專利名稱：：甘蔗花葉病抗病性鑒定的接種方法
技術領域：
：本發明涉及農業
技術領域：
，尤其是一種甘蔗花葉病抗病性鑒定的接種方法。
背景技術：
：甘蔗花葉病是一種世界性的甘蔗病害，近年來，在我國福建、廣東、廣西、四川和浙江等蔗區普遍發生，目前已成為云南蔗區發生最為普遍，危害最為嚴重的主要病害，全省年發病面積達100余萬畝，其中嚴重發病面積達50余萬畝，且有逐年擴展蔓延加重危害之趨勢。感病品種，嚴重田塊發病率高達100%。甘蔗感病后一般造成10-40%的產量損失，糖份下降。其病原復雜，可由馬鈴薯Y病毒科(戶o/yv/n'^^)的6種病毒單獨或復合浸染引起。主要靠頓蟲、帶病蔗種和蔗刀等收砍工具傳播。國內外大量的研究表明對甘蔗花葉病最經濟有效的控制方法，就是選用抗病優良品種。因此篩選抗源材料，供育種工作者合理選配親本組合，進而選育出具有較穩定抗病性的新品種，供生產上推廣應用就顯得迫切需要。優良抗源的篩選工作必須以數量多、范圍廣的甘蔗種質資源抗性評價為基礎，因而急需研究建立一套快速簡便、致病性穩定、規范、實用的抗性鑒定技術。目前甘蔗種質資源對花葉病的抗性鑒定方法主要有大田病圃鑒定、田間自然感病鑒定和人工接種鑒定，它們各具有不同的缺陷，大田病圃鑒定和田間自然鑒定周期長、占用土地面積大、鑒定材料數量有限；而且由于病圃和田間中的自然病原及種類分布不均勻、氣候和傳播媒介等環境條件變化常常會影響鑒定結果的真實性、穩定性和準確性；人工接種鑒定快速簡便、鑒定材料數量不受限制，且環境條件可人為控制，可以滿足大規模篩選抗源材料的需要，但現有的兩種接種方法噴霧接種法和手指摩擦接種法在操作過程中都需要在接種前用手工搓揉蔗葉制造傷口，由于不易掌握搓揉力度，往往導致搓揉傷口不均勻，從而使接種后發病不均勻，致病性不穩定，影響鑒定結果。此外，由于甘蔗葉片表面布滿毛群，葉緣鋸齒尖利，人工搓揉易劃傷手，也給具體操作帶來困難，導致接種費工費時，工效低。不適合對大批量甘蔗種質資源進行抗花葉病的快速鑒定。
發明內容本發明的目的是提供一種鑒定結果穩定、可操作性強、接種工效高，適合對大批量材料進行抗花葉病快速鑒定的接種方法。本發明包括以下步驟1、制備病毒接種體接種病毒源活體繁殖保存在甘蔗植株上。接種前取植株幼嫩的病葉組織剪細后，加入3倍量按體積重量比(V/W)濃度為0.1mol/L，PH值為7.2含0.2^Na2SO4的磷酸緩沖液，研磨成勻漿，雙層紗布過濾，濾液即為病毒接種體；2、甘蔗生長期切莖接種甘蔗生長期時，在陰涼的傍晚用鋒利刀片或枝剪把甘蔗植株地上部分沿土表快速切去；3、用滴管吸一滴病毒接種體滴入地下蔗頭創面上、使病毒接種體接觸地下蔗頭創面上，病毒侵入植株；4、甘蔗創面遮光24小時后揭開。本發明的優點和有益效果在于-(1)接種后甘蔗花葉病發病顯著、靈敏度高，可以有效的區分不同甘蔗品種之間對病害的抗感性；(2)運用切莖后在切口處點病毒液的接種方法，制造的傷口均勻，接種病毒量一致、接種后發病均勻、結果穩定性好；(3)由于帶毒收砍工具交叉感染是甘蔗花葉病傳播的主要途徑，而生長期切莖接種法與此種傳播方式很相似，因此鑒定結果更接近于田間自然感病結果；(4)本發明的接種方法快速簡便、規范實用，不用人工搓揉甘蔗葉片，不易劃傷手，因而可操作性強、接種工效高；鑒定結果更接近于田間自然感病結果，因此適合對大批量材料進行抗花葉病快速鑒定和篩選，為育種和生產部們提供更多更廣泛的抗源材料。具體實施例方式1、供試甘蔗品種材料準備供試甘蔗品種材料從脫毒健康苗圃選擇無病健壯蔗株，分別切成雙芽苗，在流動冷水中浸泡48小時之后，用50士0.5'C熱水處理2~3小時，再用80%敵敵畏和50%多菌靈按體積比l:800液浸種510min，然后分別種植在塑料桶內，置于防蟲溫室，常規栽培管理；2、接種病毒源及接種液準備接種病毒源活體繁殖保存在甘蔗植株上。接種前取植株幼嫩的病葉組織剪細后，加3倍量(V/W)濃度為0.1mol/L，PH值為7.2含0.2%Na2SO4的磷酸緩沖液，研磨成勻漿，雙層紗布過濾，濾液即為病毒接種體；3、接種方法供試品種材料長到甘蔗生長期時，選擇陰涼的傍晚進行。用滅菌后的鋒利刀片或枝剪把甘蔗植株地上部分沿土表快速切去，再用滴管吸一滴病毒接種體滴入留下的地下蔗頭創面上，每品種接種20株，之后遮光24小時后揭開；4、發病率調査方法接種20天后，開始調査發病率，以后每隔15天調査1次，直至發病率穩定為止。調査記錄接種日期、出苗數、病害癥狀始現期、累計發病叢數，計算發病株率。5、分級標準<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>權利要求1.一種甘蔗花葉病抗病性鑒定的接種方法，其特征在于包括以下步驟(1)制備病毒接種體取甘蔗植株幼嫩的病葉組織剪細后，加入3倍量按體積重量比(V/W)濃度為0.1mol/L、PH值為7.2含0.2％Na2SO4的磷酸緩沖液，研磨成勻漿，雙層紗布過濾，濾液即為病毒接種體；(2)甘蔗生長期切莖接種甘蔗生長期時，用刀片或枝剪把甘蔗植株地上部分沿土表快速切去，將病毒接種體滴入蔗頭創面上，使病毒接種體侵入植株；(3)甘蔗創面遮光24小時后揭開。全文摘要一種甘蔗花葉病抗病性鑒定的接種方法，主要步驟為接種病毒源活體繁殖保存在甘蔗植株上，接種前取植株幼嫩的病葉組織剪細后，加磷酸緩沖液研磨成勻漿，雙層紗布過濾，濾液即為病毒接種體；在甘蔗生長期陰涼的傍晚，用鋒利刀片或枝剪把甘蔗植株地上部分沿土表快速切去后，立即用滴管吸一滴病毒接種體滴入留下的地下蔗頭創面上，使病毒接種體接觸創面，病毒侵入植株，遮光24小時后揭開；本發明接種后甘蔗花葉病發病顯著、靈敏度高，且發病均勻、結果穩定性好；此外該方法快速簡便、規范實用，不用人工搓揉甘蔗葉片，不易劃傷手，因而可操作性強、接種工效高；鑒定結果更接近于田間自然感病結果，因此適合對大批量材料進行抗花葉病快速鑒定和篩選。文檔編號G01N33/48GK101363835SQ20081005899公開日2009年2月11日申請日期2008年9月27日優先權日2008年9月27日發明者盧文潔,李文鳳,王曉燕,羅志明,黃應昆申請人:云南省農業科學院甘蔗研究所