背景技術(shù)：

1、第13型17β-羥基類固醇脫氫酶(hsd17b13)為17β-羥基類固醇脫氫酶(hsd17b)酶家族的成員，該家族的成員具有各種功能，包括例如性激素、脂肪酸及膽汁酸的活體內(nèi)還原或氧化(moeller及adamski(2009)mol?cell?endocrinol?301:7)。hsd17b家族的成員的組織分布、次細胞定位、催化優(yōu)先性有所差異，且由于其還催化類固醇以外的其他底物(例如脂質(zhì)及類視色素)的轉(zhuǎn)化而具有不同的底物特異性(marchais-oberwinkler等人,(2011)jsteroid?biochem?mol?biol?125(1-2):66-82)。已證明，hsd17b13增強正常小鼠肝臟中及經(jīng)培養(yǎng)的人類肝細胞中的肝臟脂肪生成(su等人,(2014)proc?natl?acad?sci?usa?111:11437)。

2、肝細胞形成肝臟的實質(zhì)組織，負責(zé)動員脂質(zhì)獲取能量且以脂滴(ld)的形式儲存多余的脂質(zhì)，使得肝臟成為負責(zé)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)的主要器官。

3、ld現(xiàn)在被公認(rèn)為參與脂質(zhì)代謝、膜運輸及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的生物活性細胞器。ld通常由中性脂質(zhì)(諸如三酸甘油酯(tg)及膽固醇酯的核心及環(huán)繞該核心的磷脂/膽固醇單層構(gòu)成。許多l(xiāng)d特異性蛋白質(zhì)與ld膜締合，且起到例如控制分子進出ld的通量的作用。主要的肝細胞ld相關(guān)蛋白質(zhì)為圍脂滴蛋白(perilipin)家族的成員，但非圍脂滴蛋白，諸如缺氧誘導(dǎo)蛋白2(hig2)、含patanin樣磷脂酶域蛋白3(pnpla3)及hsd17b13，還經(jīng)鑒別為ld相關(guān)蛋白質(zhì)(carr及ahima(2016)exp?cell?res?15:187；su等人,(2014)proc?natl?acad?sci?usa111:11437)。

4、ld積聚增加與許多代謝疾病及慢性纖維發(fā)炎性肝病有關(guān)，諸如肝纖維化、nash及nafld。hsd17b13已經(jīng)鑒別為表達最豐富的ld蛋白質(zhì)之一，其特異性定位于患有nafld的人類個體及小鼠的ld表面。在患有nafld的患者及小鼠的肝臟中，hsd17b13的表達量還顯示上調(diào)。hsd17b13的過度表達造成ld的數(shù)目及大小的增加。c57bl/6小鼠中hsd17b13的肝臟過度表達顯著增加肝臟中的脂肪生成及tg含量，導(dǎo)致脂肪肝表型。

5、目前，尚無對于慢性纖維發(fā)炎性肝病的治療。目前對于患有慢性纖維發(fā)炎性肝病的個體的標(biāo)準(zhǔn)護理包括生活方式修正以及管理相關(guān)合并癥，例如高血壓、高脂血癥、糖尿病、肥胖等。因此，由于慢性纖維發(fā)炎性肝病的盛行在過去10年中逐漸增加且預(yù)期仍將增加，因此在本領(lǐng)域中需要對于患有慢性纖維發(fā)炎性肝病的個體的替代治療。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明至少部分基于以下發(fā)現(xiàn)：向患有nash的個體施用(例如皮下施用)靶向hsd17b13基因的rnai劑(例如ad-288996)降低hsd17b13?mrna的水平且在六個月內(nèi)降低肝酶及活檢獲得的非酒精性脂肪肝病(nafld)活動度評分(nas)。

2、因此，在一個方面中，本發(fā)明提供一種降低個體中的hsd17b13?mrna水平的方法。該方法包括向該個體施用治療有效量(例如約25mg至約800mg的劑量)的dsrna劑或其醫(yī)藥組合物，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-augcuuuugcauggacuaucu-3'(seq?id?no:26)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-agauagtccaugcaaaagcauuc-3'(seq?id?no:27)，藉此降低該個體中的hsd17b13?mrna水平。在一些實施例中，該個體罹患hsd17b13相關(guān)疾病、病癥或病狀。此外，在一些實施例中，該個體罹患至少一種選自以下的病狀：慢性纖維發(fā)炎性肝病、與肝臟中脂滴的積聚和/或膨脹相關(guān)的慢性纖維發(fā)炎性肝病、肝臟發(fā)炎、肝纖維化、脂肪肝病(脂肪變性)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、非酒精性脂肪肝病(nafld)、肝硬化、酒精性脂肪性肝炎(ash)、酒精性肝病(ald)、hcv相關(guān)肝硬化、藥物誘導(dǎo)的肝損傷、肝細胞壞死及肥胖。

3、在另一方面中，本發(fā)明提供一種治療罹患hsd17b13相關(guān)疾病、病癥或病狀(例如非酒精性脂肪性肝炎(nash))的個體的方法。該方法包括向該個體施用治療有效量(例如約25mg至約800mg的劑量)的dsrna劑或其醫(yī)藥組合物，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-augcuuuugcauggacuaucu-3'(seq?id?no:26)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-agauagtccaugcaaaagcauuc-3'(seq?id?no:27)，藉此治療罹患hsd17b13相關(guān)疾病、病癥或病狀(例如非酒精性脂肪性肝炎(nash))的個體。

4、在一個實施例中，在治療6個月之后，hsd17b13?mrna水平至少降低至基線水平的約70％、65％、60％、55％或50％。

5、在另一方面中，本發(fā)明提供一種預(yù)防患有將得益于hsd17b13基因表達降低的疾病、病癥或病狀(例如非酒精性脂肪性肝炎(nash))的個體的至少一種癥狀的方法。該方法包括向該個體施用預(yù)防有效量(例如約25mg至約800mg的劑量)的dsrna劑或其醫(yī)藥組合物，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-augcuuuugcauggacuaucu-3'(seq?id?no:26)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-agauagtccaugcaaaagcauuc-3'(seq?id?no:27)，藉此預(yù)防患有將得益于hsd17b13基因表達降低的疾病、病癥或病狀(例如非酒精性脂肪性肝炎(nash))的個體的至少一種癥狀。

6、在另一方面中，本發(fā)明提供一種降低患有脂肪變性的個體發(fā)展出慢性肝病的風(fēng)險的方法。該方法包括向該個體施用治療有效量(例如約25mg至約800mg的劑量)的dsrna劑或其醫(yī)藥組合物，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-augcuuuugcauggacuaucu-3'(seq?id?no:26)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-agauagtccaugcaaaagcauuc-3'(seq?id?no:27)，藉此降低患有脂肪變性的個體發(fā)展出慢性肝病的風(fēng)險。

7、在又另一方面中，本發(fā)明提供一種抑制罹患脂肪變性的個體的脂肪變性進展為脂肪性肝炎的方法。該方法包括向該個體施用治療有效量(例如約25mg至約800mg的劑量)的dsrna劑或其醫(yī)藥組合物，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-augcuuuugcauggacuaucu-3'(seq?id?no:26)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-agauagtccaugcaaaagcauuc-3'(seq?id?no:27)，藉此抑制個體的脂肪變性進展為脂肪性肝炎。

8、在一個方面中，本發(fā)明提供一種抑制罹患hsd17b13相關(guān)疾病、病癥或病狀(例如非酒精性脂肪性肝炎(nash))的個體的肝臟中的脂滴積聚的方法。該方法包括向該個體施用治療有效量(例如約25mg至約800mg的劑量)的dsrna劑或其醫(yī)藥組合物，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-augcuuuugcauggacuaucu-3'(seq?id?no:26)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-agauagtccaugcaaaagcauuc-3'(seq?id?no:27)，藉此抑制罹患hsd17b13相關(guān)疾病、病癥或病狀(例如非酒精性脂肪性肝炎(nash))的個體的肝臟中的脂肪積聚。

9、在一個實施例中，向個體施用該dsrna劑或該醫(yī)藥組合物引起個體肝臟中hsd17b13酶活性的降低、hsd17b13蛋白質(zhì)積聚的減少，和/或脂肪積聚和/或脂滴膨脹的減少。

10、在一個實施例中，該hsd17b13相關(guān)疾病、病癥或病狀為慢性纖維發(fā)炎性肝病。

11、在一個實施例中，該慢性纖維發(fā)炎性肝病選自由以下組成的組：肝臟中脂肪積聚、肝臟發(fā)炎、肝纖維化、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、非酒精性脂肪肝病(nafld)、肝硬化、酒精性脂肪性肝炎(ash)、酒精性肝病(ald)、hcv相關(guān)肝硬化、藥物誘導(dǎo)的肝損傷及肝細胞壞死。

12、在一個實施例中，該慢性纖維發(fā)炎性肝病為非酒精性脂肪性肝炎(nash)。

13、在一個實施例中，該個體為人類個體。

14、在一些實施例中，該個體為肥胖的。

15、在一些實施例中，該dsrna劑包含至少一個經(jīng)修飾的核苷酸。

16、在一些實施例中，該有義鏈的實質(zhì)上所有核苷酸均包含修飾。在一些實施例中，該反義鏈的實質(zhì)上所有核苷酸均包含修飾。在一些實施例中，該有義鏈的實質(zhì)上所有核苷酸及該反義鏈的實質(zhì)上所有核苷酸均包含修飾。

17、在一些實施例中，所述經(jīng)修飾的核苷酸中的至少一個選自由以下組成的組：脫氧核苷酸、3'端脫氧胸腺嘧啶(dt)核苷酸、2'-o-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、鎖核苷酸、解鎖核苷酸、構(gòu)形受限核苷酸、限制性乙基核苷酸、無堿基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-o-烯丙基修飾的核苷酸、2'-c-烷基修飾的核苷酸、2'-羥基修飾的核苷酸、2'-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2'-o-烷基修飾的核苷酸、n-嗎啉基核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然堿基的核苷酸、四氫吡喃修飾的核苷酸、1,5-無水己糖醇修飾的核苷酸、環(huán)己烯基修飾的核苷酸、包含硫代磷酸酯基團的核苷酸、包含甲基膦酸酯基團的核苷酸、包含5'-磷酸酯的核苷酸、包含5'-磷酸酯模擬物的核苷酸、二醇修飾的核苷酸及2-o-(n-甲基乙酰胺)修飾的核苷酸，以及其組合。

18、在一些實施例中，所述核苷酸修飾為2'-o-甲基和/或2'-氟修飾。

19、在一些實施例中，該dsrna劑的各鏈的長度不超過30個核苷酸。在一些實施例中，該dsrna劑的各鏈的長度獨立地為19至30個核苷酸。在一些實施例中，該dsrna劑的各鏈的長度獨立地為19至25個核苷酸。在一些實施例中，該dsrna劑的各鏈的長度獨立地為21至23個核苷酸。

20、在一些實施例中，該dsrna劑的至少一個鏈包含至少1個核苷酸的3'突出端。在一些實施例中，該dsrna劑的至少一個鏈包含至少2個核苷酸的3'突出端。

21、在一些實施例中，該dsrna劑進一步包含配體。在一些實施例中，該配體與該dsrna劑的該有義鏈的3'端共軛。

22、在一些實施例中，該配體為n-乙酰基半乳糖胺(galnac)衍生物。

23、在一些實施例中，該配體為

24、

25、在一些實施例中，該dsrna劑與配體共軛，如以下示意圖中所示

26、

27、且其中x為o或s。

28、在一些實施例中，x為o。

29、在一些實施例中，該有義鏈包含核苷酸序列5'-asusgcuuufugfcfafuggacuaucu-3'(seq?id?no:24)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-asgfsauag(tgn)ccaugcafaafagcaususc-3'(seq?id?no:25)，其中af為2'-氟腺苷-3'-磷酸酯；cf為2'-氟胞苷-3'-磷酸酯；gf為2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯；gfs為2'-氟鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為尿苷-3'-磷酸酯；uf為2'-氟尿苷-3'-磷酸酯；a為2'-o-甲基腺苷-3'-磷酸酯；as為2'-o-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯；c為2'-o-甲基胞苷-3'-磷酸酯；cs為2'-o-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯；g為2'-o-甲基鳥苷-3'-磷酸酯；gs為2'-o-甲基鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為2'-o-甲基尿苷-3'-磷酸酯；us為2'-o-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯；tgn為胸苷-二醇核酸(gna)s異構(gòu)物；且s為硫代磷酸酯鍵聯(lián)。

30、在一些實施例中，該dsrna劑與配體共軛，如以下示意圖中所示

31、

32、且其中x為o。

33、在一個方面中，本發(fā)明提供一種治療罹患非酒精性脂肪性肝炎(nash)的個體的方法，該方法包含向該個體施用約25mg至約800mg的劑量的靶向hsd17b13基因的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-asusgcuuufugfcfafuggacuaucu-3'(seq?id?no:24)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-asgfsauag(tgn)ccaugcafaafagcaususc-3'(seq?id?no:25)，其中af為2'-氟腺苷-3'-磷酸酯；cf為2'-氟胞苷-3'-磷酸酯；gf為2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯；gfs為2'-氟鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為尿苷-3'-磷酸酯；uf為2'-氟尿苷-3'-磷酸酯；a為2'-o-甲基腺苷-3'-磷酸酯；as為2'-o-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯；c為2'-o-甲基胞苷-3'-磷酸酯；cs為2'-o-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯；g為2'-o-甲基鳥苷-3'-磷酸酯；gs為2'-o-甲基鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為2'-o-甲基尿苷-3'-磷酸酯；us為2'-o-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯；tgn為胸苷-二醇核酸(gna)s異構(gòu)物；且s為硫代磷酸酯鍵聯(lián)；其中該dsrna劑與具有以下結(jié)構(gòu)的配體共軛

34、且其中該配體與該有義鏈的3'端共軛，如以下示意圖中所示

35、其中x為o。

36、在一個方面中，本發(fā)明提供一種預(yù)防患有非酒精性脂肪性肝炎(nash)的個體的至少一種癥狀的方法，該方法包含向該個體施用約25mg至約800mg的劑量的靶向hsd17b13基因的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-asusgcuuufugfcfafuggacuaucu-3'(seq?id?no:24)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-asgfsauag(tgn)ccaugcafaafagcaususc-3'(seq?id?no:25)，其中af為2'-氟腺苷-3'-磷酸酯；cf為2'-氟胞苷-3'-磷酸酯；gf為2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯；gfs為2'-氟鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為尿苷-3'-磷酸酯；uf為2'-氟尿苷-3'-磷酸酯；a為2'-o-甲基腺苷-3'-磷酸酯；as為2'-o-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯；c為2'-o-甲基胞苷-3'-磷酸酯；cs為2'-o-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯；g為2'-o-甲基鳥苷-3'-磷酸酯；gs為2'-o-甲基鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為2'-o-甲基尿苷-3'-磷酸酯；us為2'-o-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯；tgn為胸苷-二醇核酸(gna)s異構(gòu)物；且s為硫代磷酸酯鍵聯(lián)；其中該dsrna劑與具有以下結(jié)構(gòu)的配體共軛

37、且其中該配體與該有義鏈的3'端共軛，如以下示意圖中所示

38、其中x為o。

39、在一個方面中，本發(fā)明提供一種降低患有脂肪變性的個體發(fā)展出慢性肝病的風(fēng)險的方法，該方法包含向該個體施用約25mg至約800mg的劑量的靶向hsd17b13基因的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-asusgcuuufugfcfafuggacuaucu-3'(seq?id?no:24)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-asgfsauag(tgn)ccaugcafaafagcaususc-3'(seq?id?no:25)，其中af為2'-氟腺苷-3'-磷酸酯；cf為2'-氟胞苷-3'-磷酸酯；gf為2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯；gfs為2'-氟鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為尿苷-3'-磷酸酯；uf為2'-氟尿苷-3'-磷酸酯；a為2'-o-甲基腺苷-3'-磷酸酯；as為2'-o-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯；c為2'-o-甲基胞苷-3'-磷酸酯；cs為2'-o-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯；g為2'-o-甲基鳥苷-3'-磷酸酯；gs為2'-o-甲基鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為2'-o-甲基尿苷-3'-磷酸酯；us為2'-o-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯；tgn為胸苷-二醇核酸(gna)s異構(gòu)物；且s為硫代磷酸酯鍵聯(lián)；其中該dsrna劑與具有以下結(jié)構(gòu)的配體共軛

40、且其中該配體與該有義鏈的3'端共軛，如以下示意圖中所示

41、其中x為o。

42、在一個方面中，本發(fā)明提供一種抑制罹患脂肪變性的個體的脂肪變性進展為脂肪性肝炎的方法，該方法包含向該個體施用約25mg至約800mg的劑量的靶向hsd17b13基因的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-asusgcuuufugfcfafuggacuaucu-3'(seq?id?no:24)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-asgfsauag(tgn)ccaugcafaafagcaususc-3'(seq?id?no:25)，其中af為2'-氟腺苷-3'-磷酸酯；cf為2'-氟胞苷-3'-磷酸酯；gf為2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯；gfs為2'-氟鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為尿苷-3'-磷酸酯；uf為2'-氟尿苷-3'-磷酸酯；a為2'-o-甲基腺苷-3'-磷酸酯；as為2'-o-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯；c為2'-o-甲基胞苷-3'-磷酸酯；cs為2'-o-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯；g為2'-o-甲基鳥苷-3'-磷酸酯；gs為2'-o-甲基鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為2'-o-甲基尿苷-3'-磷酸酯；us為2'-o-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯；tgn為胸苷-二醇核酸(gna)s異構(gòu)物；且s為硫代磷酸酯鍵聯(lián)；其中該dsrna劑與具有以下結(jié)構(gòu)的配體共軛

43、且其中該配體與該有義鏈的3'端共軛，如以下示意圖中所示

44、其中x為o。

45、在一個方面中，本發(fā)明提供一種抑制罹患非酒精性脂肪性肝炎(nash)的個體的肝臟中的脂滴積聚的方法，該方法包含向該個體施用約25?mg至約800?mg的劑量的靶向hsd17b13基因的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中該dsrna劑包含形成雙鏈區(qū)的有義鏈及反義鏈，其中該有義鏈包含核苷酸序列5'-asusgcuuufugfcfafuggacuaucu-3'(seqid?no:24)且該反義鏈包含核苷酸序列5'-asgfsauag(tgn)ccaugcafaafagcaususc-3'(seqid?no:25)，其中af為2'-氟腺苷-3'-磷酸酯；cf為2'-氟胞苷-3'-磷酸酯；gf為2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯；gfs為2'-氟鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為尿苷-3'-磷酸酯；uf為2'-氟尿苷-3'-磷酸酯；a為2'-o-甲基腺苷-3'-磷酸酯；as為2'-o-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯；c為2'-o-甲基胞苷-3'-磷酸酯；cs為2'-o-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯；g為2'-o-甲基鳥苷-3'-磷酸酯；gs為2'-o-甲基鳥苷-3'-硫代磷酸酯；u為2'-o-甲基尿苷-3'-磷酸酯；us為2'-o-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯；tgn為胸苷-二醇核酸(gna)s異構(gòu)物；且s為硫代磷酸酯鍵聯(lián)；其中該dsrna劑與具有以下結(jié)構(gòu)的配體共軛

46、且其中該配體與該有義鏈的3'端共軛，如以下示意圖中所示

47、其中x為o。

48、在一個實施例中，本發(fā)明的方法進一步包括向個體施用另外的治療劑。

49、在一些實施例中，本發(fā)明的方法進一步包含確定個體的nafld活動度評分(nas)、氣球樣變評分、小葉發(fā)炎評分、脂肪變性評分和/或纖維化評分。

50、在一些實施例中，dsrna劑以約25mg、約100mg、約200mg、約300mg、約400mg、約500mg、約600mg、約700mg或約800mg的劑量向個體施用。

51、在一些實施例中，dsrna劑每月、每2個月、每3個月、每4個月、每5個月、每6個月或每12個月向個體施用。

52、在一些實施例中，dsrna劑每月以約25mg的劑量向個體施用。在一些實施例中，dsrna劑每月以約200mg的劑量向個體施用。在一些實施例中，dsrna劑每月以約400mg的劑量向個體施用。

53、在一些實施例中，dsrna劑每三個月以約25mg的劑量向個體施用。在一些實施例中，dsrna劑每三個月以約200mg的劑量向個體施用。在一些實施例中，dsrna劑每三個月以約400mg的劑量向個體施用。

54、在一些實施例中，dsrna劑經(jīng)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下向個體施用。