專利名稱：解磷菌株pan 4及其在核桃促生中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，尤其涉及的是Pseudomonas vancouverensis Mohn et al解磷菌株P(guān)AN 4及其在核桃促生中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
磷是植物生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)元素，缺磷可導(dǎo)致農(nóng)作物產(chǎn)量明顯降低。土壤全磷含量雖然較高，但多以難溶態(tài)存在于土壤中，難以被植物吸收利用。生產(chǎn)上通過施用磷肥來解決土壤缺磷問題，不僅會耗竭有限的磷礦資源，還可能造成環(huán)境污染，破壞生態(tài)平衡。解磷細菌(phosphate solubilizing bacteria)是一類能夠?qū)⑼寥乐兄参镫y以吸收的磷轉(zhuǎn)化為可利用狀態(tài)磷的有益微生物，它通過活化土壤磷元素或影響植物根系分泌物的種類和數(shù)量，增加植物根系對周圍K、Ca > Mg, Fe、Zn等營養(yǎng)元素的吸收，從而促進植物的生 長發(fā)育。目前，在解磷微生物的研究中多以禾本科作物為接種對象，且對解磷微生物促生效應(yīng)的研究僅集中在對植株株高和生物量的影響。前人的研究結(jié)果表明接種解磷菌劑對水稻、玉米、燕麥、綠豆、甘蔗等作物均具有明顯的促生效應(yīng)。而以木本植物作為接種對象研究解磷菌劑的促生效應(yīng)，國內(nèi)外報道甚少。核桃廣泛分布于世界各地，是我國重要的經(jīng)濟林木之一，因?qū)λ帘３值淖饔煤推涔麑嵉臓I養(yǎng)保健功能，越來越受到重視。但是核桃植株生長對磷元素的需求量較大，磷是制約其生長的重要因子，目前未見Pseudomonas vancouverensis Mohn et al作為解憐菌劑在核桃上應(yīng)用的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的解磷菌株P(guān)AN 4菌株于2008年6月5采用稀釋平板法分離于四川南充核桃根際，經(jīng)鑒定為Pseudomonas vancouverensis Mohn et a。已經(jīng)于2012年9月11日保藏于中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址位于北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，保藏編號為CGMCC NO. 6546 ;分類命名為Pseudomonas vancouverensis。本發(fā)明涉及的Pseudomonasvancouverensis Mohn et al PAN 4新菌株，不僅解磷能力強，且高效促生核桃，改善根際微生物環(huán)境，促進植物生長，提高核桃苗光合生理特性和核桃苗磷素營養(yǎng)，具有促生優(yōu)化根系微生態(tài)環(huán)境雙重功能。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明進行詳細說明。實施例I Pseudomonas vancouverensis Mohn et al PAN 4 (CGMCC NO. 6546)液體制劑的發(fā)酵①一級斜面種子常規(guī)方法制作牛肉膏蛋白胨(蛋白胨10 g，牛肉膏3 g, NaCl 5g，瓊脂15 g，蒸餾水1000 mL, pH 7. O)斜面培養(yǎng)基，接種PAN4后在26_28°C下培養(yǎng)24小時制成一級種子。②二級液體種子解磷細菌培養(yǎng)基[葡萄糖10 g，(NH4)2SO4 O. 5 g，NaCl O. 3 g，KCl O. 3 g, FeSO4 · 7H20 0. 03 g, MnSO4 · H 20 0. 03 g, MgSO4 · 7H20 0. 3 g, KH2PO4 2. 0 g,蒸餾水1000 mL])經(jīng)高壓滅菌后，按75mL液體盛于300mL三角瓶比例(通氧控制)裝瓶，在無菌狀態(tài)接種PAN4斜面種子，每瓶接種I支斜面種子，溫度26-28°C，初始pH值7. 5，120r/min振蕩培養(yǎng)36h，制成PAN4液體種子。③液體發(fā)酵葡萄糖20 g/L, (NH4Cl)L O g/L，初始pH值為7. 5，裝液量為75 mL，經(jīng)高壓滅菌后，按75mL液體盛于300mL三角瓶比例(通氧控制)裝瓶，在無菌狀態(tài)接種PAN4液體種子，接種量4%，溫度26-28°C，120r/min振蕩培養(yǎng)72h，制成PAN4液體制劑。比濁法測定菌體量(0D600值I. 100)，并同時接種I mL菌液于PKV液體培養(yǎng)基(葡萄糖10 g, (NH4)2SO4O. 5 g, NaCl O. 3 g, KCl O. 3 g, FeSO4 · 7H20 O. 03 g, MnSO4 · 4H20 O. 03 g, MgSO4 · 7H200.3 g, Ca3(PO4)2 10 g，蒸餾水1000 mlL,pH 7· 0 7· 5)，鑰銻抗比色法測定其解磷能力達200mg/L 以上。·
(2)制劑保存瓶裝制劑常溫保存半年(1%甘油)或低溫(4度)I年半不影響促生效果。(3)田間施用核桃按100-200倍(體積比)稀釋度沿根系幅面灌根，每株200毫升，春、夏各一次，連續(xù)三年，可促進核桃生長(株高、生物量)、提高核桃苗光合生理特性和核桃苗磷素營養(yǎng)；改善核桃根際微生物環(huán)境。實施例2試驗于2009年3月起在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)林木種質(zhì)圃進行，核桃苗生長期間進行常規(guī)管理，并定期輪換花盆的位置。試驗土壤采自四川省雅安市大興鎮(zhèn)林木育種基地，采樣深度為O 20 cm,砂壤土。土壤理化性質(zhì)經(jīng)測定為土壤pH 7. I,有機質(zhì)含量10.43 g/kg,全氮含量0.80 g/kg,全磷含量0.34 g/kg,有效磷含量4.50 mg/kg。樣土風(fēng)干后過I mm篩，并與過I mm篩的河沙以3:1 (V: V)混合后用于盆栽試驗。待核桃苗移栽成活后，分不同濃度在核桃根際周圍用無菌注射器注射上述實施例I中的液體菌劑50 mL，重復(fù)6次，以每盆注射滅菌后的培養(yǎng)基(不含菌)50 mL對照。進行以下測定①核桃植株根際土壤微生物區(qū)系及生長的測定2009年10月中旬苗木停止生長后對根際土壤細菌、真菌、放線菌數(shù)量進行測定。測定方法為稀釋平板法，細菌采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌采用改良高氏一號合成培養(yǎng)基，臨用時在已融化的培養(yǎng)基中每300 mL培養(yǎng)基加3%重鉻酸鉀I mL ;真菌采用馬丁氏孟加拉紅培養(yǎng)基，臨用時每100 mL培養(yǎng)基加1%鏈霉素液O. 3 mL,結(jié)果以每克干土所含數(shù)量表示。每處理重復(fù)5次。2009年10月中旬苗木停止生長后，分別測定其植株高度，并且每個處理選取5株生長一致的正常植株，將其根、莖、葉分別在105 °C下殺青30 min, 75 °C下烘干至恒重后稱重，計算每株總生物量。結(jié)果見表I :表I解磷菌劑對核桃苗生長和根際微生物的影響
權(quán)利要求
1.解磷菌株P(guān)AN4菌株，保藏編號為CGMCC NO. 6546 ;分類命名為Pseudomonasvancouverensis。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的解磷菌株P(guān)AN4菌株在核桃促生中的應(yīng)用，按100-200倍稀釋度沿根系幅面灌根，每株200毫升，春、夏各一次，連續(xù)三年，可促進核桃生長、提高核桃苗光合生理特性和核桃苗磷素營養(yǎng)；改善核桃根際微生物環(huán)境。
全文摘要
本發(fā)明公開了本發(fā)明的解磷菌株P(guān)AN 4已經(jīng)于2012年9月11日保藏于中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC NO.6546；分類命名為 Pseudomonas vancouverensis。本發(fā)明涉及的Pseudomonas vancouverensis Mohn et al PAN 4新菌株，不僅解磷能力強，且高效促生核桃，改善根際微生物環(huán)境，促進植物生長，提高核桃苗光合生理特性和核桃苗磷素營養(yǎng)，具有促生優(yōu)化根系微生態(tài)環(huán)境雙重功能。
文檔編號A01G7/06GK102911895SQ20121036589
公開日2013年2月6日 申請日期2012年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月27日
發(fā)明者朱天輝, 李姝江, 余旋, 張麗娜, 譙天敏, 樸春根, 崔曉亮 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)