本發明涉及生物醫藥，尤其涉及一種念珠菌藥物耐受的篩查方法。

背景技術：

1、念珠菌血癥是一種嚴重的侵襲性真菌感染，特別是由熱帶念珠菌引起的念珠菌血癥，因其高耐藥性而使得臨床治療變得更加困難。近年來，中國分離的熱帶念珠菌對氟康唑的耐藥性顯著上升，從5.7％升高至31.8％，特別是在某些醫院的造血干細胞移植患者中，分離的熱帶念珠菌對唑類藥物的耐藥性甚至超過了80％。因此，棘白菌素類藥物已經成為治療念珠菌血癥的首選一線藥物。然而盡管臨床微生物實驗室提供的體外藥敏實驗報告顯示熱帶念珠菌對棘白菌素類藥物敏感，但在臨床應用中，如卡泊芬凈這類常用的棘白菌素類藥物，對一部分患者的治療效果并不理想，預后不佳。

2、在臨床微生物實驗室中，針對念珠菌感染患者分離的念珠菌進行的藥敏實驗普遍采用微量肉湯稀釋法。該方法基于測定念珠菌對不同抗真菌藥物的最低抑菌濃度(mic值)，以判斷念珠菌對這些藥物是“敏感”還是“耐藥”。據此，臨床醫生會依據實驗室提供的藥敏試驗報告來決定給病人的用藥方案。然而，越來越多的臨床案例顯示，即使藥敏試驗報告顯示念珠菌對卡泊芬凈(一種常用的棘白菌素類藥物)“敏感”，部分念珠菌血癥患者使用卡泊芬凈治療后的實際效果并不理想，表現為持續的念珠菌血癥和高死亡率。這種情況揭示了現有藥敏實驗方法的局限性，即實驗室報告為敏感的菌株可能實際上對棘白菌素類藥物存在耐受現象，這可能導致在單藥治療時出現治療失敗的情況。

技術實現思路

1、(一)解決的技術問題

2、鑒于此，本發明的主要目的之一在于提供一種念珠菌藥物耐受的篩查方法，所述篩查方法包括觀察念珠菌菌株接觸藥物后的形態特征。通過使用卡泊芬凈處理臨床分離的念珠菌，在顯微鏡下觀察菌株的形態變化，即可快速有效地篩查出耐受棘白菌素類藥物的念珠菌。

3、(二)技術方案

4、為了實現上述目的，本發明提供了一種念珠菌藥物耐受的篩查方法，所述篩查方法包括觀察念珠菌菌株接觸藥物后的形態特征。

5、在一個實施例中，所述篩查方法僅涉及非診斷目的的篩查。

6、在一個實施例中，所述形態特征包括細胞形態、大小、菌落形態中的一種或其組合。

7、在一個實施例中，所述形態特征是細胞形態。

8、在一個實施例中，所述細胞形態為多細胞聚集形態。

9、在一個實施例中，所述篩查方法還包括在觀察念珠菌菌株接觸藥物前進行藥物敏感性試驗。

10、在一個實施例中，所述藥物敏感性實驗包括微量肉湯稀釋法。

11、在一個實施例中，所述藥物敏感性實驗結果顯示敏感。

12、在一個實施例中，所述藥物敏感性實驗結果顯示耐藥。

13、在一個實施例中，所述念珠菌是新鮮分離的。

14、在一個實施例中，所述念珠菌是冰凍復蘇的。

15、在一個實施例中，所述念珠菌包括白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、葡萄牙念珠菌、乳酒念珠菌、皺褶念珠菌、都柏林念珠菌、星形念珠菌、假熱帶念珠菌、耳念珠菌中的一種或其組合。

16、在一個實施例中，所述念珠菌包括熱帶念珠菌和耳念珠菌。

17、在一個實施例中，所述藥物是抗真菌藥物。

18、在一個實施例中，所述抗真菌藥物包括多烯類、唑類、棘白菌素類、丙烯胺類、嘧啶類中的一種或其組合。

19、在一個實施例中，所述抗真菌藥物是棘白菌素類。

20、在一個實施例中，所述棘白菌素類包括卡泊芬凈和米卡芬凈。

21、在一個實施例中，所述棘白菌素類是卡泊芬凈。

22、在一個實施例中，所述念珠菌源自全血、血漿、血清、紅細胞級分、唾液、腦脊液、精液、糞便、尿液、鼻拭子、傷口拭子、皮膚拭子、直腸拭子、膽汁、淋巴痰、灌洗液中的一種或其組合。

23、在一個實施例中，所述念珠菌源自選自全血、血漿、血清中的一種或其組合。

24、(三)有益效果

25、本發明提供了一種念珠菌藥物耐受的篩查方法，所述篩查方法包括觀察念珠菌菌株接觸藥物后的形態特征。與現有技術相比，具備以下有益效果：

26、1、通過使用卡泊芬凈處理臨床分離的念珠菌，在顯微鏡下觀察菌株的形態變化，即可快速有效地篩查出耐受棘白菌素類藥物的念珠菌。

27、2、通過對經殺菌試驗確認為耐受卡泊芬凈的念珠菌株以及隨機挑選的經驗證為非耐受的念珠菌株進行了篩查方法有效性驗證，正確率為100％。

28、(四)術語和定義

29、如本文所用，術語“藥物耐受”是指真菌對藥物的敏感性下降，導致藥物對真菌的抑制或殺菌作用減弱的現象，并且該現象無法被臨床微生物實驗室開展的常規藥物敏感性試驗發現。例如，原本能夠被低濃度藥物有效抑制生長的真菌，在產生耐受后，需要更高濃度的藥物才能產生相同的抑制效果，甚至在很高濃度下依然能夠存活和繁殖，并且抗真菌藥物mic值無差異。

30、如本文所用，“多細胞聚集形態”是指在念珠菌增殖過程中，芽生孢子因細胞分裂缺陷導致子細胞無法從母細胞上脫離，不斷生成的子細胞在物理空間上相互靠近，聚集在一起，顯微鏡下觀察像葡萄串一樣的多細胞聚集形態。這些細胞可以是同一種形態大小，也可以是不同形態大小的細胞組合。這種聚集不是簡單的細胞堆積，而是通過細胞分裂增殖過程中子細胞不斷產生，進而聚集來實現的，并且通常會呈現出一定的結構和功能特征。

31、如本文所用，“熱帶念珠菌多個克隆”是指兩個或兩個以上從不同祖先細胞(熱帶念珠菌細胞)通過無性增殖產生的細胞群體。每個克隆內部的熱帶念珠菌細胞在遺傳上相對一致，但不同克隆之間在基因組成、表型(如形態、生長速度、耐藥性等)等方面可能存在差異。

技術特征：

1.一種念珠菌藥物耐受的篩查方法，其特征在于，所述篩查方法包括觀察念珠菌菌株接觸藥物后的形態特征。

2.根據權利要求1所述的篩查方法，其特征在于，所述形態特征包括細胞形態、大小、菌落形態中的一種或其組合。

3.根據權利要求2所述的篩查方法，其特征在于，所述形態特征是細胞形態。

4.根據權利要求3所述的篩查方法，其特征在于，所述細胞形態為多細胞聚集形態。

5.根據權利要求1-4任意一項所述的篩查方法，其特征在于，所述念珠菌包括白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、季也蒙念珠菌、葡萄牙念珠菌、乳酒念珠菌、皺褶念珠菌、都柏林念珠菌、星形念珠菌、假熱帶念珠菌、耳念珠菌中的一種或其組合。

6.根據權利要求5所述的篩查方法，其特征在于，所述念珠菌包括熱帶念珠菌和耳念珠菌。

7.根據權利要求1所述的篩查方法，其特征在于，所述藥物是抗真菌藥物。

8.根據權利要求7所述的篩查方法，其特征在于，所述抗真菌藥物是棘白菌素類。

9.根據權利要求8所述的篩查方法，其特征在于，所述棘白菌素類包括卡泊芬凈和米卡芬凈。

10.根據權利要求9所述的篩查方法，其特征在于，所述棘白菌素類是卡泊芬凈。

技術總結
本發明具體公開了一種念珠菌藥物耐受的篩查方法，涉及生物醫藥技術領域。本發明提供了一種念珠菌藥物耐受的篩查方法，所述篩查方法包括觀察念珠菌菌株接觸藥物后的形態特征，通過使用卡泊芬凈處理臨床分離的念珠菌，在顯微鏡下觀察菌株的形態變化，即可快速有效地篩查出耐受棘白菌素類藥物的念珠菌。為開發新的治療策略提供了理論依據和實驗基礎，具有很好的臨床轉化和臨床應用前景。

技術研發人員：吳永琴,戴媛媛
受保護的技術使用者：安徽省立醫院（中國科學技術大學附屬第一醫院）
技術研發日：
技術公布日：2025/4/24