本發明屬于生物醫藥領域，特別涉及一種藤黃酸白蛋白納米粒及其制備方法。
背景技術：
：藤黃酸(gambogicacid，ga)是中藥藤黃的主要有效成分之一，具有顯著抗腫瘤活性。其可通過抑制生物體內dna的合成，抑制酪氨酸激酶的磷酸化等作用機制來發揮抗腫瘤作用，是具有多靶點的腫瘤細胞凋亡誘導劑。雖然藤黃酸具有較強抗腫瘤能力，但其較差的水溶性(低于0.5μg/ml)是其臨床應用需要解決的重大的問題。藤黃酸的血漿清除率高，體內消除半衰期短，體內分布的范圍廣，導致其生物利用度較低，極大的限制了臨床的推廣和使用。因此開發新型藤黃酸制劑是十分必要的。白蛋白納米粒是以白蛋白為載體材料，粒徑在10～1000nm的膠體給藥系統。白蛋白通常指血清清蛋白，是脊椎動物血清蛋白質的主要成分，作為一種內源性物質能夠避免免疫系統的攝取，它是血漿中很主要的載體，許多水溶性差的物質可以通過與白蛋白的結合而被運輸。白蛋白納米粒制備過程中不使用任何表面活性劑，毒副作用小。因此白蛋白納米粒具有安全無毒、無免疫原性、可生物降解等特點，白蛋白納米粒在在體內穩定性良好。白蛋白作為一種多功能的藥物靶向載體，因能被腫瘤組織優先攝取而顯示出獨特的靶向腫瘤特性，為抗癌藥物的靶向運輸提供了有效載體。因此，白蛋白納米粒具有提高難溶性藥物溶解度、控制藥物釋放及靶向性等獨特優勢，將難溶性藥物制成白蛋白納米粒可以提高體內穩定性，提高口服生物利用度，改善體內分布。這使得那些溶解性差、口服生物利用度低藥物能夠更好地發揮藥效，更適合藥物制劑的臨床應用。目前，藤黃酸已有制劑中，為提高藤黃酸的溶解度常加入的增溶劑或者助溶劑將會導致一系列的副作用，例如過敏反應，腎毒性，心臟毒性及神經毒性等。也有研究者研究了藤黃酸的新劑型，但是大多存在穩定性差且臨床使用不安全等缺陷，所以研究一種藤黃酸的新制劑以解決其溶解度差、生物利用度低等缺陷迫在眉睫。技術實現要素：本發明目的是提供一種可提高藥物的溶解度，提高用藥安全性，改變藥物的體內分布，減少毒副作用的藤黃酸白蛋白納米粒，以提高口服生物利用度和安全性，發揮更好的治療效果。本發明采用的技術方案為：一種藤黃酸白蛋白納米粒，由活性成份藤黃酸和牛血清白蛋白bsa制成。所述的藤黃酸白蛋白納米粒，按質量比，藤黃酸：bsa＝1:20-1:5。優選的，按質量比，藤黃酸：bsa＝1:10。一種所述藤黃酸白蛋白納米粒的制備方法，包括以下步驟：1)將牛血清白蛋白完全溶解于去離子水中，攪拌使其充分溶解，得到水相；2)將藤黃酸溶解于氯仿中，得到有機相；3)利用高速剪切機在6000r/min剪切轉速下，將有機相緩慢逐滴加入到水相中，加入完畢后將轉速升至12000r/min，繼續剪切5min，得到粗分散的初乳；4)將所得初乳通過高壓勻質處理，然后于30℃旋轉蒸發5min，除去有機溶劑，制備得到藤黃酸白蛋白納米粒。所述的制備方法，步驟1)中牛血清白蛋白在水相中的濃度選自5，10，15或20mg/ml。優選的，所述的牛血清白蛋白在水相中的濃度為10mg/ml。所述的制備方法，步驟2)所述的氯仿含0.1％乙醇。所述的制備方法，步驟3)按體積比，水相：有機相＝10:1～40:1。優選的，水相：有機相＝20:1。所述的制備方法，步驟4)所述高壓均質處理是：均質壓力在11650-18640psi，均質次數在5-20次。所述的制備方法，步驟4)所述高壓均質處理是：先于4660psi預均質3-5次后，再于11650-18640psi均質5-20次。優選地，先于4660psi預均質3次后，再于18640psi，均質20次。一種藤黃酸白蛋白納米粒凍干粉，其制備方法為，將所述的藤黃酸白蛋白納米粒加入凍干保護劑，搖勻后于-80℃冰箱冷凍24h，冷凍干燥機中冷凍干燥8h，得到藤黃酸白蛋白納米粒凍干粉。所述的一種藤黃酸白蛋白納米粒凍干粉，其特征在于：所述凍干保護劑為5％甘露醇。本發明具有以下有益效果：本發明制備的藤黃酸白蛋白納米粒，解決了藤黃酸的水溶性差的問題，提高了藥物的溶解度，增加了藤黃酸在靶區域的蓄積。改善藥物的體內分布，降低了其對正常組織的毒副作用。并且提高了藤黃酸在體內穩定性，延長藥物在體內的滯留時間，提高口服生物利用度，提高藥效。藤黃酸白蛋白納米粒基于具有的可生物降解、無毒、無抗原性、等特點，降低藥物的不良反應以及毒副作用的同時，可以發揮更好的治療效果，提高用藥的安全性及增加受試者順應性。本發明制備的藤黃酸白蛋白納米粒，處方工藝簡單，制備過程中不使用任何表面活性劑，安全性高，無刺激性，無生理毒性，具有良好的生物相容性，成本較低，易于工業化。藤黃酸白蛋白納米粒制劑的研究與開發可以拓展藤黃酸的應用領域。附圖說明圖1是實施例1高壓均質壓力對粒徑的影響。圖2是實施例2高壓均質次數對粒徑的影響。圖3是實施例6制備的藤黃酸白蛋白納米粒的粒徑分布圖。圖4是實施例6制備的藤黃酸白蛋白納米粒的透射電鏡圖。具體實施方式實施例1一種藤黃酸白蛋白納米粒具體制備方法如下：1)將0.2g牛血清白蛋白(bsa)完全溶解于20ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，得到水相。2)將20mg藤黃酸溶解于1ml氯仿(含0.1％乙醇)中，得到有機相。3)利用高速剪切機在6000r/min剪切轉速下，將有機相緩慢逐滴加入到水相中，加入完畢后將轉速升至12000r/min，繼續剪切5min，得到粗分散的初乳。4)將所得初乳通過高壓勻質機，先于4660psi預均質3次后，再分別于11650psi、13980psi、16310psi、18640psi條件下均質15次。然后于30℃旋轉蒸發5min，除去有機溶劑，制備得到藤黃酸白蛋白納米粒，采用粒度儀對所得藤黃酸白蛋白納米粒的粒徑進行測定。結果見圖1。由圖1可見，藤黃酸白蛋白納米粒的粒徑隨壓力的增大而減小，當壓力達到18640psi時，粒徑最小。因此，優選均質壓力為18640psi。實施例2一種藤黃酸白蛋白納米粒具體制備方法同實施例1，保持其它條件不變，只是改變高壓勻質次數，將步驟4)初乳先4660psi預均質3次，再用18640psi分別均質5、10、15、20次，制備得到藤黃酸白蛋白納米粒，采用粒度儀對所得制劑的粒徑進行測定。結果見圖2。由圖2可見，藤黃酸白蛋白納米粒粒徑的大小與均質次數成相關性，隨次數的增加而減小，因此，優選均質次數20次。實施例3一種藤黃酸白蛋白納米粒具體方法同實施例1，均質壓力選擇為18640psi，保持其它條件不變，只是改變水相中bsa濃度，改變步驟1)中，水相中bsa濃度分別為5，10，15，20mg/ml，制備得到藤黃酸白蛋白納米粒，測得納米粒的粒徑、包封率如下表1。表1水相中bsa濃度(mg/ml)粒徑(nm)包封率(％)5532.682.6710183.290.9815177.477.3420169.278.28由表1可見，隨水相中bsa濃度增大，藤黃酸白蛋白納米粒的粒徑逐漸減小，包封率逐漸增大，但是當bsa濃度達到15mg/ml時，包封率反而下降，因此，優選水相中bsa濃度為10mg/ml。實施例4一種藤黃酸白蛋白納米粒具體方法同實施例1，均質壓力選擇為18640psi，保持其它條件不變，只是改變bsa與藥物比例，藤黃酸與bsa的質量比分別為1:20、1:15、1:10、1:5，制備得到藤黃酸白蛋白納米粒，測得納米粒的粒徑、包封率如下表2。表2藤黃酸：bsa粒徑(nm)包封率(％)1:20552.885.321:15483.389.881:10183.290.981:5175.087.75由表2可見，藤黃酸：bsa的比例由1:20增加到1:10，包封率逐漸增大，在比例1:10時達到最大。繼續增加藥物至比例為1:5，包封率反而下降。因此，優選藥物：bsa為1：10。實施例5一種藤黃酸白蛋白納米粒具體方法同實施例1，均質壓力選擇為18640psi，保持其它條件不變，只是改變水相與油相比例，水相與油相比例分別為10:1、20:1、30:1、40:1，制備得到藤黃酸白蛋白納米粒，測得納米粒的粒徑、包封率如下表3。表3水相:油相粒徑(nm)包封率(％)10:1558.289.3720:1183.290.9830:1186.789.0540:1192.786.98由表3可見，水相:油相的比例為20:1時，包封率最大，粒徑最小。因此，優選水相:油相的比例為20:1。實施例6一種藤黃酸白蛋白納米粒(一)制備方法如下：1)將0.2gmg牛血清白蛋白(bsa)完全溶解于20ml去離子水中，攪拌使其充分溶解，得到水相。2)將20mg藤黃酸溶解于1ml氯仿(含0.1％乙醇)中，得到有機相。3)利用高速剪切機在6000r/min剪切轉速下，將有機相緩慢逐滴加入到水相中，加入完畢后將轉速升至12000r/min，繼續剪切5min，得到粗分散的初乳。4)將所得初乳通過高壓勻質機，于4660psi乳勻3次后，于18640psi條件下均質20次。然后于30℃旋轉蒸發5min，除去有機溶劑，制備得到藤黃酸白蛋白納米粒。(二)采用馬爾文nano-zs90納米粒度及zeta電位分析儀檢測藤黃酸白蛋白納米粒zeta電位、粒徑及其分布。圖3為納米粒粒徑分布圖。結果表明，制備的藤黃酸白蛋白納米粒平均粒徑為183.2nm，多分散系數(pdi)為0.182，分散均勻穩定。(三)采用透射電鏡觀察藤黃酸白蛋白納米粒形態。圖4為藤黃酸白蛋白納米粒透射電鏡圖。由圖4可見，制得的藤黃酸白蛋白納米粒粒子呈球形，大小均一，美觀，與粒徑的測定結果相一致。實施例7一種藤黃酸白蛋白納米粒凍干粉的制備將實施例6制備的藤黃酸白蛋白納米粒如表6加入凍干保護劑，搖勻后于-80℃冰箱冷凍24h，冷凍干燥機中冷凍干燥8h，得到藤黃酸白蛋白納米粒凍干粉。結果見表4。表4由表4可見，加入5％甘露醇作為凍干保護劑組粒徑和包封率無明顯變化，且外觀平整光滑，凍干前后體積幾乎無變化，且不塌陷無皺縮，色澤均勻無花斑，加入原體積的蒸餾水后片刻即可溶解；不加凍干保護劑組外觀平整，但凍干后體積有明顯皺縮，且個別有花斑，加入原體積蒸餾水后分散較慢。當前第1頁12