本發(fā)明涉及化學檢測，具體為涉及一種堿性磷酸酶發(fā)光底物，包含該底物的組合物和試劑盒，該堿性磷酸酶發(fā)光底物的制備方法和應用。

背景技術：

1、化學發(fā)光(chemiiuminescence)是在化學反應過程中(主要為氧化還原反應)發(fā)出可見光的現(xiàn)象。早在19世紀70年代，radzisewski(1877)等發(fā)現(xiàn)咯粉堿在堿性介質(zhì)中與過氧化氫等進行氧化還原時，有光子產(chǎn)生(發(fā)綠光)。albrecht(1928)證明了魯米諾在堿性介質(zhì)中具有發(fā)光作用。glue和petsh(1?935)第一個報告了光澤精在堿性條件下與過氧化氫反應產(chǎn)生化學發(fā)光。

2、化學發(fā)光反應是由兩個關鍵步驟組成：激發(fā)和發(fā)射。許多化學反應進行時能釋放足夠的自由能而把參加反應的物質(zhì)之一激發(fā)到能發(fā)射光的電子激發(fā)態(tài)，生成一種激發(fā)態(tài)產(chǎn)物(c?)，在它回到基態(tài)時，剩余能量轉變成光子能量(h?)產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象，即a+b—c?，然后c一c+h，其中?表示c處于單線激發(fā)態(tài)。化學發(fā)光的光譜與c的熒光相一致。

3、隨著化學發(fā)光物質(zhì)合成技術的進步，化學發(fā)光在生物醫(yī)學及其它領域的應用越來越廣泛，將化學發(fā)光與免疫反應結合起來建立的化學發(fā)光免疫測定法和化學發(fā)光標記是繼熒光標記，放射性核素標記，酶標記三大標記技術之后，發(fā)展起來的最新檢測技術。用化學發(fā)光法、化學發(fā)光免疫測定法可檢測多種物質(zhì)，其檢測極限達到10-19mol。

4、堿性磷酸酶發(fā)光體系，是應用比較廣泛的一類。堿性磷酸酶是一種能夠?qū)孜锶チ姿峄拿福赐ㄟ^水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基因除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，而該脫去磷酸基團的過程被稱為去磷酸化或脫磷酸化。堿性磷酸酶發(fā)光底物在堿性磷酸酶作用下能夠迅速釋放出光子，在特定的堿性磷酸酶濃度范圍內(nèi)，釋放的光子數(shù)量與溶液中堿性磷酸酶的濃度成正比。

5、（4-氯苯巰基）（10-甲基-9,10-二氫化吖啶亞甲基）磷酸二鈉鹽，簡稱aps-5，是一種常用的堿性磷酸酶發(fā)光底物。如cn117186878?a公開了一種堿性磷酸酶的酶促化學發(fā)光底物液及其制備方法與應用，該酶促化學發(fā)光底物液包括十三烷基硫酸鈉、氯化鋅、硫代硫酸鈉、9-(4-氯苯巰基)(10-甲基-9,10-二氫化吖啶亞甲基)磷酸二鈉鹽和光澤精。cn111077140a公開了一種酶促化學發(fā)光底物液配制方法以及加注裝置，其中酶促化學發(fā)光底物液包括如下組分：發(fā)光底物、發(fā)光增強劑、本底抑制劑、表面活性劑、酶穩(wěn)定劑、防腐劑以及緩沖基質(zhì)；發(fā)光底物為(4-氯苯巰基)(10-甲基-9,10-二氫化吖啶亞甲基)磷酸二鈉鹽。cn109490281a公開了一種化學發(fā)光底物液，該化學發(fā)光底物液包括如下組分：150mg/l的(4-氯苯巰基)(10-甲基-9,10-二氫化吖啶亞甲基)磷酸二鈉鹽、10mmol/l-500mmol/l的緩沖基質(zhì)、0.1mg/l-20mg/l的熒光增強物質(zhì)、10mg/l-5000mg/l的本底發(fā)光抑制物質(zhì)及0.1g/l-10g/l的表面活性劑。aps-5具有檢測靈敏度高，反應時間短的優(yōu)點。但是，aps-5不穩(wěn)定，需要在-20℃條件下保存，給運輸和使用帶來不便。

技術實現(xiàn)思路

1、有鑒于現(xiàn)有技術的上述缺陷，本發(fā)明提供一種堿性磷酸酶發(fā)光底物，將兩個aps-5集成于同一結構中，所獲得的新化合物結構穩(wěn)定，并且能夠增加發(fā)光強度。為此，本發(fā)明還提供了包括該堿性磷酸酶發(fā)光底物的組合物及包含該底物的化學發(fā)光檢測試劑盒；另外，本發(fā)明還提供了該堿性磷酸酶發(fā)光底物的制備方法。

2、本發(fā)明的第一方面，提供一種堿性磷酸酶發(fā)光底物，結構式如下：

3、

4、其中，n1、n2選自1-10的整數(shù)。

5、本發(fā)明的第二方面，提供一種堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物，該組合物包括上述的堿性磷酸酶發(fā)光底物。

6、本發(fā)明的第三方面，提供一種堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物，包括0.01mol/l-0.5mol/l?的tris緩沖液、0.05%-1%?的吐溫20、10mg/l?-100mg/l的亞硫酸鈉、5mg/l-10mg/l?光澤精和100mg/l-300mg/l上述的堿性磷酸酶發(fā)光底物，上述百分數(shù)為質(zhì)量百分數(shù)。

7、作為優(yōu)選的實施例，該堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物包括0.2mol/l?的tris緩沖液、0.1%?的吐溫20、10mg/l?的亞硫酸鈉、5mg/l?光澤精和100mg/l?上述的堿性磷酸酶發(fā)光底物，上述百分數(shù)為質(zhì)量百分數(shù)。

8、本發(fā)明的第四方面，提供一種化學發(fā)光檢測試劑盒，包括上述的堿性磷酸酶發(fā)光底物或上述的堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物。

9、本發(fā)明的第五方面，提供上述堿性磷酸酶發(fā)光底物的制備方法，包括如下步驟：

10、

11、s1、化合物a在催化劑作用下，與丁二酰亞胺三氟乙酸反應，生成化合物b；

12、s2、將化合物c溶解于溶劑后，與化合物d反應，生成化合物e；

13、s3、將化合物b與化合物e在氮氣保護下反應，生成化合物f；

14、s4、向化合物f中加入氫氧化鈉，得到化合物g；

15、其中，n1、n2選自1-10的整數(shù)。

16、作為優(yōu)選的實施例，上述s1步驟滿足以下條件中的一種或多種：

17、（1）所述化合物a與丁二酰亞胺三氟乙酸的摩爾比為1:1.2~1:1.5；

18、（2）所述催化劑選自吡啶；

19、（3）所述化合物a與催化劑的摩爾比為1:0.1~1:0.2。

20、作為優(yōu)選的實施例，上述s2步驟滿足以下條件中的一種或多種：

21、（1）所述化合物c與化合物d的摩爾比為1:1.5~1:2；

22、（2）所述溶劑選自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲亞砜或四氫呋喃；

23、（3）反應溫度為-10~-5℃。

24、作為優(yōu)選的實施例，上述s3步驟中化合物b與化合物e的摩爾比為1:2.5~1:3。

25、本發(fā)明的第六方面，提供上述的堿性磷酸酶發(fā)光底物或堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物或化學發(fā)光檢測試劑盒在制備檢測促甲狀腺激素含量、癌胚抗原含量、甲胎蛋白含量的產(chǎn)品中的應用。

26、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

27、（1）本發(fā)明的堿性磷酸酶發(fā)光底物結構穩(wěn)定，可保存于4℃左右環(huán)境，相對于aps-5必須于-20℃下保存，保存條件更加溫和，為運輸及使用提供了便利。

28、（2）本發(fā)明的堿性磷酸酶發(fā)光底物，能夠提高產(chǎn)生光子的效率，具有增強化學發(fā)光信號作用，提高了檢測的準確性和靈敏度。

29、（3）本發(fā)明制備堿性磷酸酶發(fā)光底物的方法，原料易得、無需苛刻反應條件，降低了生產(chǎn)成本。

技術特征：

1.一種堿性磷酸酶發(fā)光底物，其特征在于，結構式如下：

2.一種堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物，其特征在于，包括權利要求1所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物。

3.一種堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物，其特征在于，包括0.01mol/l-0.5mol/l?的tris緩沖液、0.05%-1%?的吐溫20、10mg/l?-100mg/l的亞硫酸鈉、5mg/l-10mg/l?光澤精和100mg/l-300mg/l權利要求1所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物，上述百分數(shù)為質(zhì)量百分數(shù)。

4.根據(jù)權利要求3所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物，其特征在于，該組合物包括0.2mol/l?的tris緩沖液、0.1%?的吐溫20、10mg/l?的亞硫酸鈉、5mg/l?光澤精和100mg/l的堿性磷酸酶發(fā)光底物，上述百分數(shù)為質(zhì)量百分數(shù)。

5.一種化學發(fā)光檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物或權利要求2-4任一項所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物。

6.一種權利要求1所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

7.根據(jù)權利要求6所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物的制備方法，其特征在于，所述s1步驟滿足以下條件中的一種或多種：

8.根據(jù)權利要求6所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物的制備方法，其特征在于，所述s2步驟滿足以下條件中的一種或多種：

9.根據(jù)權利要求6所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物的制備方法，其特征在于，所述s3步驟中化合物b與化合物e的摩爾比為1:2.5~1:3。

10.權利要求1所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物或權利要求2-4任一項所述的堿性磷酸酶發(fā)光底物組合物或權利要求5所述的化學發(fā)光檢測試劑盒在制備檢測促甲狀腺激素含量、癌胚抗原含量、甲胎蛋白含量的產(chǎn)品中的應用。

技術總結
本發(fā)明公開了一種堿性磷酸酶發(fā)光底物、其組合物、試劑盒、制備方法和應用，該堿性磷酸酶發(fā)光底物的結構式如下：。本發(fā)明堿性磷酸酶發(fā)光底物結構穩(wěn)定，適合保存于4℃左右環(huán)境，相對于APS?5必須?20℃下保存，保存條件更加溫和，為使用提供了便利。

技術研發(fā)人員：李學軍,石崗,孔令鈺,張景,白競,閆森森
受保護的技術使用者：江蘇康普生物醫(yī)藥科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/4/28