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一種應用磷脂酶C將胞內蛋白在胞外表達的方法與流程

文檔序號:12411234閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種基因工程菌,其特征在于,以大腸桿菌為宿主,表達磷脂酶C;所述磷脂酶C的氨基酸序列如SEQ ID NO.1-3任一所示。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,還共表達目標蛋白;所述目標蛋白是胞內定位蛋白;所述胞內定位蛋白是在伴侶蛋白的輔助下,合成于核糖體后仍定位在細胞基質中的蛋白。

3.根據權利要求2所述的基因工程菌,其特征在于,所述目標蛋白包括蔗糖磷酸化酶,海藻糖酶。

4.根據權利要求3所述的基因工程菌,其特征在于,所述磷脂酶C與目標蛋白是以pETDuet-1為載體進行共表達;所述基因工程菌以E.coli BL21(DE3)為宿主。

5.構建權利要求2所述基因工程菌的方法,其特征在于,將編碼磷脂酶C的基因和編碼目標蛋白的基因分別連接到pETDuet-1表達載體的多克隆位點MCS1或MCS2上,得到重組表達質粒,然后將重組質粒轉化到宿主菌中。

6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述編碼磷脂酶C的基因包括SEQ ID NO.4-6。

7.一種將胞內蛋白在胞外表達的方法,其特征在于,將磷脂酶C與目標蛋白在大腸桿菌中共表達;所述磷脂酶C的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

8.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述胞內蛋白是在伴侶蛋白的輔助下,合成于核糖體后仍定位在細胞基質中的蛋白。

9.一種生產胞外蛋白的方法,其特征在于,所述方法是將權利要求1所述基因工程菌接種至發酵培養基中進行發酵,離心,收集發酵上清液。

10.權利要求7-9任一所述方法在食品、生物、醫藥、化工領域生產蛋白類物質方面的應用。

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