本發(fā)明屬于基因工程，具體涉及一種耐輻射腺病毒載體及構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

1、耐輻射球菌(deinococcusradiodurans，dr)首次于1956年被anderson等從4千戈瑞(kgy)的x-射線滅菌處理后依然發(fā)生變質(zhì)的牛肉罐頭食品中分離而出，是迄今為止地球上存在的輻射抗性最強(qiáng)的生物之一，可以承受一系列環(huán)境壓力；其不僅能夠抗氧化劑，包括過(guò)氧化氫酶、過(guò)氧化物酶、超氧化物歧化酶、類胡蘿卜素和錳離子抗氧化復(fù)合物，以應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激；其還具有超強(qiáng)的dna修復(fù)能力，對(duì)電離輻射、紫外線、干燥和過(guò)氧化氫等一些dna損傷劑都具有極強(qiáng)抗性，其甚至能夠承受超過(guò)15千戈瑞(kgy)γ射線，并在短時(shí)間內(nèi)采用同源重組來(lái)完成dna修復(fù)，因此，dr菌的超強(qiáng)輻射抗性是保護(hù)、耐受和修復(fù)三方面協(xié)同作用的結(jié)果。耐輻射球菌雖然在抗輻射研究、抗旱品種培育等方面的巨大潛力，但是，目前對(duì)于耐輻射球菌的開(kāi)發(fā)卻極其有限，因此，了解耐輻射基因?qū)?dòng)物輻射損傷的作用，構(gòu)建耐輻射腺病毒載體，對(duì)于腺病毒載體在基因治療中實(shí)現(xiàn)抗輻射損傷具有重要意義。

2、因此，將腺病毒載體的優(yōu)點(diǎn)與耐輻射球菌中ppri基因的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái)用于抗輻射損傷的應(yīng)用研究具有廣泛的前景。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供了一種耐輻射腺病毒載體及構(gòu)建方法，其成功的構(gòu)建出了能夠表達(dá)抗輻射蛋白的耐輻射腺病毒載體，實(shí)現(xiàn)了抗輻射蛋白的表達(dá)。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下：

3、一種耐輻射腺病毒載體的構(gòu)建方法，將耐輻射基因定向克隆到質(zhì)粒載體中，再與腺病毒骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中，然后同源重組，獲得重組腺病毒，即耐輻射腺病毒載體。

4、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述耐輻射基因采用ppri基因。

5、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，編碼ppri基因的蛋白與dna損傷反應(yīng)有關(guān)，且ppri是介導(dǎo)ddr基因轉(zhuǎn)錄的開(kāi)關(guān)。

6、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述ppri基因來(lái)源于耐輻射球菌，其序列見(jiàn)genbank(ncbi:dr-0167)中發(fā)表的ppri基因的序列。

7、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述ppri基因的合成引物，包括：

8、ppri-f，核苷酸序列如sen.id：1所示；

9、ppri-r，核苷酸序列如sen.id：2所示。

10、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述質(zhì)粒載體采用穿梭質(zhì)粒padv-mcmv-mcs-3xflag。

11、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述宿主細(xì)胞采用hek293細(xì)胞。

12、采用所述構(gòu)建方法制備的耐輻射腺病毒載體，含有耐輻射基因。

13、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述耐輻射腺病毒載體能夠表達(dá)耐輻射蛋白。

14、作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，所述耐輻射蛋白具有免疫原性。

15、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

16、本發(fā)明采用同源重組技術(shù)，將攜帶耐輻射球菌耐輻射基因的質(zhì)粒與腺病毒骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到hek293細(xì)胞，獲得耐輻射腺病毒載體，其能夠解決輻射損傷問(wèn)題，為抗輻射損傷的深入研究提供新的思路。

17、本發(fā)明采用ppri基因構(gòu)建的成功表達(dá)耐輻射腺病毒載體能夠成功表達(dá)ppri蛋白，該蛋白具備免疫原性。

技術(shù)特征：

1.一種耐輻射腺病毒載體的構(gòu)建方法，其特征在在于，將耐輻射基因定向克隆到質(zhì)粒載體中，再與腺病毒骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中，然后同源重組，獲得重組腺病毒，即耐輻射腺病毒載體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種耐輻射腺病毒載體的構(gòu)建方法，其特征在在于，

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種耐輻射腺病毒載體的構(gòu)建方法，其特征在在于，

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種耐輻射腺病毒載體的構(gòu)建方法，其特征在在于，

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種耐輻射腺病毒載體的構(gòu)建方法，其特征在在于，

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種耐輻射腺病毒載體的構(gòu)建方法，其特征在在于，

7.采用權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述構(gòu)建方法制備的耐輻射腺病毒載體，其特征在于，含有耐輻射基因。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的耐輻射腺病毒載體，其特征在于，所述耐輻射腺病毒載體能夠表達(dá)耐輻射蛋白。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的耐輻射腺病毒載體，其特征在于，所述耐輻射蛋白具有免疫原性。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種耐輻射腺病毒載體及構(gòu)建方法，其構(gòu)建方法，包括：將耐輻射基因定向克隆到質(zhì)粒載體中，再與腺病毒骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中，然后同源重組，獲得重組腺病毒，即耐輻射腺病毒載體，本發(fā)明成功構(gòu)建出耐輻射腺病毒載體，為抗輻射損傷的深入研究提供新的思路。

技術(shù)研發(fā)人員：王志鵬,李建華,尹晶晶,李梅,劉夢(mèng)雅,趙斌,劉歡,秦秀軍,李建國(guó)
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國(guó)輻射防護(hù)研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/28