專利名稱：一種抗水霉解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)基，具體是一種抗水霉解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
目前，抗菌藥使用是控制水產(chǎn)動物水霉病的主要手段，但抗菌藥的普遍應(yīng)用已經(jīng)引起了諸多環(huán)境污染問題，因而尋求抗菌藥的理想替代品迫在眉睫。抗水霉芽孢桿菌廣泛存在于自然界中，能夠形成內(nèi)生孢子，具有很強(qiáng)的抗逆性，不僅能夠防病治病，促進(jìn)動物生長，而且具有無副作用、無殘留、無污染、不產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)，是替代抗水霉藥的理想微生物制劑。因此，抗水霉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基對其產(chǎn)品的開發(fā)與應(yīng)用至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抗水霉解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基。本發(fā)明提供的一種抗水霉解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，其組分和含量為麥芽糖 5-7 g/L，酵母粉 10-14 g/L，氯化鈉 5-9 g/L。其組分和含量優(yōu)選為麥芽糖5 g/L，酵母粉10 g/L，氯化鈉9g/L。以該培養(yǎng)基培養(yǎng)解淀粉芽孢桿菌，其活菌數(shù)可達(dá)2. 63X 101(lCfU/mL，較以營養(yǎng)肉湯作為培養(yǎng)基培養(yǎng)解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)高1. 68個(gè)數(shù)量級，可作為解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵
的培養(yǎng)基。說明書附圖


圖1 碳源對解淀粉芽孢桿菌生長的影響； 圖2 氮源對解淀粉芽孢桿菌生長的影響； 圖3 無機(jī)鹽對解淀粉芽孢桿菌生長的影響； 圖4 不同濃度麥芽糖對解淀粉芽孢桿菌生長的影響； 圖5 不同濃度酵母粉對解淀粉芽孢桿菌生長的影響； 圖6 不同濃度氯化鈉對解淀粉芽孢桿菌生長的影響。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
1材料與方法 1. 1實(shí)驗(yàn)材料
抗水霉解淀粉芽孢桿菌證1，保藏單位名稱中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱ccTcc)； 保藏單位地址武漢市武昌珞珈山；保藏日期2010. 6. 2 ；保藏編號CCTCC NO :M2010129 ； 分類命名解淀粉芽孢桿菌ail (Bacillus amyloliquifaciens Shi)。營養(yǎng)肉湯、麥芽糖、 葡萄糖、淀粉、蔗糖、尿素、酵母粉、硝酸鉀、氯化銨、氯化鎂、氯化鈣、硫酸錳、硫酸鎂，均購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。1. 2發(fā)酵培養(yǎng)基組分的優(yōu)化1. 2. 1不同種類碳源對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
分別以麥芽糖、葡萄糖、淀粉、蔗糖等量替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的牛肉膏，然后將終濃度為1 X IO8 cfu/mL菌液均按5%接種量接種后分別于30°C、150r/min搖床振蕩培養(yǎng)Mh，采用稀釋涂布平板法測定解淀粉芽孢桿菌的活菌含量。1. 2. 2不同種類氮源對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
分別以尿素、酵母粉、硝酸鉀、氯化銨等量替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的蛋白胨，然后將終濃度為ι χ IO8 Cfu/mL菌液均按5%接種量接種后分別于30°C、150r/min搖床振蕩培養(yǎng)Mh，采用稀釋涂布平板法測定解淀粉芽孢桿菌的活菌含量。1. 2. 3不同種類無機(jī)鹽對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
分別以氯化鎂、氯化鈣、硫酸錳、硫酸鎂等量替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的氯化鈉，然后將終濃度為ι χ IO8 Cfu/mL菌液均按5%接種量接種后分別于30°C、150r/min 搖床振蕩培養(yǎng)Mh，采用稀釋涂布平板法測定解淀粉芽孢桿菌的活菌含量。1. 2. 4解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基配比的優(yōu)化
1.2. 4. 1不同濃度碳源對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
以篩選的最佳氮源等量替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的蛋白胨，以篩選的最佳無機(jī)鹽等量替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的氯化鈉，以不同濃度篩選的最佳碳源代替解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的牛肉膏，然后將終濃度為IXlO8 cfu/mL菌液均按5%接種量接種后分別于30°C、150r/min搖床振蕩培養(yǎng)Mh，采用稀釋涂布平板法測定解淀粉芽孢桿菌的活菌含量。1. 2. 4. 2不同濃度氮源對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
以篩選的最佳碳源替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的牛肉膏，并調(diào)節(jié)到篩選的最適濃度，以篩選的最佳無機(jī)鹽等量替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的氯化鈉，然后以不同濃度篩選的最佳氮源替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的蛋白胨，然后將終濃度為IX IO8 Cfu/mL菌液均按5%接種量接種后分別于30°C、150r/min搖床振蕩培養(yǎng)Mh， 采用稀釋涂布平板法測定解淀粉芽孢桿菌的活菌含量。1. 2. 4. 3不同濃度無機(jī)鹽對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
以篩選的最佳碳源替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的牛肉膏，以篩選的最佳氮源替換解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的蛋白胨，并分別調(diào)節(jié)到最適濃度，然后以不同濃度篩選的最佳無機(jī)鹽代替解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用營養(yǎng)肉湯中的氯化鈉，然后將終濃度為 1 X IO8 Cfu/mL菌液均按5%接種量接種后分別于30°C、150r/min搖床振蕩培養(yǎng)Mh，采用稀釋涂布平板法測定解淀粉芽孢桿菌的活菌含量。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1不同種類碳源對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
結(jié)果見圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，麥芽糖是解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳碳源。 以麥芽糖為碳源時(shí)，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度最高，其發(fā)酵濃度的對數(shù)值為9. 431，較以牛肉膏為碳源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高0. 692 {P>0. 05)，較以葡萄糖為碳源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高2. 301 {P<0.游)，較以淀粉為碳源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1. 15 {P>0.游)，較以蔗糖為碳源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1.024、P>0.05\2.2不同種類氮源對解淀粉芽孢桿菌生長的影響結(jié)果見圖2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，酵母粉是解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳氮源。 以酵母粉為碳源時(shí)，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度最高，其發(fā)酵濃度的對數(shù)值為9. 749，較以蛋白胨為氮源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高0. 629 {P<0. 05)，較以尿素為氮源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1.699 (/Yft 05)，較以硝酸鉀為氮源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1.259 0°>fti^)，較以氯化銨為氮源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高4. 299 {P<0. 05)02.3不同種類無機(jī)鹽對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
結(jié)果見圖3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氯化鈉是解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳無機(jī)鹽。以氯化鈉為無機(jī)鹽時(shí)，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度最高，其發(fā)酵濃度的對數(shù)值為9. 628， 較以氯化鎂為無機(jī)鹽時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高2. 133 (/Yft 05)，較以氯化鈣為無機(jī)鹽源時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高2. 438 CP<0. 05)，較以硫酸錳為無機(jī)鹽時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高2. 536 CP<0. 05)，較以硫酸鎂為無機(jī)鹽時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高2. 717 CP<0. 05)02.4解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵培養(yǎng)基配比的優(yōu)化 2.4.1不同濃度麥芽糖對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
結(jié)果見圖4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以麥芽糖為碳源時(shí)，麥芽糖濃度不同，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度也有所不同。當(dāng)麥芽糖濃度為5 g/L時(shí)，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度最高，其發(fā)酵濃度的對數(shù)值為10. 031，較麥芽糖濃度為lg/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1. 017 {P<0. 05), 較麥芽糖濃度為3 g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高0.6 (/Yft 05)，較麥芽糖濃度為7g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高0. 118 (F〉ft 0幻，較麥芽糖濃度為9g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1.088 iP<0. 05) 02. 4. 2不同濃度酵母粉對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
結(jié)果見圖5。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以酵母粉為氮源，酵母粉濃度不同，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度也有所不同。當(dāng)酵母粉濃度為10g/L時(shí)，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度最高，其發(fā)酵濃度的對數(shù)值為9. 749，較酵母粉濃度為6g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1. 679 {P<0. 05\敬酵母粉濃度為14g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高0. 119 {P>0. 05)，較酵母粉濃度為18g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1. 039 {P<0. 05)，較酵母粉濃度為22g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1. 689 iP<0. 05) ο2. 4. 3不同濃度氯化鈉對解淀粉芽孢桿菌生長的影響
結(jié)果見圖6。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以氯化鈉為無機(jī)鹽，氯化鈉濃度不同，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度也有所不同。當(dāng)氯化鈉濃度為9g/L時(shí)，解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度最高，其發(fā)酵濃度的對數(shù)值為10. 421，較氯化鈉濃度為lg/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高2. 45(/Yft 05)，較氯化鈉濃度為5g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高0.窗〉0. 05)，較氯化鈉濃度為13g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1. 08 (.Ρ> 0. 05)，較氯化鈉濃度為17 g/L時(shí)的發(fā)酵濃度對數(shù)值高1. 32 {P<0. 05)。
3、發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化配方效果實(shí)驗(yàn)
發(fā)酵培養(yǎng)基麥芽糖5g，酵母粉10g，氯化鈉9g，水1L。以終濃度為1 X IO8 cfu/mL菌液按5%接種量接種該培養(yǎng)基后于30°C、150r/min搖床振蕩培養(yǎng)解淀粉芽孢桿菌Mh，其活菌數(shù)可達(dá)2. 63X KTcfu/mL，較以營養(yǎng)肉湯作為培養(yǎng)基培養(yǎng)解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)高1. 68 個(gè)數(shù)量級。
4 結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用發(fā)酵培養(yǎng)基的的最佳碳源為麥芽糖、最佳氮源為酵母粉、最佳無機(jī)鹽為氯化鈉，其最優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基為麥芽糖5g/L，酵母粉10g/L，氯化鈉9g/L。以該培養(yǎng)基培養(yǎng)解淀粉芽孢桿菌，其發(fā)酵濃度可達(dá)Z.eSXK^cfu/mL，較以營養(yǎng)肉湯作為培養(yǎng)基培養(yǎng)解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵濃度高1. 68個(gè)數(shù)量級，可作為解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)用發(fā)酵培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種抗水霉解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，特征在于其組分和含量為麥芽糖5-7 g/L，酵母粉 10-14 g/L，氯化鈉 5-9 g/L。
2.如權(quán)利要求1所述的一種抗水霉解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，特征在于其組分和含量為麥芽糖5 g/L，酵母粉10 g/L，氯化鈉9 g/L。
3.如權(quán)利要求1所述的一種抗水霉解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，特征在于所述的抗水霉解淀粉芽孢桿菌，其保藏號為CCTCC NO :M2010129。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抗水霉解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵培養(yǎng)基，其組分和含量為麥芽糖5-7g/L，酵母粉10-14g/L，氯化鈉5-9g/L。以該培養(yǎng)基培養(yǎng)解淀粉芽孢桿菌，其活菌數(shù)可達(dá)2.63×1010cfu/mL，較以營養(yǎng)肉湯作為培養(yǎng)基培養(yǎng)解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)高1.68個(gè)數(shù)量級，可作為解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵的培養(yǎng)基。
文檔編號C12R1/07GK102533584SQ20111034658
公開日2012年7月4日 申請日期2011年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月5日
發(fā)明者何珊, 衛(wèi)若鵬, 呂利群, 曹海鵬 申請人:上海海洋大學(xué), 山西衛(wèi)氏魚康實(shí)業(yè)有限公司