專利名稱：珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法
技術領域：
本發明涉及植物培植技術領域，具體地說是珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法。
背景技術：
蘭花雜交種子很小，內含一些發育不完全的胚，無胚乳，自然狀態下很難萌發。雖有人作過蘭屬(Cmbidium)植物的育種和種子的萌發研究，但以上雜交蘭屬植物的雜交育種和種子無菌萌發未見報道。

發明內容
本發明的目的是提供一種為蘭花育種和產業化生產奠定重要的技術基礎的珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法。
本發明對四種蘭花種子進行了無菌萌發研究，成功地培育出大量試管苗。
沉香虎頭蘭變種(Cmbidium tracyanum L castle var huang su)、大雪蘭(C.mstersii Griff)及黃蟬蘭(C.iridioides)是蘭科蘭屬中不同種植物，以這三種蘭花為親本培育雜交種蘭花，具體的育種與繁殖方法為1、材料來源將采得的蘭株在資源圃內進行雜交育種和果實培育(現有技術)，待培育至蘭花果實到九成熟，果皮略顯黃色時摘取。
2、培養方法(1)雜交育種1)建立蘭花資源圃，資源圃內的環境能人工調控，創造最適合蘭花生長發育的最佳環境；2)這幾種蘭花的自然花期接近一致，待父母本花序基部1-2個花蕾開放時進行育種操作；3)育種操作洗盡手和鑷子，用手輕輕摘除父母本藥帽(花藥頂端帽狀物)，用鑷子摘下父本花粉塊，送入母本合蕊柱的腔(柱頭)內即可；4)加強溫、光和肥水管理，注意防治病蟲危害，直到蘭果發育成熟。
(2)種子無菌萌發1)外植體處理90％成熟度果實經75％酒精消毒40秒后，轉入1％升汞表面消毒8～12分鐘，用無菌水沖洗3～4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子后，以少量無菌水潤洗5次，然后0.1mol/L KOH(氫氧化鉀)溶液預處理8～12分鐘，再用無菌水沖洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10～20分鐘，再用無菌水沖洗5次后接種到固體培養基中；2)種子萌發經過多種配方試驗比較，篩選出改良MS(即1/2MS)為較適宜的種子萌發基本培，在改良MS基本培養基中加入生長調節劑，即1/26-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L培養基(6-BA即6-芐基腺嘌呤，為細胞分裂素；NAA即奈乙酸，為生長素)；3)培養條件在整個培養過程中，種子無菌萌發采用暗箱培養，圓球莖成苗的培養、增殖和生根培養均采用光照培養，光照1800～2500勒克斯(lx)，每天光照12小時；溫度24±2℃，培養基pH5.4，瓊脂7g/L，接種3～6個月后發芽率達90％以上；4)種子萌發長出幼根時，轉接到改良MS+KT1.5～2.5mgL-1+NAA0.2～0.5mg.L-1培養基中培養(KT即6-糠氨基嘌呤或糠基腺嘌呤，為激動素)，4～6個月后逐漸成為具有根系并可煉苗和移栽的試管苗。
本發明在實驗過程中得出的結論1、引種馴化必須引種馴化野生蘭花和建立種質資源圃，調控環境培育好父母本植株以便進行雜交育種。
2、花期調控用設施按蘭花生理生態要求條件下的環境調控使父母本花期一致。
3、根據花器官特點正確進行雜交技術操作。
4、不同培養基對雜交種子萌發的影響將種子分別接種在多種改良MS培養基上，從播種到發芽形成圓球莖需3～6個月，經觀察改良的培養基更有利于雜交種子萌發。
5、不同激素對圓球莖和根狀莖生長的影響由于蘭花種子非常細小，播種時有些種子聚集在一起，致使長出的圓球莖或根狀莖較擁擠，因此對圓球莖或根狀莖進行轉接。將圓球莖或根狀莖從原來母瓶中取出，轉接到11個不同激素濃度的培養基中作對比試驗，且培養基中加入了80g/L香蕉泥。經過21天培養觀察時，培養基中均觀察到圓球莖或根狀莖上已全長出新綠葉，一般為2～3片，球狀莖向下的部分有些已長出根，植株3～5cm。研究表明，用改良的培養基加激動素和生長素培養圓球莖生長效果最佳。
本發明從實驗中找到了適宜四種雜交蘭花的育種與培養和快速增殖方法，為這類蘭花的雜交育種培育了創新材料和奠定了技術基礎。
經過多年努力，突破了種種技術難關，已培育出COt-1；COt-2；COi-1；COi-2四個雜交種(自命名)，可以進行試管繁殖。
本發明與現有技術比較具有的優點蘭花的雜交育種已有一些報道，但采用沉香虎頭蘭變種(Cmbidiumtracyanum L castle var huang su)、大雪蘭(C.mastersii Griff)及黃蟬蘭(C.iridioides)三種蘭花作親本進行雜交育種，突破一系列技術難關培育新品種還未見報道。此種方法不但培育出了新品種，還能進行快速繁殖，以滿足“看葉勝看花”的產業化需求。
具體實施例方式
實施例1COt-1的育種與繁殖1、材料來源兩種親本蘭株沉香虎頭蘭變種(Cmbidium tracyanum Lcastle var huang su及大雪蘭(C.mastersii Griff)采自云南山區，沉香虎頭蘭變種為母本，大雪蘭為父本；2、培養方法(1)雜交育種1)建立蘭花資源圃，資源圃內的環境能人工調控，創造最適合蘭花生長發育的最佳環境；2)這幾種蘭花的自然花期接近一致，待父母本花序基部1～2個花蕾開放時進行育種操作；3)育種操作洗盡手和鑷子，用手輕輕摘除父母本藥帽(花藥頂端帽狀物)，用鑷子摘下父本花粉塊，送入母本合蕊柱的腔(柱頭)內即可；4)加強溫、光和肥水管理，注意防治病蟲危害，直到蘭花果實發育到九成熟，果皮略顯黃色時摘取；(2)種子無菌萌發1)外植體處理90％成熟度果實經75％酒精消毒40秒后，轉入1％升汞表面消毒8～12分鐘，用無菌水沖洗3～4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子后，以少量無菌水潤洗5次，然后0.1mol/L KOH(氫氧化鉀)溶液預處理8～12分鐘，再用無菌水沖洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10～20分鐘，再用無菌水沖洗5次后接種到固體培養基中；2)種子萌發培養基篩選出改良MS(即1/2MS)為較適宜的基本培養基，加生長調節劑的配方為1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L(細胞分裂素及生長素)；3)培養條件在整個培養過程中，除了種子無菌萌發采用暗箱培養外，圓球莖成苗的培養，增殖和生根培養均采用光照培養，溫度25±2℃，光照1800～2500勒克斯(lx)，每天光照12小時，培養基pH5.4；瓊脂7g/L，接種3個月后發芽；4)種子萌發后先長出芽，隨后長出幼根，轉接到1/2MS+KT2.0mgL-1+NAA0.5mg.L-1培養基中培養，4～6個月后逐漸成為具有根系并可煉苗和移栽的試管苗；這種技術適用于本發明的另三種雜交種實施例2COt-2的育種與繁殖父本沉香虎頭蘭變種(Cmbidium tracyanum L castle var huang su)、母本大雪蘭(C.mastersii Griff))，(1)雜交育種與實施例1相同；(2)種子無菌萌發1)外植體處理與實施例1相同；2)種子萌發培養基篩選出改良MS(即1/2MS)為較適宜的基本培養基，加生長調節劑的配方為1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L(細胞分裂素及生長素)；3)培養條件與實施例1相同；
4)種子萌發后先長出芽，隨后長出幼根，轉接到改良MS+KT2.5mgL-1+NAA0.2mg.L-1培養基中培養，4～6個月后逐漸成為具有根系并可煉苗和移栽的試管苗。
實施例3COi-1的育種與繁殖父本大雪蘭(C.mastersii Griff)，母本黃蟬蘭(C.iridioides)，育種與繁殖方法與實施例1或實施例2相同。
實施例4COi-2的育種與繁殖父本黃蟬蘭(C.iridioides)，母本大雪蘭(C.mastersii Griff)，育種與繁殖方法與實施例1或實施例2相同。
權利要求
1.一種珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法，其特征在于按以下步驟進行(1)材料將采得的沉香虎頭蘭變種、大雪蘭及黃蟬蘭蘭株在資源圃內進行雜交育種和果實培育，待培育至蘭花果實到九成熟，果皮略顯黃色時摘取；(2)培養方法1)雜交育種；2)種子無菌萌發①外植體處理90％成熟度果實經75％酒精消毒40秒后，轉入1％升汞表面消毒8～12分鐘，用無菌水沖洗3～4次，在無菌室取出種子，用紗布包好種子后，以少量無菌水潤洗5次，然后0.1mol/L KOH溶液預處理8～12分鐘，再用無菌水沖洗3次，在飽和漂白粉上清液中消毒10～20分鐘，再用無菌水沖洗5次后接種到固體培養基中；②種子萌發篩選出改良MS基本培養基，加生長調節劑后為1/2MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L培養基；③培養條件在整個培養過程中，種子無菌萌發采用暗箱培養，圓球莖成苗的培養、增殖和生根培養均采用光照培養，光照1800～2500勒克斯，每天光照12小時，溫度24±2℃，培養基pH5.4，瓊脂7g/L，接種3～6個月后發芽率達90％以上；④種子萌發長出幼根時，轉接到1/2MS+KT1.5～2.5mgL-1+NAA0.2～0.5mg.L-1培養基中培養，4～6個月后逐漸成為具有根系并可煉苗和移栽的試管苗。
全文摘要
本發明是一種珍貴雜交蘭花的育種與繁殖方法。其特征在于將采得的沉香虎頭蘭變種(Cmbidium tracyanum L castle var huang su)、大雪蘭(C.mastersii Griff)及黃蟬蘭(C. iridioides)蘭株在資源圃內進行雜交育種和果實培育，經雜交育、種子無菌萌發種、外植體處理、種子萌發、種子萌發長出幼根轉接培養等得到。采用沉香虎頭蘭變種、大雪蘭及黃蟬蘭三種蘭花作親本進行雜交育種，突破一系列技術難關培育新品種還未見報道。此種方法不但培育出了新品種，還能進行快速繁殖，以滿足“看葉勝看花”的產業化需求。
文檔編號A01H1/02GK1729756SQ20051001076
公開日2006年2月8日 申請日期2005年4月22日 優先權日2005年4月22日
發明者李枝林, 余朝秀, 王卜瓊, 王玉英, 黃麗萍 申請人:云南農業大學