本發(fā)明涉及食品生物，具體為一種腸溶性乳酸菌膠囊及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、隨著人們生活水平的提高和健康意識(shí)的增強(qiáng)，益生菌產(chǎn)品逐漸受到廣泛關(guān)注。乳酸菌作為一類重要的益生菌，因其能夠調(diào)節(jié)腸道菌群平衡、增強(qiáng)免疫力、促進(jìn)消化吸收等生理功能，被廣泛應(yīng)用于食品、保健品和藥品等領(lǐng)域。

2、在傳統(tǒng)的益生菌補(bǔ)充方式中，乳酸菌常以液態(tài)或粉劑形式存在，但這些形式在食品加工過(guò)程、貯存和胃腸消化等不良環(huán)境中易大量失活,導(dǎo)致缺乏足夠的活菌量能夠順利到達(dá)人體結(jié)腸并發(fā)揮其益生作用。為了解決這個(gè)問(wèn)題，腸溶性乳酸菌膠囊應(yīng)運(yùn)而生。

3、目前研究較多的是淀粉類和植物性蛋白類作為膠囊材料，這些原料具有一定的成膜性，但是機(jī)械強(qiáng)度不能滿足食品包裝的需求，且存在包埋率低和粒度大等缺點(diǎn)，限制了其工業(yè)化的應(yīng)用，通常采用化學(xué)改性提高其性能。其中，美拉德反應(yīng)生成的美拉德產(chǎn)物（maillard?products，mrps）因其促膜性、抗氧化性等活性，被用作保護(hù)益生菌的重要包封劑。但美拉德反應(yīng)又因其產(chǎn)生晚期終末糖基化產(chǎn)物而應(yīng)用受限。為了解決這一問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)采用酶法接枝反應(yīng)改性蛋白質(zhì)，相比于美拉德反應(yīng)，酶法接枝反應(yīng)的副產(chǎn)物只有水，而沒有其他有害的副產(chǎn)物，且酶反應(yīng)具有特異性，反應(yīng)效率高，是一種安全、有效的改性手段。

4、因此，我們提出一種腸溶性乳酸菌膠囊及其制備方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種腸溶性乳酸菌膠囊及其制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中提出的問(wèn)題。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

3、一種腸溶性乳酸菌膠囊的制備方法，包括如下步驟：

4、步驟s1：將乳酸菌依次進(jìn)行活化、離心分離，得到乳酸菌菌泥，然后用無(wú)菌生理鹽水重懸，得到菌懸液；

5、步驟s2：將大米蛋白分散于蒸餾水中，得到大米蛋白懸浮液，調(diào)節(jié)體系ph為8-9，在40-50℃下保溫15-30min，加入α-胰凝乳蛋白酶，反應(yīng)至水解度為4%，滅酶后離心，收集上清液，經(jīng)透析，冷凍干燥后，得到大米蛋白水解物；

6、將大米蛋白水解物分散于蒸餾水中，得到大米蛋白水解物溶液，調(diào)節(jié)體系ph為4-5，加入漆酶，攪拌2-4h，加入負(fù)載型阿魏酰低聚糖，繼續(xù)反應(yīng)22-24h，滅酶后離心，經(jīng)透析、冷凍干燥后，得到復(fù)合物；

7、將海藻酸鈉、復(fù)合物和蒸餾水混合均勻，加入碳酸鈣，溶脹22-24h，得到復(fù)合壁材溶液；

8、步驟s3：將復(fù)合壁材溶液和菌懸液混合均勻，加入到含有乳化劑的大豆油中，攪拌均勻，形成均勻的油包水（w/o）型乳化液，加入冰醋酸，攪拌均勻，靜置1-2h，得到沉淀物，離心分離，得到腸溶性乳酸菌膠囊。

9、進(jìn)一步的，所述步驟s1中，乳酸菌菌泥的具體制備工藝為：將乳酸菌接種于mrs液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h，活化兩次后，再以1%接種量接種于mrs液體培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)24h后，4℃、10000rpm的條件下離心10min，去除上清液，得到乳酸菌菌泥。

10、進(jìn)一步的，所述步驟s1中，菌懸液的活菌數(shù)為1×109-2×1010cfu/ml。

11、進(jìn)一步的，所述步驟s2中，復(fù)合壁材溶液包括以下質(zhì)量濃度的原料：海藻酸鈉3-5%、復(fù)合物5-10%、碳酸鈣1-2%，余量為蒸餾水。

12、進(jìn)一步的，所述負(fù)載型阿魏酰低聚糖的制備方法如下：

13、步驟（1）：將阿魏酰低聚糖和蒸餾水混合均勻，在70-80℃下攪拌2-3h，在3-5℃下水合10-12h，得到阿魏酰低聚糖溶液，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為8-9，加入辛烯基琥珀酸酐，在40-50℃下反應(yīng)1-2h，用鹽酸調(diào)節(jié)溶液ph值為5.5-6.0，冷卻至室溫，經(jīng)離心、洗滌、透析、冷凍干燥后，得到改性阿魏酰低聚糖；

14、步驟（2）：將改性阿魏酰低聚糖和蒸餾水混合均勻，在3-5℃下水合10-12h，得到改性阿魏酰低聚糖溶液，加入槲皮素，在40-50℃下均質(zhì)5-10min，離心，收集上清液，經(jīng)透析、冷凍干燥后，得到負(fù)載型阿魏酰低聚糖。

15、在上述技術(shù)方案中，以富含羥基的阿魏酰低聚糖為原料，利用辛烯基琥珀酸酐（osa）為疏水劑對(duì)其進(jìn)行改性，成功制備一種兩親性多糖載體，即改性阿魏酰低聚糖，能夠有效負(fù)載疏水性槲皮素；通過(guò)自組裝制備負(fù)載槲皮素的阿魏酰低聚糖，形成負(fù)載型阿魏酰低聚糖；采用胰凝乳蛋白酶水解大米蛋白以暴露酪氨酸等氨基酸殘基，再通過(guò)漆酶的催化作用下，大米蛋白水解物中的酪氨酸殘基與負(fù)載型阿魏酰低聚糖中阿魏酸和槲皮素發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，得到復(fù)合物，顯著提高了蛋白質(zhì)的乳化穩(wěn)定性和抗氧化性。

16、進(jìn)一步的，所述步驟（1）中，阿魏酰低聚糖、蒸餾水和辛烯基琥珀酸酐的質(zhì)量比為1：（35-45）：（1-2）。

17、進(jìn)一步的，所述步驟（1）中，氫氧化鈉溶液的濃度為3wt%，鹽酸的濃度為1mol/l。

18、進(jìn)一步的，所述步驟（2）中，改性阿魏酰低聚糖溶液的濃度為0.2-0.4wt%。

19、進(jìn)一步的，所述步驟（2）中，槲皮素的質(zhì)量為改性阿魏酰低聚糖質(zhì)量的0.2-0.5倍。

20、進(jìn)一步的，所述步驟s2中，大米蛋白懸浮液的濃度為7-8wt%。

21、進(jìn)一步的，所述步驟s2中，α-胰凝乳蛋白酶的添加量與大米蛋白的比例為300-320u/g。

22、進(jìn)一步的，所述步驟s2中，大米蛋白水解物溶液的濃度為4-6mg/ml。

23、進(jìn)一步的，所述步驟s2中，漆酶的用量為1.5-2.0u/ml。

24、進(jìn)一步的，所述步驟s2中，負(fù)載型阿魏酰低聚糖的質(zhì)量為大米蛋白水解物質(zhì)量的0.5-1.0倍。

25、進(jìn)一步的，所述步驟s3中，復(fù)合壁材溶液和菌懸液的質(zhì)量比為4：（1-3）。

26、進(jìn)一步的，所述步驟s3中，大豆油的質(zhì)量為復(fù)合壁材溶液和菌懸液總質(zhì)量的2-3倍。

27、進(jìn)一步的，所述步驟s3中，乳化劑為吐溫-80、司班-80、司班-20中的一種，且乳化劑的添加量為大豆油質(zhì)量的0.4-0.8%。

28、進(jìn)一步的，所述步驟s3中，冰醋酸的質(zhì)量為復(fù)合壁材溶液和菌懸液總質(zhì)量的0.3-0.6%。

29、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

30、1、本發(fā)明的一種腸溶性乳酸菌膠囊及其制備方法，以富含羥基的阿魏酰低聚糖為原料，利用辛烯基琥珀酸酐（osa）為疏水劑對(duì)其進(jìn)行改性，制備一種兩親性載體，槲皮素(que)是一種具有抗炎和抗氧化特性的植物多酚，通過(guò)自組裝制備負(fù)載槲皮素的阿魏酰低聚糖，使得槲皮素能夠有效負(fù)載在阿魏酰低聚糖的結(jié)構(gòu)中，改善其水溶性和生物可利用度；采用胰凝乳蛋白酶水解大米蛋白以暴露酪氨酸等氨基酸殘基，再通過(guò)酶法交聯(lián)催化負(fù)載型阿魏酰低聚糖與大米蛋白水解物共價(jià)結(jié)合，得到復(fù)合物，顯著提高了蛋白質(zhì)的乳化穩(wěn)定性和抗氧化性，同時(shí)，負(fù)載型阿魏酰低聚糖的較大分子量和空間結(jié)構(gòu)會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)表面產(chǎn)生阻礙效應(yīng)，減少了蛋白質(zhì)表面消化酶的可結(jié)合位點(diǎn)，增強(qiáng)了蛋白質(zhì)的空間位阻，從而增強(qiáng)了蛋白質(zhì)的抗消化能力，因此，有助于被封裝活性物質(zhì)在胃腸道消化過(guò)程中的穩(wěn)定性；以海藻酸鈉、復(fù)合物和碳酸鈣作為復(fù)合壁材；采用內(nèi)源乳化凝膠法制備植物乳酸桿菌微膠囊，具有很好的耐酸性和腸溶性，可延緩芯材在模擬胃消化環(huán)境中釋放，保證槲皮素和乳酸菌在胃酸環(huán)境中的穩(wěn)定性，從而在腸道內(nèi)實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)的釋放。