本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種rnaaptamer?r1sr13在制備治療急性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、急性缺血性腦卒中(acute?ischemic?stroke，ais)是我國(guó)致死率和致殘率最高的疾病之一，其發(fā)病機(jī)制主要由于大腦局部缺血導(dǎo)致氧氣和葡萄糖供應(yīng)不足，從而引發(fā)神經(jīng)元死亡和功能喪失。研究表明，線粒體功能障礙在ais的病理過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，特別是在缺血半暗帶(ischemic?penumbra)中，線粒體的形態(tài)變化和功能受損是引發(fā)神經(jīng)元凋亡的重要因素。因此，保護(hù)線粒體功能、抑制凋亡反應(yīng)已逐漸成為ais治療的重要策略。

2、在臨床實(shí)踐中，盡管一些藥物(如依達(dá)拉奉和輔酶q10)在保護(hù)線粒體功能或抑制細(xì)胞凋亡方面顯示出一定的作用，但它們的臨床效果受到諸多限制，如生物利用度低、藥效有限、以及動(dòng)脈再通治療的時(shí)間窗口較短等問(wèn)題。此外，鈣通道阻滯劑和低溫治療等方法因藥物滲透性差和潛在并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)而面臨挑戰(zhàn)。目前，神經(jīng)保護(hù)藥物的開發(fā)尚未達(dá)到臨床預(yù)期效果，因此，開發(fā)新型治療策略已成為亟待解決的重要課題。

3、發(fā)明人課題組的前期研究表明，rna結(jié)合蛋白rcan1.1l在促進(jìn)神經(jīng)元凋亡方面具有關(guān)鍵作用。然而，針對(duì)該蛋白的治療策略尚未得到充分開發(fā)。如果能夠研發(fā)一種有效抑制rcan1.1l及其下游效應(yīng)的治療手段，將為急性腦血管疾病的治療提供新的方向，具有重要的臨床意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種rnaaptamer?r1sr13在制備治療急性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明從源頭調(diào)控線粒體凋亡通路，填補(bǔ)了現(xiàn)有治療手段的空白，具有顯著的臨床轉(zhuǎn)化潛力和應(yīng)用前景，為ais的早期干預(yù)和長(zhǎng)期功能恢復(fù)提供了創(chuàng)新的治療策略。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

3、一種rnaaptamer?r1sr13在制備治療急性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，所述rnaaptamer?r1sr13的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

4、auacaacaaaaacaaaaacaagaaa(seq?id?no.1)。

5、rna適配體r1sr13作為一種創(chuàng)新的神經(jīng)保護(hù)藥物，具有高特異性和高親和力，能夠靶向線粒體相關(guān)蛋白或通路，從而實(shí)現(xiàn)更精準(zhǔn)的治療效應(yīng)。其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)還允許進(jìn)行改造，以增強(qiáng)穩(wěn)定性和跨越血腦屏障的能力，克服了現(xiàn)有治療方法的諸多局限性。通過(guò)rna適配體r1sr13的開發(fā)，可以為該治療腦卒中藥物的開發(fā)提供新的治療視角和工具。

6、優(yōu)選地，所示急性腦血管疾病為急性缺血性腦卒中。

7、本發(fā)明還提供了一種制備治療急性缺血性腦卒中的藥物，所述藥物包括有效劑量的rnaaptamer?r1sr13及藥學(xué)上可接受的載體或病毒載體。

8、優(yōu)選地，所示藥學(xué)上可接受的載體包括殼聚糖、膽固醇、脂質(zhì)體和納米顆粒中的至少一種。

9、優(yōu)選地，所述病毒載體包括慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒中的至少一種。

10、優(yōu)選地，所述藥物的劑型為注射劑、口服劑中的一種。

11、本發(fā)明還提供了一種rna結(jié)合蛋白rcan1.1l檢測(cè)試劑，所述檢測(cè)試劑包括如seqid?no.1所示的核苷酸序列。

12、本發(fā)明還提供了一種rna結(jié)合蛋白rcan1.1l檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括所述的檢測(cè)試劑。

13、rcan1(鈣調(diào)磷酸酶調(diào)節(jié)因子1)是一種rna結(jié)合蛋白，發(fā)明人在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，rcan1與ais的線粒體功能障礙和神經(jīng)元凋亡密切相關(guān)。rcan1.1l通過(guò)與atf2?mrna結(jié)合，穩(wěn)定atf2?mrna并促進(jìn)其在受損線粒體內(nèi)的積累，從而激活線粒體凋亡程序。基于此，本發(fā)明通過(guò)系統(tǒng)性配體進(jìn)化富集(selex)篩選獲得一種特異性結(jié)合rcan1.1l的抑制性rnaaptamerr1sr13，其結(jié)構(gòu)能夠與rcan1.1l?56-158蛋白區(qū)域特異性結(jié)合，從而阻止rcan1.1l與atf2mrna的相互作用。

14、在實(shí)際結(jié)合過(guò)程中，r1sr13通過(guò)與rcan1.1l蛋白的結(jié)合，競(jìng)爭(zhēng)性地與atf2?mrna結(jié)合，減少atf2?mrna在線粒體內(nèi)的積累，從而減少mtatf2蛋白的水平。atf2蛋白的減少有效抑制了線粒體功能障礙和凋亡，減輕ais中缺血半暗帶區(qū)域的神經(jīng)元死亡。在小鼠mcao模型中，r1sr13顯著減少了ais的梗死體積，減輕了線粒體形態(tài)損傷，降低了cyt?c、cleavedcaspase-9和cleaved?caspase-3的水平，抑制了線粒體誘導(dǎo)的凋亡。此外，在sh-sy5y細(xì)胞中，r1sr13處理能夠顯著改善線粒體膜電位(δψm)、降低活性氧(ros)產(chǎn)生，并提高mtdna水平。

15、因此，本發(fā)明篩選出的r1sr13作為一種特異性結(jié)合rcan1.1l的rna適配體，具有高度靶向性和分子機(jī)制明確的優(yōu)勢(shì)，能夠通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合rcan1.1l蛋白，阻斷atf2?mrna在線粒體內(nèi)的積累，顯著改善線粒體功能，減少活性氧(ros)產(chǎn)生，恢復(fù)線粒體膜電位(δψm)和維持線粒體dna水平，從而有效保護(hù)缺血半暗帶中的神經(jīng)元，抑制線粒體誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。在小鼠mcao模型和人類sh-sy5y細(xì)胞中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，r1sr13顯著降低了腦梗死體積和關(guān)鍵凋亡蛋白(cyt?c、cleaved?caspase-9和cleaved?caspase-3)的表達(dá)水平，展現(xiàn)出強(qiáng)大的線粒體保護(hù)和神經(jīng)保護(hù)作用。相比傳統(tǒng)的神經(jīng)保護(hù)劑或抗氧化劑，r1sr13在作用機(jī)制上更加精準(zhǔn)，能夠從源頭調(diào)控線粒體凋亡通路，填補(bǔ)了現(xiàn)有治療手段的空白，具有顯著的臨床轉(zhuǎn)化潛力和應(yīng)用前景，為ais的早期干預(yù)和長(zhǎng)期功能恢復(fù)提供了創(chuàng)新的治療策略。

16、綜上可知，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)勢(shì)：本發(fā)明通過(guò)抑制rcan1.1l與atf2?mrna的結(jié)合，使篩選出的r1sr13能夠有效保護(hù)受損神經(jīng)元的線粒體功能，減緩神經(jīng)元凋亡，從而為ais的治療提供新的靶向治療策略。

技術(shù)特征：

1.一種rnaaptamer?r1sr13在制備治療急性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述rnaaptamer?r1sr13的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所示急性腦血管疾病為急性缺血性腦卒中。

3.一種制備治療急性缺血性腦卒中的藥物，其特征在于，所述藥物包括有效劑量的rnaaptamer?r1sr13及藥學(xué)上可接受的載體或病毒載體。

4.如權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于，所示藥學(xué)上可接受的載體包括殼聚糖、膽固醇、脂質(zhì)體和納米顆粒中的至少一種。

5.如權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于，所述病毒載體包括慢病毒載體、腺病毒載體、腺相關(guān)病毒中的至少一種。

6.如權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于，所述藥物的劑型為注射劑、口服劑中的一種。

7.一種rna結(jié)合蛋白rcan1.1l檢測(cè)試劑，其特征在于，所述檢測(cè)試劑包括如seq?idno.1所示的核苷酸序列。

8.一種rna結(jié)合蛋白rcan1.1l檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求7所述的檢測(cè)試劑。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種RNA?aptamer?R1SR13在制備治療急性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的RNA?aptamer，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，該aptamer能夠特異性結(jié)合RCAN1.1L蛋白，并通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合ATF2mRNA，從而抑制RCAN1.1L與ATF2mRNA的相互作用，減少ATF2在線粒體內(nèi)的積累，保護(hù)線粒體功能，抑制細(xì)胞凋亡，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)急性腦血管疾病的病理過(guò)程。因此，本發(fā)明為急性腦血管疾病的治療提供了一種新思路，有助于進(jìn)一步擴(kuò)大RNA的應(yīng)用范圍。

技術(shù)研發(fā)人員：運(yùn)巖,陳玉國(guó),孫秀蓮,姬彥彬,馬曉春
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東大學(xué)齊魯醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/28