本發(fā)明屬于分子生物學(xué)，具體涉及一種生成毛囊的方法。

背景技術(shù)：

1、皮膚是一個多層器官，對于調(diào)節(jié)體溫和保留體液、抵御外部壓力以及調(diào)節(jié)觸覺和疼痛感至關(guān)重要。毛囊是皮膚的附屬器，作為一個具有多種功能的復(fù)雜微型器官，毛囊擁有非凡的再生能力。這種再生能力對于維持毛囊的穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。在脫發(fā)和皮膚疾?。ㄈ缧奂に匦悦摪l(fā)aga和斑禿aa）中，毛囊的再生能力會受到嚴重破壞。近年來，人毛囊再生技術(shù)逐漸成為治療脫發(fā)和皮膚疾病的一種重要手段，但在毛囊再生效率和功能性毛囊的形成等方面仍面臨諸多挑戰(zhàn)。

2、早期的毛囊再生研究主要集中于人成體毛囊干細胞。然而，單獨移植人成體毛囊干細胞的結(jié)果并不理想，難以有效誘導(dǎo)毛囊再生，毛囊的形成率低且功能不完整。這表明人成體毛囊干細胞單獨存在并不能完全復(fù)制體內(nèi)毛囊發(fā)育的復(fù)雜過程。為此，研究者們開始探索毛囊的其他部分在毛囊再生中的作用，如位于毛囊底部間充質(zhì)部分的真皮乳頭細胞。早期研究表明，真皮乳頭細胞在毛囊發(fā)育和再生過程中扮演著至關(guān)重要的角色。然而，將人成體毛囊干細胞與真皮乳頭細胞混合移植，毛囊的再生效率仍然不盡人意，這提示僅僅依靠成體真皮乳頭細胞提供的信號不足以完全激活人毛囊再生潛能。

3、進一步的研究發(fā)現(xiàn)，與胚胎間充質(zhì)細胞共移植能夠顯著提高人毛囊干細胞的毛囊再生效率，成功誘導(dǎo)形成結(jié)構(gòu)完整且功能健全的毛囊，并生長出正常的毛發(fā)。另外，通過逐步調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子β（tgfβ）和成纖維細胞生長因子（fgf）信號通路，可以在人胚胎干細胞球形聚集體中共誘導(dǎo)出顱上皮細胞和神經(jīng)嵴細胞，經(jīng)過長期培養(yǎng)后，可以誘導(dǎo)分化出囊狀皮膚類器官結(jié)構(gòu)，其由分層的表皮、富含脂肪的真皮和帶有皮脂腺的色素毛囊組成。然而，胚胎來源細胞的獲取涉及到倫理問題，這類方法的臨床應(yīng)用前景受限。

4、除成體毛囊干細胞外，相關(guān)技術(shù)還嘗試利用人多能干細胞、間充質(zhì)干細胞等細胞進行毛囊再生。研究人員通過模擬體內(nèi)毛囊發(fā)育過程，利用精確調(diào)控的生長因子、細胞因子和細胞外基質(zhì)組合，使誘導(dǎo)多能干細胞定向分化為毛囊干細胞和真皮乳頭細胞，并將體外分化獲得的毛囊干細胞和真皮乳頭細胞按照特定比例混合后移植到免疫缺陷小鼠的背部皮膚，但成功誘導(dǎo)新毛囊形成的概率很低，與新鮮分離毛囊干細胞和真皮乳頭細胞共移植的結(jié)果一致。

5、因此，有必要提供一種無倫理問題、再生效率高的生成毛囊的方法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供一種生成毛囊的方法，該方法不涉及倫理問題，毛囊的再生效率高。

2、本發(fā)明的第一個方面，提供一種生成毛囊的方法，該方法包括將毛囊干細胞與毛囊真皮干細胞混合培養(yǎng)。

3、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述毛囊真皮干細胞來源于毛囊的毛球部經(jīng)ⅰ型膠原酶消化、離心后的上清。

4、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述毛囊干細胞與所述毛囊真皮干細胞的數(shù)量之比為1：（0.1~10）。

5、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述毛囊干細胞與所述毛囊真皮干細胞分別獨立為自體細胞、同種異體細胞、異種細胞中的至少一種。

6、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述毛囊干細胞、所述毛囊真皮干細胞中的至少一種由干細胞分化形成。

7、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述毛囊干細胞、所述毛囊真皮干細胞中的至少一種在混合培養(yǎng)前經(jīng)過預(yù)處理，所述預(yù)處理包括生長因子預(yù)處理、小分子化合物預(yù)處理、基因編輯中的至少一種。

8、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述混合培養(yǎng)為2d培養(yǎng)或3d培養(yǎng)。

9、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述混合培養(yǎng)在遞送載體中進行。

10、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述混合培養(yǎng)的時間為10~60天。

11、本發(fā)明的第二方面，提供一種人工毛囊，該人工毛囊由前述的方法獲得毛囊。

12、本發(fā)明的第三方面，提供一種前述的人工毛囊在制備體外毛囊相關(guān)產(chǎn)品或篩選測試體外毛囊相關(guān)產(chǎn)品中的應(yīng)用。

13、本發(fā)明的第四方面，提供一種組合物，該組合物包括毛囊干細胞與毛囊真皮干細胞。

14、在本發(fā)明的一些實施方式中，組合物還包括遞送載體。

15、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述遞送載體包括天然高分子、合成高分子、溶劑中的至少一種。

16、本發(fā)明的第五方面，提供一種毛囊移植的方法，該方法包括將前述的人工毛囊或前述的組合物施用到待移植的部位的步驟。

17、本發(fā)明的第六方面，提供一種前述的人工毛囊，或前述的組合物在制備重建皮膚或毛囊、促進毛發(fā)生長、治療皮膚疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

18、本發(fā)明的有益效果是：

19、本發(fā)明通過聯(lián)合毛囊干細胞和毛囊真皮干細胞的培養(yǎng)，能夠有效提高毛囊的再生效率，同時生成的毛囊結(jié)構(gòu)更完整、功能更健全、再生毛發(fā)的質(zhì)量更高。其中，毛囊真皮干細胞為毛囊干細胞提供了必要的信號和微環(huán)境支持，促進了毛囊干細胞的增殖、分化和毛囊形態(tài)發(fā)生。另外也避免了采用胚胎來源細胞而引起的倫理問題，簡化了操作流程，降低了成本。

技術(shù)特征：

1.生成毛囊的方法，其特征在于，包括：將毛囊干細胞與毛囊真皮干細胞混合培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述毛囊干細胞與所述毛囊真皮干細胞的數(shù)量之比為1：（0.1~10）。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：

5.人工毛囊，其特征在于：由權(quán)利要求1~4任一項所述的方法獲得。

6.權(quán)利要求5所述的人工毛囊在制備體外毛囊相關(guān)產(chǎn)品或篩選測試體外毛囊相關(guān)產(chǎn)品中的應(yīng)用。

7.組合物，其特征在于：包括毛囊干細胞與毛囊真皮干細胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其特征在于：還包括遞送載體。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于：所述遞送載體包括天然高分子、合成高分子、溶劑中的至少一種。

10.毛囊移植的方法，其特征在于：包括將權(quán)利要求5所述的人工毛囊或權(quán)利要求7至9任一項所述的組合物施用到待移植的部位的步驟。

11.權(quán)利要求5所述的人工毛囊，或權(quán)利要求7至9任一項所述的組合物在制備重建皮膚或毛囊、促進毛發(fā)生長、治療皮膚疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生成毛囊的方法。該生成毛囊的方法，包括將毛囊干細胞與毛囊真皮干細胞混合培養(yǎng)。本發(fā)明通過聯(lián)合毛囊干細胞和毛囊真皮干細胞的培養(yǎng)，能夠有效提高毛囊的再生效率，同時生成的毛囊結(jié)構(gòu)更完整、功能更健全、再生毛發(fā)的質(zhì)量更高。其中，毛囊真皮干細胞為毛囊干細胞提供了必要的信號和微環(huán)境支持，促進了毛囊干細胞的增殖、分化和毛囊形態(tài)發(fā)生。另外也避免了采用胚胎來源細胞而引起的倫理問題，簡化了操作流程，降低了成本。

技術(shù)研發(fā)人員：許言文,郭鵬程,魏小雨,張菊芳,李瑞康,杜家馨,周圳滔,禹業(yè)亞,張青青,劉龍奇
受保護的技術(shù)使用者：杭州市第一人民醫(yī)院（西湖大學(xué)附屬杭州市第一人民醫(yī)院）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/28