本公開一般涉及細胞免疫療法，并且特別涉及用于改善細胞存活、增殖、信號傳導(dǎo)等的包含哺乳動物細胞的組合物和方法，所述哺乳動物細胞包含至少一種嵌合銜接子多肽和一種或多種嵌合受體。

背景技術(shù)：

1、從早期專注于基本淋巴因子激活和/或腫瘤浸潤到最近的工程改造免疫細胞以表達遺傳工程化抗原受體(諸如嵌合抗原受體(car))的策略，過繼細胞療法已經(jīng)歷了超過三十年的近乎不斷迭代。然而，盡管一路上有一些跡象表明各種方法具有治療潛力，但仍然存在無數(shù)問題。

2、一個問題涉及過繼細胞療法靶標的表達較低或丟失(即，抗原逃逸)的問題。具體來講，對過繼性(或甚至是先天性)細胞療法產(chǎn)生抗性的常見機制是出現(xiàn)靶抗原丟失或下調(diào)的細胞類型(例如，腫瘤)。這種丟失或下調(diào)可導(dǎo)致過繼性(或先天性)細胞反應(yīng)功效降低(majzner?rg和mackall,cl.(2018)cancer?discovery,8(10):1219-26)。

3、另一個相關(guān)問題是能夠識別與特定疾病相關(guān)細胞上特異性存在的配體的天然存在的受體的下調(diào)，這也會導(dǎo)致細胞對各種疾病狀況的反應(yīng)無效。作為一個代表性實例，nkg2d是一種激活免疫受體，其存在于人的自然殺傷(nk)細胞、cd8+αβt細胞和γδt細胞上，調(diào)節(jié)先天性和過繼性免疫反應(yīng)。nkg2d的天然配體包括mica和micb以及若干種ul16結(jié)合蛋白(bauer?s等人(1999)science,第285卷5428:727-729；burgess?s.j.等人(2008)immunolres,2008,40(1):18-34)。在人中，nkg2d配體不在正常細胞上表達，但在轉(zhuǎn)化或病毒感染的癌細胞上以不同的水平廣泛表達(參見，例如，bauer?s等人(1999)science,第285卷5428:727-729；burgess?s.j.等人(2008)immunol?res,40(1):18-34；baugh?r等人(2020)cancers?12(12):3827)。nkg2d配體在腫瘤細胞表面上的表達通過結(jié)合nkg2d激活nk細胞并且共刺激效應(yīng)t細胞，使腫瘤細胞對免疫細胞介導(dǎo)的破壞敏感。因此，nkg2d受體及其配體是癌癥免疫療法的感興趣的靶標。

4、然而不幸的是，nkg2d在其最被需要的時候可能會被下調(diào)。例如，腫瘤衍生的腫瘤生長因子-β(tgf-β)可下調(diào)nkg2d，從而減少nk和cd8+細胞對腫瘤細胞的殺傷(參見，例如，crane,c.等人(2010)neuro-oncology,12(1):7–13；以及dasgupta,s.等人(2005)journalof?immunol,175:5541-50)。這進而與腫瘤治療的不良預(yù)后有關(guān)。

5、以nkg2d為例，證明了本領(lǐng)域需要組合物和方法，其尤其可以改善例如免疫細胞存活和增殖、防止受體下調(diào)、以及補償例如作為過繼免疫療法的靶標的抗原的免疫逃逸。此類組合物和方法將改善接受過繼免疫療法的患者的預(yù)后。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明通過包含嵌合銜接子(cad)多肽(包含人dap10)和至少一種嵌合受體的哺乳動物細胞及其使用方法解決了現(xiàn)有技術(shù)中的上述缺點，任選地其中cad多肽與至少一種嵌合受體締合。如本文首次闡述和證明的，主題cad構(gòu)建體和多肽可以提高能夠識別各種細胞表面上的靶抗原的受體(例如，嵌合和/或非嵌合的)的穩(wěn)定性，促進受體-靶標結(jié)合時的細胞信號傳導(dǎo)途徑的良好平衡，和/或改善與至少一種嵌合受體的各種配體(例如，nkg2d)結(jié)合后，以及任選地與cad多肽締合的非嵌合受體的各種配體結(jié)合后引起的功能性質(zhì)(例如，增強的細胞溶解、增殖、存活和/或共刺激性質(zhì))。

2、在一個方面，本發(fā)明提供了一種哺乳動物細胞，其包含嵌合銜接子(cad)多肽，所述cad多肽包含dap10結(jié)構(gòu)域、共刺激結(jié)構(gòu)域和/或細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域中的至少一個，并且特定地缺乏包含功能性細胞外受體和/或配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的胞外結(jié)構(gòu)域，其中哺乳動物細胞還包含至少一種嵌合受體，所述至少一種嵌合受體包含特異性結(jié)合靶細胞上的靶抗原的細胞外靶向結(jié)構(gòu)域。在優(yōu)選的實施方案中，dap10結(jié)構(gòu)域包含人dap10氨基酸序列。

3、在實施方案中，嵌合受體包含細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和/或共刺激結(jié)構(gòu)域中的至少一個。

4、在實施方案中，嵌合受體與dap10締合，并且包含至少一個dap10相互作用結(jié)構(gòu)域。在實施方案中，dap10相互作用結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:75中所示的氨基酸序列，或與seq?idno:75具有至少80％、90％或95％序列同一性的氨基酸序列。

5、在實施方案中，靶細胞上的靶抗原選自由以下組成的組：cd20、tyrd、b7h6、cd3、cd19；cd123；cd22；cd30；cd70、cd171；cd6、cs-1(也稱為cd2子集1、claudin?18.2、cracc、slamf7、cd319和19a24)；c型凝集素樣分子-1(cll-1或clecl1)；cd33；表皮生長因子受體變體iii(egfrviii)；神經(jīng)節(jié)苷脂g2(gd2)；神經(jīng)節(jié)苷脂gd3(aneu5ac(2-8)aneu5ac(2-3)bdgalp(l-4)bdglcp(l-l)cer)；tnf受體家族成員b細胞成熟(bcma)；tn抗原((tn?ag)或(galnaca-ser/thr))；前列腺特異性膜抗原(psma)；受體酪氨酸激酶樣孤兒受體1(ror1)；fms樣酪氨酸激酶3(flt3)；腫瘤相關(guān)糖蛋白72(tag72)；cd38；cd44、cd44v6；cd44v7/8；癌胚抗原(cea)；上皮細胞粘附分子(epcam)；b7h3(cd276)；kit(cd?117)；白細胞介素-13受體亞基α-2(il-13ra2或cd213a2)；il-11rα；間皮素；白細胞介素11受體α(il-ura)；前列腺干細胞抗原(psca)；蛋白酶絲氨酸21(testisin或prss21)；血管內(nèi)皮生長因子受體2(vegfr2)；路易斯(y)抗原；cd24；血小板衍生生長因子受體β(pdgfr-β)；階段特異性胚胎抗原-4(ssea-4)；cd20；葉酸受體α；受體酪氨酸蛋白激酶erbb2(her2/neu)；erbb3、erbb4、粘蛋白1，細胞表面相關(guān)(muc1)；表皮生長因子受體(egfr)；神經(jīng)細胞粘附分子(ncam)；前列腺酶；前列腺酸性磷酸酶(pap)；延伸因子2突變型(elf2m)；肝配蛋白b2；成纖維細胞激活蛋白α(fap)；胰島素樣生長因子1受體(igf-i受體)；igf-ii受體；碳酸酐酶ix(caix)；蛋白酶體(prosome，macropain)亞基，β型，9(lmp2)；糖蛋白100(gploo)；由斷點簇區(qū)(bcr)和abelson鼠白血病病毒癌基因同源物1(abl)組成的癌基因融合蛋白(bcr-abl)；酪氨酸酶；腎上腺素a型受體2(epha2)；巖藻糖基gm1；唾液酸化路易斯粘附分子(sle)；神經(jīng)節(jié)苷脂gm3(aneu5ac(2-3)bdgalp(l-4)bdglcp(l-l)cer)；轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶5(tgs5)；高分子量黑色素瘤相關(guān)抗原(hmwmaa)；黑色素瘤相關(guān)抗原；鄰乙酰基-gd2神經(jīng)節(jié)苷脂(oacgd2)；葉酸受體β；腫瘤內(nèi)皮標志物1(tem1/cd248)；腫瘤內(nèi)皮標志物7相關(guān)(tem7r)；claudin?6(cldn6)；促甲狀腺激素受體(tshr)；g蛋白偶聯(lián)受體c類5組成員d(gprc5d)；x染色體開放閱讀框61(cxorf61)；cd97；cd?179a；間變性淋巴瘤激酶(alk)；聚唾液酸；胎盤特異性1(plac1)；globoh糖神經(jīng)酰胺的六糖部分(globoh)；乳腺分化抗原(ny-br-1)；尿路蛋白2(upk2)；甲型肝炎病毒細胞受體1(havcr1)；腎上腺素受體β3(adrb3)；pannexin?3(panx3)；g蛋白偶聯(lián)受體20(gpr20)；淋巴細胞抗原6復(fù)合物，基因座k9(ly6k)；嗅覺受體51e2(or51e2)；tcrγ交替閱讀框蛋白(tarp)；腎母細胞瘤蛋白(wt1)；癌癥/睪丸抗原1(ny-eso-1)；癌癥/睪丸抗原2(lage-la)；黑色素瘤相關(guān)抗原1(mage-a1)；mage-a4；mage-a9；ets易位變異基因6，位于染色體12p上(etv6-aml)；精子蛋白17(spa17)；x抗原家族，成員1a(xage1)；促血管生成素結(jié)合細胞表面受體2(tie?2)；黑色素瘤癌癥睪丸抗原-1(mad-ct-1)；黑色素瘤癌癥睪丸抗原-2(mad-ct-2)；fos相關(guān)抗原1；腫瘤蛋白p53(p53)；p53突變體；prostein；存活；端粒酶；前列腺癌腫瘤抗原-1(pcta-1或galectin?8)、t細胞識別的黑色素瘤抗原1(melana或marti)；大鼠肉瘤(ras)突變體；人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(htert)；肉瘤易位斷點；黑色素瘤細胞凋亡抑制劑(ml-iap)；erg(跨膜蛋白酶，絲氨酸2(tmprss2)ets融合基因)；n-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶v(na17)；配對盒蛋白pax-3(pax3)；雄激素受體；細胞周期蛋白b1；v-myc禽骨髓細胞瘤病毒癌基因神經(jīng)母細胞瘤衍生同源物(mycn)；ras同源家族成員c(rhoc)；酪氨酸酶相關(guān)蛋白2(trp-2)；細胞色素p450?1b1(cyp1b1)；ccctc結(jié)合因子(鋅指蛋白樣(boris或印記位點調(diào)節(jié)因子的兄弟)，t細胞識別的鱗狀細胞癌抗原3(sart3)；配對盒蛋白pax-5(pax5)；前頂體蛋白結(jié)合蛋白sp32(oy-tes1)；淋巴細胞特異性蛋白酪氨酸激酶(lck)；激酶錨定蛋白4(akap-4)；滑膜肉瘤，x斷點2(ssx2)；晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(rage-1)；腎遍在1(ru1)；腎遍在2(ru2)；legumain；人乳頭瘤病毒e6(hpv?e6)；人乳頭瘤病毒e7(hpv?e7)；腸羧酸酯酶；熱休克蛋白70-2突變型(mut?hsp70-2)；cd79a；cd79b；cd72；白細胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體1(lair1)；iga受體fc片段(fcar或cd89)；白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族a成員2(lilra2)；cd300分子樣家族成員f(cd300lf)；c型凝集素結(jié)構(gòu)域家族12成員a(clec12a)；骨髓基質(zhì)細胞抗原2(bst2)；含egf樣模塊粘蛋白樣激素受體樣2(emr2)；淋巴細胞抗原75(ly75)；glypican-3(gpc3)；fc受體樣5(fcrl5)；5t4、8h9、alcam、b7-1(cd80)、b7-2(cd86)、b7-h4、b7-h6、b-人絨毛膜促性腺激素、ca-9、ca-125、cd133、cd138、cd23、cd25、cd34、cd4、cd40、cd56、cd8、c-met、cspg4、cmv特異性抗原、細胞毒性t淋巴細胞相關(guān)抗原4(ctla-4)、dll3、雙唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂gd2、gd3、導(dǎo)管上皮粘蛋白、ebv特異性抗原、egp-2、egp-40、內(nèi)皮糖蛋白、上皮腫瘤抗原、胎兒乙酰膽堿受體、fbp，葉酸結(jié)合蛋白、葉酸受體α、膠質(zhì)瘤相關(guān)抗原、鞘糖脂、gp36、g250/caix、hbv特異性抗原、hcv特異性抗原、her1-her2、her2-her3組合、herv-k、hiv-1包膜糖蛋白gp41、hpv特異性抗原、kdr、κ鏈、胰島素生長因子(igfl)-l、屬于人mic家族的配體(mica和micb)和屬于人ulbp家族的配體(ulbp1-ulbp6)、laga-la、路易斯y、λ鏈、凝集素反應(yīng)性afp、l1細胞粘附分子、mage、主要組織相容性復(fù)合體(mhc)分子、呈遞腫瘤特異性肽表位的主要組織相容性復(fù)合體(mhc)分子、m-csf、mn-ca?ix、muc-1、muc-16、nkg2d、nkg2d配體、中性粒細胞彈性蛋白酶、nkp30、癌胚抗原(h5t4)p53、前列腺特異性抗原(psa)、psc1、前列腺特異性抗原蛋白、steap1、steap2、表面粘附分子、存活和端粒酶、tag-72、纖連蛋白的額外結(jié)構(gòu)域a(eda)和額外結(jié)構(gòu)域b(edb)以及肌腱蛋白-c的al結(jié)構(gòu)域(tnc?al)、甲狀腺球蛋白、tem8、腫瘤基質(zhì)抗原、vegf-a和免疫球蛋白λ樣多肽1(igll1)。

6、在實施方案中，cad多肽的至少一個共刺激結(jié)構(gòu)域和任選地嵌合受體的至少一個共刺激結(jié)構(gòu)域選自tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8、tlr9、tlr10、card11、cd2、cd3c、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cd54(icam)、cd70、cd80、cd83、cd86、cd134(ox40)、cd137(4-1bb)、cd278(icos)、fcr、lat、nkd2c、slp76、trim和zap70或其組合。在優(yōu)選的實施方案中，cad多肽的至少一個共刺激結(jié)構(gòu)域是4-1bb或cd28。

7、在實施方案中，cad多肽包含至少一個細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。在實施方案中，cad多肽的至少一個細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和任選地嵌合受體的至少一個細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域選自cd3ζ、dap12、lfa-1和重復(fù)(2-5)dap10?yinm基序。在優(yōu)選的實施方案中，cad多肽的至少一個細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域是cd3ζ。

8、在實施方案中，cad多肽的至少一個共刺激結(jié)構(gòu)域是4-1bb，并且cad多肽的至少一個細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域是cd3ζ。在優(yōu)選的實施方案中，cad多肽從n末端到c末端包含dap10結(jié)構(gòu)域、4-1bb共刺激結(jié)構(gòu)域、隨后的cd3ζ細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

9、在實施方案中，cad多肽的至少一個共刺激結(jié)構(gòu)域是cd28，并且cad多肽的至少一個細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域是cd3ζ。在優(yōu)選的實施方案中，cad多肽從n末端到c末端包含dap10結(jié)構(gòu)域、cd28共刺激結(jié)構(gòu)域、隨后的cd3ζ細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

10、在實施方案中，cad多肽包含4-1bb共刺激結(jié)構(gòu)域和cd28共刺激結(jié)構(gòu)域。在實施方案中，cad多肽從n末端到c末端包含dap10結(jié)構(gòu)域、4-1bb共刺激結(jié)構(gòu)域、隨后的cd28共刺激結(jié)構(gòu)域、繼而隨后的cd3ζ細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。在另一個實施方案中，cad多肽從n末端到c末端包含dap10結(jié)構(gòu)域、cd28共刺激結(jié)構(gòu)域、隨后的4-1bb共刺激結(jié)構(gòu)域、繼而隨后的cd3ζ細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

11、在實施方案中，人dap10氨基酸序列包含與seq?id?no:1具有至少90％、95％、97％或99％序列同一性的氨基酸序列。在實施方案中，人dap10氨基酸序列包含與seq?id?no:78具有至少90％、95％、97％或99％序列同一性的氨基酸序列。在實施方案中，人dap10氨基酸序列包含與seq?id?no:81具有至少90％、95％、97％或99％序列同一性的氨基酸序列。

12、在實施方案中，人dap10氨基酸序列包括突變的人dap10氨基酸序列。在一些實例中，突變的人dap10氨基酸序列包含對應(yīng)于k84和/或y86的位置處的氨基酸取代。在實施方案中，位置k84處的氨基酸取代包括k84r取代。在實施方案中，y86處的氨基酸取代包括y86f取代。

13、在實施方案中，cad多肽由可操作地連接到可調(diào)控啟動子的分離核酸編碼，并且嵌合受體由可操作地連接到可調(diào)控啟動子的分離核酸編碼。在一個實施方案中，可操作地連接到編碼cad多肽的核酸的可調(diào)控啟動子與可操作地連接到編碼嵌合受體的核酸的可調(diào)控啟動子不同。在一個實施方案中，可操作地連接到編碼cad多肽的核酸的可調(diào)控啟動子與可操作地連接到編碼嵌合受體的核酸的可調(diào)控啟動子相同。

14、在實施方案中，編碼cad多肽的分離的核酸包含seq?id?no:60、或seq?id?no:62、或seq?id?no:64、或seq?id?no:66、或seq?id?no:68、或seq?id?no:70或seq?id?no:72中所示的核酸序列。

15、在實施方案中，編碼cad多肽的分離的核酸在其n末端包含信號肽seq?id?no:45。在實施方案中，編碼cad多肽的分離的核酸在其n末端包含信號肽seq?id?no:93。

16、在實施方案中，編碼cad多肽的分離的核酸編碼細胞因子。在額外的或替代的實施方案中，編碼嵌合受體的分離的核酸編碼細胞因子。在編碼cad多肽的分離的核酸和編碼嵌合受體的分離的核酸均編碼細胞因子的實施方案中，細胞因子可以不同。在實施方案中，細胞因子選自由il-2、il-4、il-7、il-15、il-21和il-23組成的組。在實施方案中，分離的核酸還編碼標志蛋白。在實施方案中，分離的核酸還編碼標志蛋白。在實施方案中，標志蛋白選自由截短型cd19、cd20(利妥昔單抗(rituxumab)識別結(jié)構(gòu)域)、截短型egfr和lngfr組成的組。

17、在實施方案中，其中當嵌合受體包含細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域時，所述cad多肽包含共刺激結(jié)構(gòu)域，反之亦然。

18、在實施方案中，哺乳動物細胞還包含至少一種與dap10締合的受體，其中所述至少一種受體不是至少一種嵌合受體。在實施方案中，至少一種與dap10締合的受體是內(nèi)源性的。在實施方案中，至少一種與dap10締合的受體是外源性的或。在實施方案中，至少一種與dap10締合的受體是過表達的。在具體實施方案中，所述至少一種受體選自nkg2d、ly49h、ly49d、sirp-b1、siglec-15和cd300lb。在優(yōu)選的實施方案中，所述至少一種受體是nkg2d。

19、在實施方案中，哺乳動物細胞是免疫細胞，優(yōu)選地其中所述免疫細胞是細胞毒性細胞。

20、在實施方案中，包含如本文所公開的cad多肽和至少一種嵌合受體的哺乳動物細胞表現(xiàn)出針對靶細胞的體外和/或體內(nèi)殺傷活性，所述靶細胞表現(xiàn)出由至少一種嵌合受體識別的靶抗原的細胞表面表達。

21、在實施方案中，所述靶細胞是血液腫瘤細胞。

22、在實施方案中，所述靶細胞是實體瘤細胞。

23、在實施方案中，所述體外和/或體內(nèi)殺傷活性高于缺乏至少一種嵌合受體和/或cad多肽中的一個或兩個的表達的對照哺乳動物細胞中的體外和/或體內(nèi)殺傷活性的固有水平。

24、在實施方案中，哺乳動物細胞響應(yīng)于與靶細胞的接觸而增殖。在實施方案中，與缺乏嵌合受體和/或cad多肽中的一個或兩個的表達的對照哺乳動物細胞相比，哺乳動物細胞響應(yīng)于與靶細胞的接觸而表現(xiàn)出增加的增殖。在實施方案中，哺乳動物細胞在包含靶細胞的宿主生物體中增殖。

25、在實施方案中，哺乳動物細胞響應(yīng)于與靶細胞的接觸而表達促炎細胞因子。在實施方案中，促炎細胞因子包括腫瘤壞死因子α或干擾素γ。

26、在一個方面，本發(fā)明提供了包含如本文所公開的cad多肽和至少一種嵌合受體的多個哺乳動物細胞。在實施方案中，所述多個哺乳動物細胞包括至少約106個細胞、至少107個細胞或至少108個細胞，優(yōu)選地約108至1011個細胞。

27、在一個方面，本發(fā)明提供了一種制備如本文所公開的哺乳動物細胞的方法，其包括用包含編碼cad多肽的分離的核酸和編碼至少一種嵌合受體的至少一種分離的核酸構(gòu)建體的構(gòu)建體轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞。

28、在實施方案中，所述方法包括逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。

29、在實施方案中，所述方法包括哺乳動物細胞的離體擴增，其中離體擴增是在轉(zhuǎn)染編碼cad多肽的分離的核酸和至少一種編碼至少一種嵌合受體的構(gòu)建體之前和/或在轉(zhuǎn)染之后進行的。

30、在一個方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含藥學上可接受的賦形劑和包含如本文所公開的cad多肽和至少一種嵌合受體的哺乳動物細胞，優(yōu)選地多個哺乳動物細胞，更優(yōu)選地至少約106個細胞、至少107個細胞或至少108個細胞，仍更優(yōu)選地約108至1011個細胞。

31、在一個方面，本發(fā)明提供了一種激活包含如本文所公開的cad多肽和至少一種嵌合受體的哺乳動物細胞或多個所述哺乳動物細胞的方法，其包括使一個或多個靶細胞與哺乳動物細胞接觸。在實施方案中，將所述哺乳動物細胞引入有需要的受試者體內(nèi)，其中所述激活發(fā)生在受試者體內(nèi)。

32、在一個方面，本發(fā)明提供了包含如本文所公開的cad多肽和至少一種嵌合受體的哺乳動物細胞、或多個所述哺乳動物細胞、或包含所述哺乳動物細胞的藥物組合物在制備用于治療患有疾患的受試者的藥物中的用途，其中所述哺乳動物細胞減輕了受試者的所述疾患的至少一種癥狀或體征。

33、在一個方面，本發(fā)明提供了腫瘤細胞殺傷有效量的包含如本文所公開的cad多肽和至少一種嵌合受體的哺乳動物細胞或多個所述哺乳動物細胞或包含所述哺乳動物細胞的藥物組合物在制備用于治療有需要的受試者的癌癥的藥物中的用途。

34、在一個方面，本發(fā)明提供了一種殺傷腫瘤細胞的方法，所述方法包括使腫瘤細胞與腫瘤細胞殺傷有效量的包含如本文所公開的cad多肽和至少一種嵌合受體的哺乳動物細胞、或多個所述哺乳動物細胞、或包含所述哺乳動物細胞的藥物組合物接觸。在實施方案中，所述方法包括將治療有效量的哺乳動物細胞或藥物組合物引入到包含腫瘤細胞的宿主生物體中。在實施方案中，所述方法包括將治療有效量的哺乳動物細胞或藥物組合物引入到包含腫瘤細胞的宿主生物體中，并且同時或依序施用一種或多種升高共用鏈γ鏈細胞因子的方法。

35、在實施方案中，施用一種或多種升高共用γ鏈細胞因子的方法包括與引入哺乳動物細胞同時或依序施用有效增加引入的哺乳動物細胞的增殖、細胞毒性活性、持久性或其組合的量的共用γ鏈細胞因子，優(yōu)選地其中所述方法包括施用il-2，更優(yōu)選地其中所述方法包括施用il-15。

36、在實施方案中，所述一種或多種升高共用γ鏈細胞因子的方法包括在引入哺乳動物細胞之前和/或之后施用有效增加引入的哺乳動物細胞的增殖、細胞毒性活性、持久性或其組合的量的共用γ鏈細胞因子。

37、在實施方案中，所述一種或多種升高共用γ鏈細胞因子的方法包括在引入哺乳動物細胞之前的淋巴細胞耗竭(lymphodepletion)。

38、在實施方案中，所述一種或多種升高共用γ鏈細胞因子的方法包括從引入的哺乳動物細胞中分泌一種或多種共用γ鏈細胞因子。

39、在實施方案中，與對照生物體相比，所述方法減少宿主生物體中的體內(nèi)腫瘤負荷，和/或增加宿主生物體的平均存活時間，其中對照生物體沒有用哺乳動物細胞或藥物組合物治療。

40、其他特征、目的和優(yōu)點將從以下公開內(nèi)容顯而易見。

41、通過引用并入

42、本說明書所提及的所有公布、專利和專利申請以引用方式并入本文中，其程度如同每個個別公布、專利或?qū)＠暾埍痪唧w且個別地指出以引用方式并入那樣。