1.靶向家蠶bmser1基因的grna,其特征在于,所述grna的靶序列如seq?id?no:1所示。
2.由權(quán)利要求1所述grna構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體,其特征在于,所述轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體的制備方法如下:在所述grna兩邊加入粘性末端,使用bbsi酶切g(shù)rna骨架載體后,與退火引物進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化,獲得piggybac[3xp3-egfp-sv40;u6-grna-sv40]轉(zhuǎn)基因載體;所述退火引物包括核苷酸序列如seq?id?no:4所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no:5所示的反向引物。
4.用于敲除家蠶bmser1基因的crispr/cas9基因編輯系統(tǒng),其特征在于,所述crispr/cas9基因編輯系統(tǒng)包括權(quán)利要求2-3任一項所述的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體和cas9表達(dá)載體。
5.bmser1基因敲除的雜合突變家蠶品系的制備方法,其特征在于,利用權(quán)利要求4所述的crispr/cas9基因編輯系統(tǒng)敲除家蠶中bmser1基因,篩選雙元轉(zhuǎn)基因個體,獲得雜合突變家蠶品系。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,步驟(3)中,分型檢測所用引物包括:核苷酸序列如seq?id?no:2所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no:3所示的反向引物。
8.粗纖維蠶絲的制備方法,其特征在于,采用權(quán)利要求5~7任一項所述的方法制備bmser1基因敲除的雜合突變家蠶品系,通過飼養(yǎng)轉(zhuǎn)基因蠶獲得粗蠶絲。
9.權(quán)利要求1所述的grna、權(quán)利要求2~3任一項所述的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體和/或權(quán)利要求4所述的基因編輯系統(tǒng)在培育粗蠶絲轉(zhuǎn)基因家蠶品系和/或制備粗蠶絲中的應(yīng)用。
10.敲除家蠶bmser1基因在培育粗蠶絲轉(zhuǎn)基因家蠶品系和/或制備粗蠶絲中的應(yīng)用。