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靶向家蠶絲膠1基因的gRNA、粗蠶絲制備方法與應(yīng)用與流程

文檔序號:41747322發(fā)布日期:2025-04-25 17:34閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.靶向家蠶bmser1基因的grna,其特征在于,所述grna的靶序列如seq?id?no:1所示。

2.由權(quán)利要求1所述grna構(gòu)建的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體,其特征在于,所述轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體的制備方法如下:在所述grna兩邊加入粘性末端,使用bbsi酶切g(shù)rna骨架載體后,與退火引物進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化,獲得piggybac[3xp3-egfp-sv40;u6-grna-sv40]轉(zhuǎn)基因載體;所述退火引物包括核苷酸序列如seq?id?no:4所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no:5所示的反向引物。

4.用于敲除家蠶bmser1基因的crispr/cas9基因編輯系統(tǒng),其特征在于,所述crispr/cas9基因編輯系統(tǒng)包括權(quán)利要求2-3任一項所述的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體和cas9表達(dá)載體。

5.bmser1基因敲除的雜合突變家蠶品系的制備方法,其特征在于,利用權(quán)利要求4所述的crispr/cas9基因編輯系統(tǒng)敲除家蠶中bmser1基因,篩選雙元轉(zhuǎn)基因個體,獲得雜合突變家蠶品系。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,步驟(3)中,分型檢測所用引物包括:核苷酸序列如seq?id?no:2所示的正向引物和核苷酸序列如seq?id?no:3所示的反向引物。

8.粗纖維蠶絲的制備方法,其特征在于,采用權(quán)利要求5~7任一項所述的方法制備bmser1基因敲除的雜合突變家蠶品系,通過飼養(yǎng)轉(zhuǎn)基因蠶獲得粗蠶絲。

9.權(quán)利要求1所述的grna、權(quán)利要求2~3任一項所述的轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體和/或權(quán)利要求4所述的基因編輯系統(tǒng)在培育粗蠶絲轉(zhuǎn)基因家蠶品系和/或制備粗蠶絲中的應(yīng)用。

10.敲除家蠶bmser1基因在培育粗蠶絲轉(zhuǎn)基因家蠶品系和/或制備粗蠶絲中的應(yīng)用。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種靶向家蠶絲膠1基因的gRNA、粗蠶絲制備方法與應(yīng)用。該gRNA的靶序列如SEQ?ID?NO:1所示。粗蠶絲制備方法包括:1)構(gòu)建靶向家蠶BmSer1基因的gRNA表達(dá)載體,并制備gRNA轉(zhuǎn)基因家蠶;2)將gRNA轉(zhuǎn)基因家蠶和Cas9轉(zhuǎn)基因家蠶進(jìn)行雜交,篩選得到眼部和身體同時發(fā)綠色熒光的雙元轉(zhuǎn)基因個體;3)通過分型檢測篩選得到BmSer1基因敲除的雜合突變家蠶品系;4)通過飼養(yǎng)轉(zhuǎn)基因蠶獲得粗蠶絲。本發(fā)明使用基因編輯技術(shù)改變家蠶遺傳學(xué)性狀,所得蠶絲直徑更粗,絲膠率更低,具有更好的防水性和耐用性。

技術(shù)研發(fā)人員:胡文波,馮娟,劉佳慧,夏慶友
受保護(hù)的技術(shù)使用者:西部(重慶)科學(xué)城種質(zhì)創(chuàng)制大科學(xué)中心
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/4/24
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