本發明涉及抗體藥物偶聯物(adc)和靶向成纖維細胞活化蛋白α(fap)的免疫毒素，并且涉及它們在治療肉瘤中的用途。本發明還涉及使用fap作為生物標志物用于選擇待用靶向fap的adc治療的肉瘤患者。

背景技術：

1、肉瘤是始于如骨或肌肉的組織的癌癥類型。骨和軟組織肉瘤由間充質起源的罕見實體腫瘤的異質組組成。肉瘤腫瘤主要起源于胚胎中胚層(其可影響任何年齡的患者的任何身體部位)。盡管這些腫瘤的療法的進展，轉移和死亡在患有高風險軟組織肉瘤的患者中仍然為重要的問題(cormier等人(2004)，guedes等人(2021)，niederhuber等人(2014))。

2、這些實體腫瘤經常展現顯著的基質反應，諸如所謂的“促結締組織增生基質”或“反應性基質”，其占總腫瘤質量的20-60％并且通過大量的基質細胞和致密的細胞外基質(ecm)的存在來表征。最近的研究已指示基質細胞的促腫瘤作用，如通過以下舉例說明：血管細胞、免疫細胞、成纖維細胞、成肌纖維細胞、脂肪細胞和骨髓衍生的祖細胞(weinberg等人(2007)，nieman等人(2011)，joyce等人(2009)，hanahan等人(2012)，gupta等人(2006)，valastyan等人(2011))。特別是，在各種人癌癥(包括乳腺癌、肺癌、結腸癌和胰腺癌的腫瘤相關基質內經常觀察到數量可觀的癌癥相關成纖維細胞(caf)(kalluri等人(2006)，pietras等人(2010))。與基質的不同組分協調相互作用，caf具有促進新生血管生成和腫瘤生長的能力。caf還顯示為癌癥進展期間對侵襲性腫瘤的發展和腫瘤侵入性至關重要(orimo等人(2005)，erez等人(2010)，olumi等人(1999)，yang等人(2006)，hwang等人(2008)，hu等人(2009)，medema等人(2011)，malanchi等人(2012)，strell等人(2012)，horimoto等人(2012))。caf促進腫瘤細胞在遠處器官中的擴散和浸潤，因而有助于轉移瘤的形成。重要的是，已經指示基質細胞與全身性藥物遞送至腫瘤的失敗以及與耐藥性的發展相關(meads等人(2009)，olive等人(2009)，acharyya等人(2012)，crawford等人(2009)，straussman等人(2012))。

3、平滑肌肉瘤(lms)是惡性間充質腫瘤，其衍生自平滑肌。它是肉瘤最常見的亞型之一，占達至25％的所有軟組織肉瘤(kannan(2022))。lms具有經由血行播散以轉移的傾向。由于平滑肌在身體的許多區域中發現，平滑肌肉瘤可在廣泛的組織中發展，諸如子宮(所有lms的30％)、胃、小腸和腹膜后(所有lms的35％)。一些研究已指示，子宮lms和非子宮lms表現出獨特的疾病生物學。

4、橫紋肌肉瘤是另外的惡性間充質腫瘤。它是兒童中最常見的軟組織肉瘤，占達至50％的所有兒科軟組織肉瘤和3％的所有兒科腫瘤(amer(2019))。它分為六種組織學組：胚胎性、肺泡性、梭形細胞、混合型、多形性和具有神經節分化的橫紋肌肉瘤。

5、未分化的多形性肉瘤(ups)是指未分化和未分類的肉瘤的術語。這種亞型由分化不佳的腫瘤細胞組成，其可呈現為梭形形狀的細胞、組織細胞和巨細胞。

6、基于單克隆抗體(mab)的藥物在對抗癌癥中表現出巨大的前景。這是因為它們允許旨在以精確和特定方式在分子水平上的治療。這些優勢，連同它們的商業吸引力(短的開發時間、有限的能力以及它們一旦被批準即可容易地輸出到其它癌癥類型)，已經促使許多制藥公司大量投資在開發新的基于抗體的分子，以及從生物技術公司獲得新的分子或技術的引入許可中。

7、然而，盡管治療性抗體的臨床成功，靶向細胞表面腫瘤抗原的裸mab本身很少呈現足夠的功效。為了提高mab的低活性，新的策略專注于將它們結合至有毒分子。由于植物和細菌毒素以及小的化療分子非常有效并且以非常小的量具有活性，它們可以是好的候選物。

8、由于在過去幾年取得的技術進步，用于治療癌癥的免疫毒素(it)和抗體-藥物偶聯物(adc)領域最近經歷了制藥公司日益增長的發展，旨在解決它們最初存在的關于免疫原性、不期望的毒性、產量、半衰期和抗性的問題。

9、免疫偶聯物由人、人源化或嵌合重組抗體共價連接到細胞毒素藥物而制成。此類結構的主要目的是將小細胞毒素劑(300至1000da)的能力和靶向腫瘤相關抗原(taa)的mab的高特異性相結合。

10、ab必須非常有選擇性以到達抗原，所述抗原的表達必須限于正常細胞。ab還必須有效地內化到癌細胞中。

11、被選為效應部分的細胞毒素劑必須僅在內化并且釋放到細胞質中之后殺死細胞。在adc中最常用的載荷是dna損害藥物，諸如卡奇霉素類、倍癌霉素類(duocarmicins)，或微管靶向的化合物類，如奧瑞他汀類和美登木素生物堿類。

12、ab-細胞毒素接頭被設計為全身穩定并且在靶細胞內釋放細胞毒素劑。

13、taa經常是細胞膜蛋白，其在患病組織中過表達或至少表達足以促進內化活化的細胞毒素。理想地，抗原在正常組織中呈現限制性表達，其中在重要器官中具有低表達或無表達。除此之外，腫瘤抗原必須被ab選擇性地并且以高親和力地識別。

14、在許多類型的人癌癥中，成纖維細胞反應通過誘導細胞表面蛋白，成纖維細胞活化蛋白α(fapα)(一種95kda的絲氨酸蛋白酶，其表達高度局限于發育中的器官、傷口愈合和組織重塑)來表征。fapα是被充分研究的ii型膜糖蛋白絲氨酸蛋白酶，在癌癥相關成纖維細胞(caf)以及傷口愈合成纖維細胞中上調(ramirez-montagut等人(2004))。在數種腫瘤組織中，fap表達與腫瘤增殖、侵入、血管生成、上皮-至-間充質轉化(emt)、免疫抑制和耐藥性相關(xin等人(2021))。fap呈現出以下特征：

15、·具有ser蛋白酶活性的ii型膜糖蛋白(膠原酶+dpp)

16、·89％人-鼠蛋白同源性

17、·在>90％癌(乳腺癌、胰腺癌、肺癌、膀胱癌和結腸癌)中表達的腫瘤基質

18、·在傷口愈合和器官發育期間，正常成人組織中短暫和高度受限的表達。

19、·fap在各種肉瘤(包括平滑肌肉瘤和橫紋肌肉瘤)的腫瘤細胞中表達。

20、·fap(+)成纖維細胞位于腫瘤血管附近

21、·非常集中的表達

22、·內化

23、·細胞外基質重塑、腫瘤生長和轉移中的牽連。

24、已經在胰腺腫瘤細胞以及腫瘤相關基質成纖維細胞中發現fap表達。fap表達與患者生存期較短和預后不良有關，表明在這類型腫瘤中基于fap的自分泌/旁分泌環路的可能性(shi等人(2012))。

25、通過kontermann和pfizenmaier(izi，斯圖加特大學，德國)的先前工作開發了針對人和鼠蛋白二者的抗fap?mab衍生物(mersmann等人(2001)、brocks等人(2001))。他們在體外已顯示抗fap?scfv免疫脂質體特異性結合fap+細胞并且得到內化(schmidt等人(2001))。他們證明了用脂質和抗fap?scfv覆蓋，并且裝載有tnfα的納米顆粒的抗腫瘤作用(messerschmidt等人(2009))。

26、用鼠mab?fap5-dm1免疫毒素治療誘導了胰腺和肺癌異種移植模型中腫瘤生長的持久抑制和完全消退，沒有任何不耐受相關影響(ostermann等人(2008年))。

27、fap蛋白已經被廣泛證實作為用于在實體瘤中抗癌治療的有趣靶點，并且因此已經經受各種caf靶向方法(kakarla等人(2012)、等人(2020))。在這種背景下，omtx705，新型的靶向fap(+)caf的抗體-藥物偶聯物被開發為具有強效的抗腫瘤功效的替代性基質靶向的治療性化合物。在胰腺癌、nsclc、三陰性乳腺癌和彌漫性胃癌的患者衍生的異種移植小鼠模型中的臨床前研究已經顯示，在這些模型中fap表達與omtx705治療的抗腫瘤功效相關(fabre等人(2020))。

28、fap首次從人肉瘤的反應性基質中分離(rettig等人(1994)，rettig等人(1988))，還發現在骨和組織肉瘤亞群的腫瘤細胞中表達(rettig等人(1993))，與它們的間充質起源相關。最近關于fap蛋白作為肉瘤中癌癥生物標志物的研究證明了骨肉瘤中fap與預后不良之間的一些相關性(zhang等人(2019年))。此外，幾種68ga放射性標記的fap抑制劑小分子的開發已經導致評估它在癌癥成像中臨床作用的研究(kuyumcu等人(2021))的出現。對不同類型的原發性和轉移性腫瘤中68ga-fap?ipet/ct上的腫瘤攝取定量研究揭示了肉瘤患者被包括在最高的68ga-fapi配體攝取的組中。這些高比率導致骨和軟組織肉瘤患者中的高圖像對比度和出色的腫瘤輪廓(kratochwil等人(2019年)、koerber等人(2021年)、kessler等人(2022年))。此外，靶向fap的肽已在用于各種癌癥的放射性核素療法(諸如17lu-fap-2286)和成像中是有效的(諸如68ga-fap-2286)(kwan等人(2021))。

29、盡管有這些進展，仍然存在對用于治療肉瘤(包括平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤和ups)的進一步的治療策略，以及對用于此類治療策略的組分的未滿足的需要。本發明解決了這些和其它需要。

技術實現思路

1、廣義上，本發明涉及抗fap抗體、其偶聯物和用于在抗體偶聯策略中使用的優化的載荷。特別是，本發明人發現如本文描述的抗fap抗體展示了高特異性結合，以及快速和有效的內化。本發明提供了抗fap抗體-細胞溶素偶聯物(其具有wo?2015/118030(其整體通過引用并入本文)中公開的類型)，用于在哺乳動物受試者中治療肉瘤的方法中使用。

2、本文描述的細胞溶素衍生物有利地偶聯至抗fap抗體，用于在治療肉瘤中使用，其中肉瘤通過腫瘤中的fap表達來表征。

3、因此，靶向fap的adc的用途擴展到基質中表達fap的腫瘤之外。

4、因此，在第一方面中，本發明提供了具有式i的抗成纖維細胞活化蛋白α(fap)抗體-細胞溶素偶聯物。

5、a-(l-d)p(i)

6、或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物，用于在哺乳動物受試者中治療肉瘤的方法中使用，其中a是選擇性結合fap的抗fap抗體，l是接頭，d是包括細胞溶素的藥物以及p是1至10，其中肉瘤通過腫瘤中的fap表達來表征。

7、在一些情況下，根據本發明的這個和其它方面，抗fap抗體為選擇性結合人fap和/或鼠fap的胞外區的單克隆抗體或其結合片段。在一些情況下，抗fap抗體可與人和鼠fap二者交叉反應。

8、在具體情況下，抗fap抗體可包括具有以下氨基酸序列的重鏈互補決定區1-3(cdrh1-3)和輕鏈互補決定區1-3(cdrl1-3)：

9、(i)cdrh1：seq?id?no:7；

10、(ii)cdrh2：seq?id?no:8；

11、(iii)cdrh3：seq?id?no:9；

12、(iv)cdrl1：seq?id?no:10；

13、(v)cdrl2：seq?id?no:11；和

14、(vi)cdrl3：seq?id?no:12。

15、在一些實施方式中，cdrh1區可包括與序列seq?id?no:7相比，具有達至1個或2個氨基酸取代的seq?id?no:7的變體。在一些實施方式中，cdrh2區可包括與序列seq?id?no:8相比，具有達至1個或2個氨基酸取代的seq?id?no:8的變體。在一些實施方式中，cdrh3區可包括與序列seq?id?no:9相比，具有達至1個或2個氨基酸取代的seq?id?no:9的變體。在一些實施方式中，cdrl1區可包括與序列seq?id?no:10相比，具有達至1個或2個氨基酸取代的seq?id?no:10的變體。在一些實施方式中，cdrl2區可包括與序列seq?id?no:11相比，具有達至1個或2個氨基酸取代的seq?id?no:11的變體。在一些實施方式中，cdrl3區可包括與序列seq?id?no:12相比，具有達至1個或2個氨基酸取代的seq?id?no:12的變體。

16、在某些情況下，cdrh1-3分別包括氨基酸序列seq?id?no:7-9，并且cdrl1-3分別包括氨基酸序列seq?id?no:10-12。

17、在某些情況下，抗fap抗體包括包含氨基酸序列seq?id?no:5的重鏈可變區(vh)和包含氨基酸序列seq?id?no:6的輕鏈可變區(vl)。在一些實施方式中，重鏈可變區(vh)與seq?id?no:5的全長序列具有至少90％、95％或99％序列同一性。在一些情況下，輕鏈可變區(vl)與seq?id?no:6的全長序列具有至少90％、95％或99％序列同一性。

18、在某些情況下，抗fap抗體包括包含氨基酸序列seq?id?no:1的重鏈和包含氨基酸序列seq?id?no:2的輕鏈。在一些情況下，重鏈與seq?id?no:1的全長序列具有至少90％、95％或99％序列同一性。在一些情況下，輕鏈與seq?id?no:2的全長序列具有至少90％、95％或99％序列同一性。

19、在某些情況下，抗fap抗體包括包含氨基酸序列seq?id?no:3的重鏈和包含氨基酸序列seq?id?no:4的輕鏈。在一些情況下，重鏈與seq?id?no:3的全長序列具有至少90％、95％或99％序列同一性。在一些情況下，輕鏈與seq?id?no:4的全長序列具有至少90％、95％或99％序列同一性。

20、在某些情況下，a可以是競爭性結合抗fap抗體，其結構不同于本文示例的抗fap抗體分子。例如，a可以是抗fap抗體分子，其與本文中鑒定為“hu36”的抗fap?igg1抗體競爭結合固定化重組人fap。hu36具有seq?id?no:3的重鏈氨基酸序列和seq?id?no:4的輕鏈氨基酸序列。在一些情況下，抗fap抗體可結合與hu36相同的表位。用于確定抗體結合競爭和用于表位作圖的方法是本領域眾所周知的，參見例如“epitope?mapping?by?competitionassay”harlow和david?lane編輯，cold?spring?harb?protoc；2006；doi:10.1101/pdb.prot4277。

21、根據本發明的這個和其它方面，d可以是細胞溶素。在一些情況下，細胞溶素可以是wo?2008/138561a1(其整體內容通過引用明確并入本文)中公開的化合物(其中公開的化合物還稱為tubulysine衍生物)。細胞溶素可以如wo?2008/138561中描述的來合成。在某些情況下，細胞溶素可以如wo?2008/138561?a1中的式i或式iv來定義。在某些情況下，細胞溶素可以是式iv：

22、

23、其中：

24、r2是h或c1-c4烷基；

25、r6是c1-c6烷基；

26、r7是c1-c6烷基、ch2or19或ch2ocor20，其中r19為烷基，r20為c2-c6-烯基、苯基或

27、ch2-苯基；

28、r9是c1-c6烷基；

29、r10是h、oh、o-烷基或o-乙?；?；

30、f是1或2；

31、r11具有以下結構：

32、

33、其中：

34、r21是h、oh、鹵素、nh2、烷氧基、苯基、烷基氨基或二烷基氨基；

35、r16是h或c1-c6-烷基基團；

36、r17直接或間接附接至接頭l，和；

37、q是0、1、2或3；

38、并且其中術語“任選取代”涉及基團，其中一個或幾個h原子可被f、cl、br或i或oh、sh、nh2或no2替代；術語“任選取代”進一步涉及基團，其可唯一地或者另外地被未取代的c1-c6烷基、c2c6烯基、c2-c6炔基、c1-c6雜烷基、c3-c10環烷基、c2-c9雜環烷基、c6-c10芳基、c1-c9雜芳基、c7-c12芳烷基或c2-c11雜芳烷基基團取代。

39、在一些情況下，r2是至接頭l的鍵。

40、在一些情況下，r17是c(o)x、conhnhx、ox、nhx或sx，其中x是至接頭l的鍵。

41、在一些實施方式中，接頭l包括間隔物。在一些情況下，間隔物具有長為2至30個原子的鏈。在一些情況下，間隔物包括亞烷基(即二價烷基)或雜亞烷基(即二價雜烷基)基團或由亞烷基(即二價烷基)或雜亞烷基(即二價雜烷基)基團組成。在一些情況下，間隔物包括亞烷基或氧化亞烷基基團或由亞烷基或氧化亞烷基基團組成。

42、在一些實施方式中，間隔物包括–(och2ch2)n–，其中n是2至5。在一些情況下，間隔物包括基團-(ch2)n-或-(och2ch2)n-或由基團-(ch2)n-或-(och2ch2)n-組成，其中n≥1。在一些情況下，間隔物包括基團-(och2ch2)n-或由基團-(och2ch2)n-組成，其中n≥1。特別是，n可以是1至15、1至10、1至6或2至5。例如，n可以是3或4。在一些情況下，間隔物包括在一和六個之間的乙二醇單元，如三乙二醇。在一些情況下，間隔物可直接附接至基團r17，或者可經由橋接基團附接至基團r17。在一些情況下，間隔物經由-c(o)x橋接基團附接至基團r17，其中x是至r17的鍵。在一些情況下，r17是conhnhx，并且間隔物經由-c(o)x橋接基團附接至基團r17，其中x代表在間隔物和r17之間的鍵。在一些情況下，r17是conhnhx，并且間隔物經由-c(o)x橋接基團附接至r17的-(och2ch2)n-，其中n＝2、3或4。

43、在一些實施方式中，l包括用于附接至a的附接基團。

44、在一些實施方式中，l包括包含纈氨酸-瓜氨酸單元的蛋白酶可裂解部分。例如，l可包含馬來酰亞胺基己酰基-纈氨酸-瓜氨酸-p-氨基芐基氨基甲酸根。

45、在一些情況下，細胞溶素具有以下結構：

46、

47、其中*表示附接至l的位點。

48、在一些情況下，d包括具有以下結構的細胞溶素：

49、

50、在一些情況下，馬來酰亞胺的雙鍵與抗體a的半胱氨酸殘基的硫醇基團反應，以形成硫-碳鍵，以實現接頭l對抗體a的鍵合效應。

51、在一些實施方式中，-l-d具有結構：

52、

53、在其它情況下，-l-d具有選自由以下組成的組的結構：

54、

55、

56、在某些情況下，–l-d可具有以下結構：

57、

58、在某些情況下，–l-d可具有以下結構：

59、

60、根據本發明的這個和其它方面，在一些情況下，p可位于1至5，例如1至4或1至3的范圍內。在具體情況下，p可以是1或2。在具體情況下，p可以是3或4。

61、在一些實施方式中，a具有氨基酸序列seq?id?no:3的重鏈和氨基酸序列seq?idno:4的輕鏈；并且l-d具有結構：

62、

63、其中*表示附接至a的點。

64、在一些實施方式中，偶聯物是本文描述為omtx705的偶聯物。omtx705包括經由蛋白酶可裂解的vcpaba-(eg)3優化的接頭偶聯至細胞溶素tam470的人源化抗fap?mab(omtx005)。omtx705描述在fabre等人(2020)中，并且圖7為omtx705的示例性描繪。

65、在一些實施方式中，肉瘤是表達fap(fap+)的平滑肌肉瘤。在某些情況下，偶聯物用于在選自由以下組成的組的平滑肌肉瘤的治療中使用：子宮平滑肌肉瘤、皮膚平滑肌肉瘤、胃腸道平滑肌肉瘤、胃平滑肌肉瘤、小腸平滑肌肉瘤、腹膜后平滑肌肉瘤(retroperitoneal?leiomyosarcoma)或腹部平滑肌肉瘤(abdominal?leiomyosarcoma)。

66、在一些實施方式中，肉瘤是fap+橫紋肌肉瘤。在一些實施方式中，偶聯物用于選自由以下組成的組的橫紋肌肉瘤的治療中使用：胚胎性橫紋肌肉瘤、肺泡性橫紋肌肉瘤、梭形細胞橫紋肌肉瘤、混合型橫紋肌肉瘤、多形性橫紋肌肉瘤和具有神經節分化的橫紋肌肉瘤。

67、在一些實施方式中，肉瘤是fap+未分化的多形性肉瘤(ups)。

68、在一些實施方式中，偶聯物靜脈內施用。

69、在一些實施方式中，偶聯物每周施用。在一些實施方式中，偶聯物每2周施用。在一些實施方式中，偶聯物每月施用。

70、在一些實施方式中，偶聯物以0.1-30mg/kg的劑量范圍施用。在一些實施方式中，偶聯物以10-30mg/kg的劑量范圍施用。在一些實施方式中，偶聯物以10mg/kg施用。在一些實施方式中，偶聯物以20mg/kg施用。在一些實施方式中，偶聯物以30mg/kg施用。

71、在一些實施方式中，偶聯物以4個劑量施用。

72、在一些情況下，用于在肉瘤的治療方法中使用的偶聯物與一種或多種其它抗腫瘤藥物同時、依序或單獨施用。所述一種或多種其它抗腫瘤藥物包括細胞毒素化療劑或抗血管生成劑或免疫治療劑。在一些情況下，所述一種或多種其它抗腫瘤藥物包括吉西他濱、紫杉醇、貝伐單抗、伊曲康唑、羧胺三唑、抗pd-1分子或抗pd-l1分子(例如，納武單抗或派姆單抗)。

73、在第二方面中，本發明提供了選擇已確定患有肉瘤的受試者用于以靶向fap的adc治療的體外方法，所述方法包括測量從受試者獲取的生物樣品中fap表達的水平；確定fap表達的水平在閾值水平以上，并且選擇受試者用于以靶向fap的adc治療。在一些實施方式中，肉瘤是平滑肌肉瘤。在一些實施方式中，肉瘤是橫紋肌肉瘤。在一些實施方式中，肉瘤是ups。在一些實施方式中，抗fap?adc具有式a-(l-d)p，其中a是抗fap抗體并且具有氨基酸序列seq?id?no:3的重鏈和氨基酸序列seq?id?no:4的輕鏈；l-d具有結構:

74、

75、其中*表示附接至a的點并且p是1至10。

76、在一些實施方式中，靶向fap的adc是omtx705。在一些實施方式中，受試者是哺乳動物受試者。在一些實施方式中，受試者是人。在一些實施方式中，生物樣品采集自腫瘤的位點。在一些實施方式中，生物樣品是含核酸的無細胞樣品，例如血漿樣品。

77、在第三方面中，本發明提供了治療哺乳動物受試者中fap+肉瘤的方法，所述方法包括向有需要的受試者施用治療有效量的如根據本發明第一方面定義的偶聯物。在一些實施方式中，方法用于治療fap+平滑肌肉瘤。在一些情況下，方法可用于治療子宮平滑肌肉瘤、皮膚平滑肌肉瘤、胃腸道平滑肌肉瘤、胃平滑肌肉瘤、小腸平滑肌肉瘤、腹膜后平滑肌肉瘤或腹部平滑肌肉瘤。在一些實施方式中，方法用于治療fap+橫紋肌肉瘤。在一些實施方式中，方法可用于治療選自由以下組成的組的橫紋肌肉瘤：胚胎性橫紋肌肉瘤、肺泡性橫紋肌肉瘤、梭形細胞橫紋肌肉瘤、混合型橫紋肌肉瘤、多形性橫紋肌肉瘤和具有神經節分化的橫紋肌肉瘤。在一些實施方式中，方法用于治療fap+ups。

78、在第四方面中，本發明提供了抗成纖維細胞活化蛋白α(fap)抗體-細胞溶素偶聯物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物在制備用于治療fap+肉瘤的藥物中的用途，其中抗體-細胞溶素偶聯物具有式a-(l-d)p，其中a是選擇性結合fap的抗fap抗體，l是接頭，d是包括細胞溶素的藥物以及p是1至10。在一些實施方式中，肉瘤是fap+平滑肌肉瘤。在一些實施方式中，肉瘤是fap+橫紋肌肉瘤。在一些實施方式中，肉瘤為fap+ups。

79、如第一和第二方面中描述的抗體-細胞溶素偶聯物或肉瘤的任何優選特征同樣適用于第三和第四方面。

80、本發明包括所描述的方面和優選特征的組合，除非此類組合明顯是不允許的或被陳述為明確避免的。下面并且參考隨附的實施例和附圖進一步詳細描述本發明的這些和進一步的方面以及實施方式。

81、序列

82、以下序列中，vh和vl結構域標有下劃線，并且cdrh/cdrl區為粗體。導致adcc和cdc缺陷的突變以粗斜體顯示。信號序列(在適用的情況下)以框線顯示。

83、hu36igg1-hc–具有信號序列：

84、

85、hu36-igg1-lc–具有信號序列：

86、

87、

88、hu36-igg1-hc–無信號序列：

89、

90、hu36-igg1-lc–無信號序列：

91、

92、hu36-vh:

93、

94、hu36-vl:

95、

96、hu36-cdrh1:

97、eniih(seq?id?no:7)

98、hu36-cdrh2:

99、wfhpgsgsikynekfkd(seq?id?no:8)

100、hu36-cdrh3:

101、hggtgrgamdy(seq?id?no:9)

102、hu36-cdrl1:

103、rasksvstsaysymh(seq?id?no:10)

104、hu36-cdrl2:

105、lasnles(seq?id?no:11)

106、hu36-cdrl3:

107、qhsrelpyt(seq?id?no:12)

108、人fap

109、還已知為seprase、170kda黑色素瘤膜結合的明膠酶、成纖維細胞活化蛋白α或整合膜絲氨酸蛋白酶。氨基酸序列以uniprot登錄號q12884公開(版本140，日期為2013年12月11日)。

110、mktwvkivfgvatsavlallvmcivlrpsrvhnseentmraltlkdilngtfsyktffpnwisgqeylhqsadnnivlynietgqsytilsnrtmksvnasnyglspdrqfvylesdysklwrysytatyyiydlsngefvrgnelprpiqylcwspvgsklayvyqnniylkqrpgdppfqitfngrenkifngipdwvyeeemlatkyalwwspngkflayaefndtdipviaysyygdeqyprtinipypkagaknpvvrifiidttypayvgpqevpvpamiassdyyfswltwvtdervclqwlkrvqnvsvlsicdfredwqtwdcpktqehieesrtgwaggffvstpvfsydaisyykifsdkdgykhihyikdtvenaiqitsgkweainifrvtqdslfyssnefeeypgrrniyrisigsyppskkcvtchlrkercqyytasfsdyakyyalvcygpgipistlhdgrtdqeikileenkelenalkniqlpkeeikklevdeitlwykmilppqfdrskkyplliqvyggpcsqsvrsvfavnwisylaskegmvialvdgrgtafqgdkllyavyrklgvyevedqitavrkfiemgfidekriaiwgwsyggyvsslalasgtglfkcgiavapvssweyyasvyterfmglptkddnlehyknstvmaraeyfrnvdyllihgtaddnvhfqnsaqiakalvnaqvdfqamwysdqnhglsglstnhlythmthflkqcfslsd(seq?id?no:13)

111、鼠fap

112、還已知為成纖維細胞活化蛋白α或整合膜絲氨酸蛋白酶。氨基酸序列以uniprot登錄號p97321公開(版本117，日期為2013年12月11日)。

113、mktwlktvfgvttlaalalvvicivlrpsrvykpegntkraltlkdilngtfsyktyfpnwiseqeylhqseddnivfynietresyiilsnstmksvnatdyglspdrqfvylesdysklwrysytatyyiydlqngefvrgyelprpiqylcwspvgsklayvyqnniylkqrpgdppfqitytgrenrifngipdwvyeeemlatkyalwwspdgkflayvefndsdipiiaysyygdgqyprtinipypkagaknpvvrvfivdttyphhvgpmevpvpemiassdyyfswltwvsservclqwlkrvqnvsvlsicdfredwhawecpknqehveesrtgwaggffvstpafsqdatsyykifsdkdgykhihyikdtvenaiqitsgkweaiyifrvtqdslfyssnefegypgrrniyrisignsppskkcvtchlrkercqyytasfsykakyyalvcygpglpistlhdgrtdqeiqvleenkelenslrniqlpkveikklkdggltfwykmilppqfdrskkyplliqvyggpcsqsvksvfavnwitylaskegivialvdgrgtafqgdkflhavyrklgvyevedqltavrkfiemgfideeriaiwgwsyggyvsslalasgtglfkcgiavapvssweyyasiyserfmglptkddnlehyknstvmaraeyfrnvdyllihgtaddnvhfqnsaqiakalvnaqvdfqamwysdqnhgissgrsqnhlythmthflkqcfslsd(seq?id?no:14)