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基因修飾的細胞的制作方法

文檔序號:41741931發(fā)布日期:2025-04-25 17:21閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.修飾的動物細胞,其在與基因組監(jiān)測、細胞周期控制和/或細胞死亡控制相關的一個或多個基因中具有基因修飾,并且其中所述動物是適合人類或動物食用的任選地用于農業(yè)中的動物物種。

2.根據(jù)權利要求1的修飾的動物細胞,其中所述修飾使所述細胞永生化。

3.根據(jù)權利要求1或權利要求2的修飾的動物細胞,其中所述動物選自豬、牛、家禽、綿羊、山羊、魚、甲殼動物或軟體動物。

4.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述修飾的細胞是體細胞。

5.根據(jù)權利要求4所述的修飾的動物細胞,其中所述修飾的細胞選自以下細胞類型中的一種:成肌細胞、成纖維細胞、肌成纖維細胞、脂肪來源的干細胞、上皮細胞、間充質干細胞、衛(wèi)星細胞或肝細胞。

6.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述細胞不表達外源性核酸以操縱所述基因組監(jiān)測、細胞周期控制和/或細胞死亡控制通路。

7.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述動物細胞在以下基因中的一個或多個中具有基因修飾:rb1、tp53和/或ras基因。

8.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述動物細胞在rb1中具有基因修飾。

9.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述動物細胞在tp53中具有基因修飾。

10.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述動物細胞在ras基因中具有基因修飾。

11.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述動物細胞在rb1中和在tp53中具有基因修飾。

12.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述動物細胞在rb1中和在ras基因中具有基因修飾。

13.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述動物細胞在tp53中和在ras基因中具有基因修飾。

14.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述動物細胞在rb1、tp53中和在ras基因中具有基因修飾。

15.根據(jù)權利要求7、10、12、13或14中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述ras基因是hras、nras或kras。

16.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述修飾在所述一個或多個基因的啟動子區(qū)或編碼區(qū)中。

17.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中使用靶向基因組修飾引入所述修飾。

18.根據(jù)權利要求17所述的修飾的動物細胞,其使用內切核酸酶。

19.根據(jù)權利要求18所述的修飾的動物細胞,其中所述內切核酸酶選自talen、zfn或crispr/cas9。

20.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述基因選自rb1和/或tp53中的一個或兩者,并且所述修飾是功能喪失修飾。

21.根據(jù)權利要求20所述的修飾的動物細胞,其中所述功能喪失修飾包括基因的敲除。

22.根據(jù)權利要求1至21中任一項所述的修飾的動物細胞,其中所述基因是ras基因,所述修飾是超活化修飾,任選地,其中所述ras基因是hras、nras或kras。

23.根據(jù)權利要求22所述的修飾的動物細胞,其中所述超活化修飾包含一個或多個氨基酸置換。

24.根據(jù)權利要求22所述的修飾的動物細胞,其中所述一或多個氨基酸置換包含置換在seq?id?no:46、47或48的位置12或13處的甘氨酸或者位置61處的谷氨酰胺。

25.根據(jù)權利要求22所述的修飾的動物細胞,其中所述一個或多個氨基酸置換包括置換在seq?id?no:46、47或48的位置12或13處的甘氨酸,其中所述一個或多個氨基酸選自包含丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、精氨酸、絲氨酸和纈氨酸的列表。

26.根據(jù)權利要求22所述的修飾的動物細胞,其中所述一個或多個氨基酸置換包括用纈氨酸置換seq?id?no:46、47或48的位置12或13處的甘氨酸。

27.根據(jù)權利要求22所述的修飾的動物細胞,其中所述一個或多個氨基酸置換包括置換在seq?id?no:46、47或48的位置61處的甘氨酸,其中所述一個或多個氨基酸選自包含谷氨酸、組氨酸、賴氨酸、脯氨酸和精氨酸的列表。

28.制備培育肉或培養(yǎng)肉產品的方法,其包括培養(yǎng)根據(jù)權利要求1至27中任一項所述的修飾的動物細胞。

29.根據(jù)權利要求28所述的方法,其中所述方法包括所述修飾的細胞的連續(xù)或分批培養(yǎng)。

30.根據(jù)權利要求28或29所述的方法,其包括使所述細胞形成組織樣結構的步驟。

31.根據(jù)權利要求28至30中任一項所述的方法,其中所述細胞形成肌肉組織樣結構。

32.制備根據(jù)權利要求1至27中任一項所述的修飾的動物細胞的方法,其中所述方法包括在與基因組監(jiān)測、細胞周期控制和/或細胞死亡控制相關的一個或多個基因中引入基因修飾,并且其中所述動物是適合人類或動物食用的任選地用于農業(yè)中的動物。

33.永生化動物細胞的方法,其中所述方法包括在與基因組監(jiān)測、細胞周期控制和/或細胞死亡控制相關的一個或多個基因中引入基因修飾,并且其中所述動物是適合人類或動物食用的任選地用于農業(yè)中的動物。

34.根據(jù)權利要求32或33所述的方法,其中所述基因修飾改變與基因組監(jiān)測、細胞周期控制和/或細胞死亡控制相關的一個或多個基因的表達或功能。

35.根據(jù)權利要求32至34中任一項所述的方法,其中所述動物細胞是永生化的。

36.根據(jù)權利要求32至35中任一項所述的方法,其中所述動物選自豬、牛、家禽、綿羊、山羊、魚、甲殼動物或軟體動物。

37.根據(jù)權利要求32至36中任一項所述的方法,其中所述修飾的細胞是體細胞。

38.根據(jù)權利要求37所述的修飾的動物細胞,其中所述修飾的細胞選自以下細胞類型中的一種:成肌細胞、成纖維細胞、肌成纖維細胞、脂肪來源的干細胞、上皮細胞、間充質干細胞、衛(wèi)星細胞或肝細胞。

39.根據(jù)權利要求32至38所述的方法,其中所述細胞不表達外源性核酸以操縱基因組監(jiān)測、細胞周期控制和/或細胞死亡控制。

40.根據(jù)權利要求32至39中任一項所述的方法,其中所述動物細胞在以下基因中的一個或多個中具有基因修飾:rb1、tp53和/或ras基因。

41.根據(jù)權利要求32至40中任一項所述的方法,其中所述動物細胞在rb1中具有基因修飾。

42.根據(jù)權利要求32至41中任一項所述的方法,其中所述動物細胞在tp53中具有基因修飾。

43.根據(jù)權利要求32至42中任一項所述的方法,其中所述動物細胞在ras基因中具有基因修飾。

44.根據(jù)權利要求32至43中任一項所述的方法,其中所述動物細胞在rb1中和在tp53中具有基因修飾。

45.根據(jù)權利要求32至44中任一項所述的方法,其中所述動物細胞在rb1中和在ras基因中具有基因修飾。

46.根據(jù)權利要求32至45中任一項所述的方法,其中所述動物細胞在tp53中和在ras基因中具有基因修飾。

47.根據(jù)權利要求32至46中任一項所述的方法,其中所述動物細胞在rb1、tp53中和在ras基因中具有基因修飾。

48.根據(jù)權利要求40、43、45、46或47中任一項所述的方法,其中所述ras基因是hras、nras或kras。

49.根據(jù)權利要求32至48中任一項所述的方法,其中對所述一個或多個基因的啟動子區(qū)或編碼區(qū)進行所述修飾。

50.根據(jù)權利要求32至49所述的方法,其中使用靶向基因組修飾引入所述修飾。

51.根據(jù)權利要求50所述的方法,其使用內切核酸酶。

52.根據(jù)權利要求51所述的方法,其中所述內切核酸酶選自talen、zfn或crispr/cas9。

53.根據(jù)權利要求32至52所述的方法,其中所述基因選自rb1和/或tp53中的一個或兩者,并且所述修飾是功能喪失修飾。

54.根據(jù)權利要求53所述的方法,其中所述功能喪失修飾包括基因的敲除。

55.根據(jù)權利要求32至54中任一項所述的方法,其中所述基因是ras基因,并且所述修飾是超活化修飾,任選地,其中所述ras基因是hras、nras或kras。

56.根據(jù)權利要求55所述的方法,其中所述超活化修飾包括一個或多個氨基酸置換。

57.根據(jù)權利要求55所述的方法,其中所述一個或多個氨基酸置換包括置換在seq?idno:46、47或48的位置12或13處的甘氨酸或者位置61處的谷氨酰胺。

58.根據(jù)權利要求55所述的方法,其中所述一個或多個氨基酸置換包括置換在seq?idno:46、47或48的位置12或13處的甘氨酸,其中所述一個或多個氨基酸選自包含丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、精氨酸、絲氨酸和纈氨酸的列表。

59.根據(jù)權利要求55所述的方法,其中所述一個或多個氨基酸置換包括用纈氨酸置換在seq?id?no:46、47或48的位置12或13處的甘氨酸。

60.根據(jù)權利要求55所述的方法,其中所述一個或多個氨基酸置換包括置換在seq?idno:46、47或48的位置61處的甘氨酸,其中所述一個或多個氨基酸選自包含谷氨酸、組氨酸、賴氨酸、脯氨酸和精氨酸的列表。

61.培育或培養(yǎng)的動物組織或者培育或培養(yǎng)肉產品,其包含根據(jù)權利要求1至27中任一項所述的修飾的細胞。

62.根據(jù)權利要求61所述的培養(yǎng)的動物組織,其中所述培養(yǎng)是懸浮培養(yǎng)。

63.根據(jù)權利要求1至27中任一項所述的修飾的動物細胞用于細胞農業(yè)的用途。

64.制備永生化動物細胞系的方法,所述方法包括根據(jù)權利要求16至27中任一項所述的方法。

65.指導rna,其用于根據(jù)權利要求32至60或權利要求64中任一項所述的制備修飾的、永生化細胞或永生化動物細胞系的方法中。

66.指導rna,其包含選自seq?id?no.15、16、17、18的任一序列。

67.根據(jù)權利要求66所述的指導rna,其用于根據(jù)權利要求32至60中任一項所述的制備修飾的或永生化細胞的方法中。

68.根據(jù)權利要求67所述的指導rna,其中所述修飾的細胞是根據(jù)權利要求1至31中任一項的修飾的細胞。

69.部件的試劑盒,其包含根據(jù)權利要求65至68中任一項所述的指導rna。


技術總結
本發(fā)明涉及修飾的動物細胞和制備修飾的動物細胞的方法,所述修飾的動物細胞在與基因組監(jiān)測、細胞周期控制和/或細胞死亡控制相關的一個或多個基因中具有基因修飾。所述動物細胞選自適合人類或動物食用的動物物種。所述動物細胞通常在RB1、TP53或RAS基因中具有基因修飾。

技術研發(fā)人員:弗洛里安·哈恩,羅恩·里明頓,詹姆斯·謝爾福德,凱特琳·多蘭,露西·威爾金森,阿拉斯代爾·拉塞爾,邁克爾·吉爾,艾米·史密斯
受保護的技術使用者:艾維農場科技有限公司
技術研發(fā)日:
技術公布日:2025/4/24
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