小鼠背部皮膚與光老化相關的宏觀特征(彈性、皺紋、增厚、粗糙、紅斑等)進行觀察評價。用乙醚將小鼠麻醉后對其背部正中皮膚進行拍照，并根據表2所示皮膚光老化評分標準對其皮膚進行宏觀評分(0-正常皮膚，6-嚴重受損皮膚)，共檢查十周。

表2皮膚光老化評價準則

2.皮膚彈性測試(提皮測試)

根據tsukahara等人建立的提皮測試方法對小鼠皮膚彈性進行評價，用乙醚將小鼠輕度麻醉后，將小鼠背部皮膚沿其正中線靠后的位置用拇指和食指輕輕提起(以小鼠四肢不懸空為度，后立即放開，并記錄皮膚恢復至初始狀態的時間)，共檢查十周。

3.皮膚厚度測量

用乙醚將小鼠輕度麻醉后，用同樣方法將小鼠背部皮膚輕輕提起，用游標卡尺測量小鼠皮膚厚度(mm)，記錄。每周進行皮膚厚度測量，共檢查十周。

檢測以及測試結果如下：

1.藥物組合物對光老化小鼠背部皮膚宏觀表現的影響

在整個實驗期間，sc組小鼠呈現正常的皮膚紋理，皮膚細膩、紅潤、有光澤，未見皺紋及松弛現象，提示脫毛操作對小鼠皮膚的宏觀表現無影響。紫外線輻射造模四周后，mc組和vc組小鼠開始出現粗深皺紋、紅斑、水腫、不規則增厚以及皮革樣等典型的皮膚光老化宏觀損傷，提示皮膚光老化模型建立成功且溶媒丙二醇-乙醇對紫外線輻射誘導的皮膚光老化無保護作用。在第十周末，藥物-h組小鼠背部皮膚呈現健康的光滑狀態，伴隨少量細小皺紋；藥物-m組小鼠未見肉色皮損現象，但可見少量淺皺紋；雖然藥物-l組小鼠仍出現深皺紋和輕微紅斑等光老化現象，但較vc組有明顯的好轉。造模四周后，mc組與vc組的皮膚宏觀評分較sc組顯著升高(p<0.05)，而mc組與vc組之間的宏觀評分無顯著差異(p>0.05)，與sc組比較，從第六周開始，藥物治療組的宏觀評分顯著降低(p<0.05)。上述實驗結果提示，藥物對紫外線輻射誘導的皮膚宏觀損傷有抑制作用。

2.藥物組合物對光老化小鼠皮膚彈性的影響

圖1示出了對小鼠宏觀觀察統計學分析數據，具體地，圖1中，a表示實驗期間各組宏觀表現評分；b表示實驗期間各組提皮恢復時間。#p<0.05vs.sc組；*p<0.05vs.vc組(x±s，n＝9)。

由圖1可知，皮膚彈性測試結果提示，從第四周開始，mc組與vc組的提皮恢復時間較sc組顯著延長(p<0.05)，皮膚彈性顯著降低，而mc組與vc組的提皮恢復時間相似，差異無統計學意義(p>0.05)。從第六周開始，實施例1的藥物組合物給藥后，提皮恢復時間均較vc組顯著降低(p<0.05)，皮膚彈性顯著升高，其中以中高劑量組更為顯著。上述實驗結果顯示，局部給予實施例1的藥物組合物治療可顯著對抗紫外線誘導光老化小鼠的皮膚彈性下降。

3.藥物組合物對光老化小鼠皮膚厚度的影響

圖2示出了實驗期間各組皮膚厚度(n＝9)，由圖2中的實驗結果可知，小鼠皮膚厚度測量結果顯示，在整個實驗期間，各組小鼠皮膚逐漸增厚，其中以mc組及vc組小鼠皮膚增厚最為嚴重，兩組無顯著性差異(p>0.05)，提示本實驗造模成功且溶媒丙二醇-乙醇治療對紫外線誘導的皮膚異常增厚無對抗作用。從第五周開始mc組與vc組的小鼠皮膚厚度均較sc組顯著增厚(p<0.05)。從第七周開始，與vc組相比較，局部涂敷實施例1提供的藥物組合物能顯著抑制紫外線輻射引起的皮膚增厚(p<0.05)，其中以藥物-h組治療效果最好。

4.藥物組合物對光老化小鼠皮膚組織結構的影響

對紫外線輻射誘導的光老化小鼠皮膚組織結構損傷進行觀察。nc與sc組小鼠呈現出清晰完整的健康皮膚組織結構，表皮層較薄且厚度均勻，角質層正常無過度角質化現象；表皮與真皮間呈現波浪狀連接，明顯可見表皮突與真皮乳頭；真皮處可見排列規則且結構完整的毛囊與皮脂腺，未見出血及炎性浸潤。相比之下，mc組與vc組小鼠呈現典型的皮膚光老化組織結構特征，紫外線輻射引起角質層角化過度，表皮不規則增厚；表皮層與真皮層間的波浪狀連接趨于平緩，表皮突與真皮乳頭消失；此外，真皮層出現出血及大量的炎性細胞浸潤現象。藥物-l組的皮膚組織結構情況較mc組與vc組有一定程度的改善，角質層角化程度有所減輕，表皮層厚度有所下降，毛囊、皮脂腺結構較為完整，未見出血現象但可見少量炎性浸潤。藥物-m與藥物-h組呈現出相對完整的皮膚組織結構，表皮層厚度顯著下降，角質層厚度亦恢復正常；表皮與真皮連接處趨于波浪狀，可見表皮突與真皮乳頭；真皮層中毛囊與皮脂腺排列規則，且未見出血與炎性細胞浸潤情況。上述病理學檢查結果表明，本實施例提供的藥物組合物對皮膚光老化小鼠皮膚組織結構具有保護作用。

5.藥物組合物對光老化小鼠皮膚彈性纖維的影響

彈性纖維賦予皮膚彈性，具有支撐、抗牽拉的作用，并對外界機械損傷有防護作用。彈性纖維的數量與分布情況都將直接影響皮膚的外觀。nc組與sc組可見清晰的彈性纖維網狀結構，形態細長，排列整齊有序，提示脫毛操作對彈性纖維的結構無破壞作用。而施加長期慢性紫外線輻射后，mc組與vc組的皮膚彈性纖維均出現增粗、扭曲、斷裂、變性、排列紊亂無規則等典型皮膚光老化特征，部分甚至降解成顆粒狀或無定形團塊。藥物-l組小鼠皮膚彈性纖維較vc組有所好轉，呈現細長狀態且排列較有序；藥物-m組可見細長且排列有序的彈性纖維，部分呈交織狀；藥物-h組小鼠的皮膚彈性纖維有明顯的改善，其數量顯著上升，且呈細長交織狀，排列整齊有序，部分已恢復網狀結構。上述結果提示，實施例1提供的藥物組合物能抵御紫外線輻射引起的彈性纖維損傷，維持其正常的生理結構形態。

6.藥物組合物對光老化小鼠皮膚膠原纖維的影響

膠原纖維主要由膠原蛋白構成，賦予皮膚張力和韌性，維持皮膚的充盈程度。nc組與sc組真皮膠原纖維呈波浪狀，排列整齊有規則，分布均勻，相互交錯，疏密有致。而經十周的紫外線輻射后，mc與vc組真皮膠原纖維含量減少，排列紊亂無規則，分布不均，斷裂稀疏。經實施例1提供的藥物組合物治療后，光老化小鼠真皮膠原纖維均有一定程度的恢復。藥物-l組皮膚切片可見波浪狀膠原纖維，排列均勻有序，但分布稍稀疏；藥物-m組與藥物-h組真皮膠原纖維呈波浪狀，排列整齊有序，分布均勻，其致密程度雖不及nc組與sc組，但亦比mc組vc組有顯著的上升。

圖3示出了小鼠皮膚膠原纖維光密度值和膠原含量，進一步地，圖3a示出了masson染色切片膠原纖維光密度值(od)結果，masson染色切片膠原纖維光密度值(od)結果如圖3a所示，nc組與sc的膠原纖維od值無顯著性差異(p>0.05)，提示脫毛操作對膠原纖維的密度無顯著影響。mc組與sc組比較，真皮膠原纖維od值顯著降低(p<0.05)；而mc組與vc組比較，二者的膠原纖維od值無顯著性差異(p>0.05)，提示皮膚光老化模型建立成功，及溶媒對膠原纖維的密度無明顯影響。與vc組比較，實施例1的藥物組合物治療能顯著增加真皮膠原纖維的od值，其中以高劑量的效果最佳，接近正常水平。上述結果表明，實施例1得到的藥物組合物具有保護膠原纖維免受紫外線輻射損傷的作用。

圖3b示出了膠原含量結果，nc組與sc組比較，二者的膠原含量無顯著性意義(p>0.05)，同時，mc組與vc組比較，二者的膠原含量差異亦無統計學意義(p>0.05)，提示脫毛操作及溶媒對膠原含量均無明顯影響。但與sc組相比較，mc組的膠原含量大約下降20％，而與vc組比較，藥物-m組與藥物-h組的膠原含量分別提高16.65％和17.90％。試劑盒測定膠原含量結果與上述的膠原纖維染色的觀察結果基本一致，所以，實施例1的藥物組合物可促進膠原的合成或抑制膠原的降解。

7.藥物組合物提高光老化小鼠皮膚組織中抗氧化酶的活性

圖4示出了小鼠皮膚組織中cat(a)、gsh-px(b)和sod(c)活力以及mda(d)含量的測定結果。其中：#p<0.05vs.sc組；*p<0.05vs.vc組(x±s，n＝9)。

抗氧化酶(cat、gsh-px和sod)的活性是評價機體抗氧化能力的重要指標。由圖4可知，nc組與sc組比較，二者抗氧化酶(cat、gsh-px和sod)的活性無明顯差異(p>0.05)，同時，mc組與vc組比較，二者抗氧化酶的活性亦無明顯差異(p>0.05)，提示脫毛操作與溶媒均不引起抗氧化酶活性的顯著變化。而與sc組比較，長期紫外線輻射導致mc組的cat、gsh-px和sod活力分別下降了38.76％，23.81％和22.50％(p<0.05)，提示mc組小鼠機體內氧化應激壓力顯著上升，皮膚光老化模型建立成功。與vc組比較，皮膚涂布給予藥物組合物治療可顯著增加抗氧化酶(cat、gsh-px和sod)的活力。尤其以藥物-h組的治療效果最佳，使cat活性提高63.01％，gsh-px活性提高38.21％及sod活性提高16.41％(與vc組比較，p<0.05)。上述實驗結果提示，本發明提供的藥物組合物能顯著提升皮膚組織中抗氧化酶的活性，從而對抗紫外線輻射誘導的體內氧化應激壓力的顯著上升。

8.藥物組合物降低光老化小鼠皮膚組織中mda的含量

mda是機體內脂質過氧化反應的產物，是評價體內脂質過氧化程度的重要指標。如圖4d所示，nc組與sc組比較，二者間mda含量的差異無統計學意義(p>0.05)，同時，mc組與vc組比較，二者間mda含量的差異亦無統計學意義(p>0.05)，提示脫毛操作與溶媒對mda的含量均無明顯影響。與sc組比較，mc組與vc組的mda含量升高了約1倍(p<0.05)，提示紫外線輻射誘導較為嚴重的脂質過氧化程度，本實驗造模成功。相反，與vc組比較，藥物組合物能顯著降低mda的含量，結果呈劑量依賴關系。其中以中高劑量藥物組合物的治療效果較優(p<0.05)。上述實驗結果表明，藥物組合物治療能顯著減輕紫外線輻射誘導的皮膚脂質過氧化程度。

9.藥物組合物抑制光老化小鼠皮膚組織中炎癥介質的過度表達

圖5示出了小鼠皮膚組織中炎性因子il-1β(a)、il-6(b)、tnf-a(c)、cox-2(d)以及pge2(e)含量的測定結果。其中，#p<0.05vs.sc組；*p<0.05vs.vc組(x±s，n＝9)。

如圖5所示，nc組與sc組之間或mc組與vc組之間的炎癥因子(il-1β，il-6，tnf-α，cox-2以及pge2)含量水平相近，均無顯著性差異(p>0.05)，提示脫毛操作與溶媒對炎癥因子的含量均無顯著影響。與sc組比較，紫外線輻射可引起mc組與vc組各類炎癥因子含量的顯著增加(p<0.05)。而藥物組合物治療可降低il-1β、il-6、tnf-α、cox-2以及pge2等各種炎癥因子的異常表達，其中以中高劑量的效果較好(與vc組比較，p<0.05)。上述結果提示，藥物組合物能抑制與皮膚光老化相關的炎癥因子的過度表達。

10.藥物組合物抑制光老化小鼠皮膚組mmp-1與mmp-3的異常分泌mmps

圖6示出了小鼠皮膚組織中mmp-1(a)及mmp-3(b)含量的測定結果。其中，#p<0.05vs.sc組；*p<0.05vs.vc組(x±s，n＝9)。

mmp-1與mmp-3，是降解膠原的主要酶類，可引起皮膚的松弛和皺紋。如圖6示，nc組與sc組之間或mc組與vc組之間mmp-1與mmp-3的水平均相近，均無顯著性差異(p>0.05)，而與sc組比較，mc組小鼠皮膚組織中mmp-1與mmp-3的含量分別升高21.88％和30.70％(p<0.05)。上述結果提示，脫毛操作與溶媒對mmps含量均無顯著影響，且本實驗皮膚光老化模型建立成功。相反，與vc組比較，雖然藥物-l組mmp-1含量沒有明顯下降，但藥物-m組與藥物-h組mmp-1含量則呈顯著的下降趨勢(與vc組比較，p<0.05)；而藥物組合物三個劑量組均可顯著抑制紫外線輻射誘導的mmp-3異常分泌(與vc組比較，p<0.05)。上述實驗結果表明，藥物組合物能顯著降低紫外線輻射誘導的mmps的異常分泌，從而抑制膠原的過度降解。

需要說明的是，上述試驗例以實施例1制得的藥物組合物進行實驗，相應的，發明人就實施例1-8制得的藥物組合物也進行了上述的實驗，證實了實施例1-8的藥物組合物也具有緩解或者抵抗小鼠皮膚老化的作用。

以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明，對于本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。