1.一種兩階段發(fā)酵生產(chǎn)膽鹽水解酶的方法,其特征在于,采用表達膽鹽水解酶的重組畢赤酵母為出發(fā)菌株,兩階段控制策略發(fā)酵生產(chǎn)膽鹽水解酶;所述兩階段控制策略是:菌體生長階段控制溫度為28~30℃,pH7.0~7.5,攪拌轉(zhuǎn)速500~600rpm;產(chǎn)酶階段將發(fā)酵溫度降至25~28℃,pH 6.0~6.5,攪拌轉(zhuǎn)速500~600rpm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述產(chǎn)膽鹽水解酶的畢赤酵母是以pichia pastoris GS115為宿主,以pPIC9K為載體,表達SEQ ID NO.1所示基因的重組畢赤酵母。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,所述重組畢赤酵母還具有α-MF信號肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵是以按體積比10-15%的接種量將畢赤酵母接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方包括:蛋白胨20g/L,酵母粉10g/L,7-10%甲醇,YNB 13.4g/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵前還進行活化。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述活化是挑取畢赤酵母單菌落,接種至BMGY培養(yǎng)基中,30℃,200~220r/min培養(yǎng)16-24h。
8.權(quán)利要求1所述的方法在制備含膽鹽水解酶的產(chǎn)品中的應(yīng)用。