1.一種速生無刺槐組培苗的生根培養方法,其特征在于,包括:
(1)實驗材料的選擇:
選取繼代周期為30~40天,生長健壯、葉片舒展,株高為3~5cm的速生無刺槐組培苗為實驗材料,切除基部愈傷及基部葉片,保留1cm左右的頂芽、莖段及芽團;
(2)具體實驗步驟:
(2.1)無菌外植體的獲取;
(2.2)速生無刺槐繼代增殖步驟;
(2.3)速生無刺槐生根培養步驟;
(2.4)速生無刺槐繼代培養及生根培養條件;
(2.5)速生無刺槐組培苗的煉苗與移栽。
2.根據權利要求1所述的一種速生無刺槐組培苗的生根培養方法,其特征在于:步驟(2.1)無菌外植體的獲取,
選取1~2年生帶芽體的健壯根系埋于育苗基質中,待新芽萌發出來后切割成1~2cm長的頂芽或帶腋芽的莖段,剪去葉片留3~5mm葉柄,用75%酒精擦拭外植體表面,用洗衣粉水浸泡2min,再置于流水下沖洗0.5~1h;在超凈工作臺上,用0.05~0.1%的升汞處理10~15min,用無菌水沖洗5~6次,接種至誘導培養基中(MS+0.01~0.1mg/L 6-BA+30g/L糖+5~7g/L卡拉膠),每瓶接種一株,獲得的無菌外植體的成功率為80%。
3.根據權利要求1所述的一種速生無刺槐組培苗的生根培養方法,其特征在于:步驟(2.2)速生無刺槐繼代增殖步驟:
(2.2.1)試驗材料,
選取步驟1中誘導出來的芽直接進行增殖培養,所選材料生長健壯、葉片舒展,利用頂芽、莖段及芽團進行繁殖,其中頂芽高0.8~1.2cm左右、莖段高0.5~1cm左右含至少一個腋芽、芽團高0.5~1cm至少含兩個小芽;
(2.2.2)速生無刺槐繼代培養的實驗方案設計,
速生無刺槐繼代培養的基本培養基為改良DKW培養基,其中添加蔗糖30g/L,卡拉膠5~7g/L,土豆30g/L,pH為5.8~6.0;
選用6-BA(6-芐基腺嘌呤)、IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)植物生長調節劑,速生無刺槐繼代培養最佳配方為:改良DKW+0.1mg/L 6-BA+0.2~0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+30g/L土豆+30g/L蔗糖+5~7g/L卡拉膠,采用該配方繼代培養的速生無刺槐的最大增殖比例為4.1,且植株長高明顯,能用于生根培養的單株苗多。
4.根據權利要求1所述的一種速生無刺槐組培苗的生根培養方法,其特征在于:步驟(2.3)速生無刺槐生根培養步驟,
(2.3.1)選取繼代培養的速生無刺槐組培苗,選取標準為高度1.5~3cm、健壯、葉片舒展的單株組培苗;
(2.3.2)將選取的繼代培養的速生無刺槐組培苗接種至1/2MS生根培養基上,
1/2MS生根培養基中包括:NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、KH2PO4 85mg/L、MgSO4·7H2O 185mg/L、CaCl2·2H2O 220mg/L、FeSO4·7H2O 13.9mg/L、Na2·EDTA·2H2O 18.65mg/L、KI 0.42mg/L、H3BO3 3.1mg/L、MnSO4·H2O 8.45mg/L、ZnSO4·7H2O 4.25mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.05mg/L、CoCl2·6H2O 0.0125mg/L、CuSO4·5H2O 0.0125mg/L、肌醇50mg/L、煙酸0.25mg/L、鹽酸吡哆醇0.25mg/L、鹽酸硫胺素0.05mg/L、甘氨酸1.0mg/L、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、20g/L蔗糖、5~7g/L卡拉膠;
(2.3.3)接種30天后統計生根率,生根率=生根株數/接種株數×100%;
篩選出的最適生根配方為:1/2MS+0.01mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.2mg/L IBA+20g/L土豆+20g/L蔗糖+5~7g/L卡拉膠。
5.根據權利要求1所述的一種速生無刺槐組培苗的生根培養方法,其特征在于:步驟(2.4)速生無刺槐繼代培養及生根培養條件,
速生無刺槐組培苗繼代及生根培養的條件為:光培養與暗培養交替進行,光培養條件為連續進行12h光照,光照強度為3000lx,培養溫度為25℃;暗培養條件為連續進行12h,溫度為20℃。
6.根據權利要求1所述的一種速生無刺槐組培苗的生根培養方法,其特征在于:步驟(2.5)速生無刺槐組培苗的煉苗與移栽,
(2.5.1)生根培養30~45天的生根苗可進溫室煉苗移栽,選取葉色正常、無枯葉黃葉的健壯植株進行移栽;
(2.5.2)將速生無刺槐生根苗根系上的培養基洗凈,種植在含珍珠巖、草炭、河沙等基質的營養杯或穴盤中,濕度控制在75~80%,待新根與新葉發出后逐漸降低濕度,培養45~60天,即可得速生無刺槐容器苗,其大棚煉苗成活率為90%以上;
(2.5.3)上述所說基質配方包括上下兩層,其中上層1/3容量體積為蛭石:珍珠巖=1:1;下層2/3容量體積為園土:草炭:河沙:珍珠巖=2:1:1:1,該基質配方的特點是上層基質疏松透氣、保水保濕,利于煉苗前期新根及新葉的發出;下層基質營養豐富,利于后期組培苗營養生長,且根系與基質易于成團、便于容器苗運輸。