一種脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法及沼蝦類種內雜交育種方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于水產動物繁殖和育種技術領域，涉及沼蝦類雜交育種中人工授精的關鍵步驟，特別是涉及電脈沖刺激提取沼蝦類雄蝦精莢的技術。
【背景技術】
[0002]沼蝦類是我國的重要的經濟蝦類，尤其是沼蝦中的青蝦和羅氏沼蝦，是我國重要的淡水養殖蝦類。據《中國漁業年鑒》公布，2013年我國青蝦和羅氏沼蝦養殖年產量分別為25.1和11.7萬噸.養殖省份分別達21個和16個，但隨著養殖規模的不斷擴大，集約化程度的不斷提高，均出現了嚴重品種退化現象，個體變小，病害增多，養殖效益逐年下滑。品種退化已成為沼蝦類養殖業的瓶頸，嚴重制約了其養殖業的發展，迫切需要對其進行遺傳改良，培育經濟性狀優良的新品種。雜交選育是有效的傳統育種手段。沼蝦類的雜交需要從成熟雄蝦中提取成熟精莢，最早提取精莢是采用殺蝦取精的方法，這樣一只雄蝦只能用一次。1980年Sandifer等用低壓交流電剌激提取羅氏沼蝦精莢取得成功；1997年邱高峰用4 一 6V的低壓交流電提取青蝦精莢取得成功，并將用該方法提取的精莢移植到16只已完成生殖蛻皮的青蝦雌蝦中，只有10只順利產卵，所產蝦卵受精率71 %。

【發明內容】

[0003]本發明目的在于針對現有技術的缺陷提供一種高效、可靠而對雄蝦無損傷的脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法及沼蝦類種內雜交育種方法。
[0004]本發明為實現上述目的，采用如下技術方案:
一種脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法，其特征在于包括下述步驟:
(1)將兩個脈沖電極頭緊靠兩第五步足基部后側放置，讓兩電極頭間的連線與雄蝦頭胸部和腹部連接部環線平行，使電極頭與雄蝦的腹面基本垂直，輕點脈沖電源開關I至2下，用脈沖電對雄蝦進行刺激；
(2)密切注意雄蝦第五步足基部內側排精孔，發現精莢立即用眼科攝子取下。
[0005]其進一步特征在于:所述電極頭為頭部球形的圓柱形銅線，銅線直徑Φ2mm，電極頭長17mm，后部15mm套有絕緣護套，頭部露出2mm，兩電極頭間距6mm。
[0006]優選的:所述脈沖電參數為脈沖電壓控制在30~35V，脈沖寬度30?70yS。
[0007]在水溫20°C~30°C時，再次獲得正常成熟精莢的時間間隔為48-72小時。
[0008]—種沼蝦類種內雜交育種方法，其特征在于包括下述步驟:將采用上述的脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法提取的沼蝦類精莢，快速粘貼到剛完成生殖脫殼的同種雌蝦第四、第五步足基部中央，讓雌蝦自行產卵、孵化。
[0009]本發明能快速有效和安全地將精莢從雄蝦上提取出來，其采用脈沖電提取精莢，不僅對雄蝦無損傷，而且提取成功率、移植成功率和受精率等均比普通交流電刺激有顯著提高，成熟雄蝦的精莢提取成功率93%以上，精莢移植試驗的成功率和所產蝦卵受精率均在82%以上。用該方法提取精莢，處理過的雄蝦的成活率與未經處理的雄蝦沒有差異，在水溫20°C~30°C時，間隔48-72小時再刺激，可再次獲得正常成熟精莢，且精莢提取率、精莢移植成功率和受精率與第一次均無差異。
【附圖說明】
[0010]圖1為本發明電極頭示意圖。
【具體實施方式】
[0011]本發明的具體技術方案如下:
I)電剌激專用電極頭1:如圖1所示，電極頭I用圓柱形銅線做成，銅線粗Φ2Π1Π1，銅線伸出部分17mm，絕大部分(15mm)用絕緣護套2護住，僅露出頭部2mm左右，頂端部做成球形，兩電極頭I間的距離6mm。
[0012]2)脈沖電參數確定:脈沖電發生器可自制，也可用其它細胞電融合儀或電穿孔儀等，脈沖電壓控制在30~35 V，脈沖寬度30?70yS，具體操作時可按沼蝦的品種及個體大小適當調整，一般個體越大、殼越厚，使用的脈沖電壓和脈沖寬度就越大。
[0013]3)精莢提取操作方法:左手持蝦，用左手大拇指、食指夾住蝦體頭胸部，中指、無名指和小指及掌心握住蝦體尾部，使其固定不致伸屈跳躍，右手將電剌激專用電極頭緊靠兩第五步足基部后側放置，讓兩電極頭間的連線與雄蝦頭胸部和腹部連接部環線平行，使電極頭與腹面基本垂直，一人操作時可同時用左手大拇指和中指穩住電極，輕點脈沖電源開關I至2下，同時密切注意雄蝦第五步足基部內側排精孔，發現精莢立即用眼科攝子取下。
[0014]4)沼蝦類種內雜交育種方法:將采用上述的脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法提取的沼蝦類精莢，快速粘貼到剛完成生殖脫殼的同種雌蝦第四、第五步足基部中央(粘貼前用吸水紙吸干水)，讓雌蝦自行產卵、孵化。統計精莢移植成功率和受精率。
[0015]實施例1:
青蝦精莢提取和移植:使用本發明設計的電極頭，使用30V脈沖電壓，脈沖寬度35yS，精莢提取率96%，精莢移植到雌青蝦體上的成功率87%，受精率92%。
[0016]實施例2:
海南沼蝦精莢提取和移植:使用本發明設計的電極頭，使用31V脈沖電壓，脈沖寬度40μS，精莢提取率94%，精莢移植到雌海南沼蝦體上的成功率85%，受精率90.5%。
[0017]實施例3:
羅氏沼蝦精莢提取和移植:使用本發明設計的電極頭，使用34V脈沖電壓，脈沖寬度60μS，精莢提取率93%，精莢移植到雌羅氏沼蝦體上的成功率83%，受精率89%。
[0018]以上實施例僅說明本發明建立的沼蝦精莢提取方法和沼蝦類種內雜交育種方法，但本發明并不僅限于此。值得注意的是，通過電脈沖刺激提取精莢的方法均在本發明所要求的保護范圍之內，這里不再對其它的具體實施例進行一一列舉。
【主權項】
1.一種脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法，其特征在于包括下述步驟: (1)將兩個脈沖電極頭緊靠兩第五步足基部后側放置，讓兩電極頭間的連線與雄蝦頭胸部和腹部連接部環線平行，使電極頭與雄蝦的腹面基本垂直，輕點脈沖電源開關I至2下，用脈沖電對雄蝦進行刺激； (2)密切注意雄蝦第五步足基部內側排精孔，發現精莢立即用眼科攝子取下。2.根據權利要求1所述的脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法，其特征在于:所述電極頭為頭部球形的圓柱形銅線，銅線直徑Φ 2mm，電極頭長17mm，后部15mm套有絕緣護套，頭部露出2mm，兩電極頭間距6mm。3.根據權利要求1或2所述的脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法，其特征在于:所述脈沖電參數為脈沖電壓控制在30?35 V，脈沖寬度30?70yS。4.根據權利要求3所述的脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法，其特征在于:在水溫20°C?30°C時，再次獲得正常成熟精莢的時間間隔為48-72小時。5.一種沼蝦類種內雜交育種方法，其特征在于包括下述步驟:將采用權利要求1-3任一項所述的脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法提取的沼蝦類精莢，快速粘貼到剛完成生殖脫殼的同種雌蝦第四、第五步足基部中央，讓雌蝦自行產卵、孵化。
【專利摘要】本發明公布了一種脈沖電擊法提取沼蝦類精莢的方法及沼蝦類種內雜交育種方法，將兩個脈沖電極頭緊靠兩第五步足基部后側放置，讓兩電極頭間的連線與雄蝦頭胸部和腹部連接部環線平行，使電極頭與雄蝦的腹面基本垂直，輕點脈沖電源開關1至2下，用脈沖電對雄蝦進行刺激；密切注意雄蝦第五步足基部內側排精孔，發現精莢立即用眼科攝子取下，快速粘貼到剛完成生殖脫殼的同種雌蝦第四、五步足基部中間，讓雌蝦自行產卵、孵化。本發明能快速有效和安全地將將精莢從雄蝦上提取出來，其采用脈沖電提取精莢，不僅對雄蝦無損傷，而且提取成功率、移植成功率和受精率等均比普通交流電刺激有顯著提高。
【IPC分類】A01K61/00
【公開號】CN105532537
【申請號】CN201610005939
【發明人】龔永生, 傅洪拓, 蔣速飛, 熊貽偉, 喬慧, 金舒博, 張文宜
【申請人】中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2016年1月5日