一種檢測志賀氏菌的核酸側(cè)向流試紙條的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了食源性病原微生物福氏志賀氏菌(Shigellaflexneri)的快速核酸試紙條檢測試劑盒及其應(yīng)用方法，屬于分子生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明將核酸檢測中的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的高靈敏度、高特異性方法與免疫學(xué)檢測中的免疫膠體金快速檢測技術(shù)相結(jié)合，通過設(shè)計(jì)獨(dú)特的引物，對(duì)引物加以標(biāo)記，對(duì)提取的靶DNA進(jìn)行特異性擴(kuò)增以及擴(kuò)增產(chǎn)物在展開液中與試紙條條上固定的金標(biāo)記抗體結(jié)合而形成穩(wěn)定、可見的檢測帶及質(zhì)控帶，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)主要食源性病原微生物快速、準(zhǔn)確的檢測。
【專利說明】—種檢測志賀氏菌的核酸側(cè)向流試紙條的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域，涉及食品及加工原料中福氏志賀氏菌的核酸擴(kuò)增產(chǎn)物側(cè)向流免疫膠體金試紙條試劑盒的制備和應(yīng)用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]為有效控制食品生產(chǎn)和進(jìn)出口貿(mào)易中因致病性微生物引起的食源性疾病，保證食品領(lǐng)域的公共安全，需要開發(fā)靈敏、便捷、準(zhǔn)確的食源性病原微生物檢測方法。在食源性疾病危險(xiǎn)因素中，在我國流行的食源性疾病中，微生物性食物中毒位居第一，而在食源性病原微生物中其中最典型的致病菌是志賀氏菌、阪崎腸桿菌、金黃色葡萄球、單增李斯特菌、大腸桿菌0157:H7等病原菌。志賀氏菌是革蘭氏陽性菌，廣泛分布于自然界或寄生于人體及動(dòng)物體表和體內(nèi)，金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)，?？梢鹌つw、組織和器官的炎癥，產(chǎn)生的腸毒素可污染食物導(dǎo)致食物中毒。
[0003]傳統(tǒng)的食品生產(chǎn)、質(zhì)量監(jiān)督和進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫中，常規(guī)的細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定方法，檢驗(yàn)步驟繁瑣，檢驗(yàn)周期長，對(duì)有些細(xì)菌無法給出快速和準(zhǔn)確的鑒定，不能完全滿足質(zhì)量控制及進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫的要求?；诤怂釘U(kuò)增的方法檢測對(duì)象是來自病原微生物的DNA，經(jīng)特異性擴(kuò)增后進(jìn)行產(chǎn)物鑒定，這類方法因靈敏度高，特異性好，耗時(shí)少而發(fā)展迅速，主要的方法包括普通/突光PCR和核酸環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)(發(fā)明專利:快速檢測志賀氏菌的LAMP試劑盒，
【發(fā)明者】鄭文杰, 趙良娟, 張宏偉, 劉培, 趙宏, 奚文輝, 杜敬, 韓宇寧, 尹長城, 劉斯奇 申請(qǐng)人:天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測中心