專利名稱：一種楊樹組培苗生根培養方法
技術領域：
本發明涉及一種楊樹的生根方法,尤其涉及一種楊樹組培苗生根培養方法，屬于植物培養技術領域。
背景技術：
楊樹是世界范圍內廣泛分布的ー種重要樹種，有重要的經濟、生態和社會效益。楊樹具有生長迅速、輪伐期短、適應性強、易繁殖等特點，各地廣泛用作用材林、防護林和四旁緑化樹種。楊樹組織培養的意義主要表現在以下幾個方面首先，難生根的樹種能夠通過組織培養進行大量繁殖 。例如白楊派樹種，因根蘗繁殖率低、扦插生根難不能使用扦插進行大量繁殖，但通過組織培養可以在短期內獲得大量組培苗；其次，保存種質資源及選育楊樹優良品種。楊樹優良種質資源可通過愈傷組織及組培苗的形式進行長期保存；在組織培養的再生植株中選擇突變體及通過體細胞雜交選擇新品種都是楊樹良種選育的有效途徑；再次，楊樹組織培養體系可作為ー種模式體系，來分析種質保存、體細胞變異和基因轉移等方面存在的問題；最后，楊樹是木本植物的模式物種，對研究外源基因轉化木本植物具有重要的意義。分布廣泛、容易進行離體實驗和受土壤農桿菌的侵染使楊屬植物成為轉基因樹木研究的基礎試驗材料。在已有多個楊樹品種成功的再生研究報道中，其生根培養過程都是在生根培養基中進行；生根培養基需要添加瓊脂起到支撐作用，其中添加蔗糖作為碳源，1/2MS或MS提供多種元素需求。由于以糖類物質做為培養基，易滋生雜菌，另外基質透氣性不太好，從而影響到生根菌繼代培養和移栽的成功率。

發明內容
本發明的目的在于提供一種楊樹組培苗生根培養方法，以提高生根率和移栽的成功率。為了實現上述目的，本發明的技術方案采用了一種楊樹組培苗生根培養方法，具體包括以下步驟以蛭石為基質，自來水漂洗2次后晾干備用，在玻璃或塑料透光培養瓶中鋪蛭石厚度2-3cm，添加蛭石1-2倍質量的營養液，選擇3-5cm高狀態較一致的抽莖苗用以生根，每種培養基質處理接種50株，單株單瓶培養，30d后統計各處理的生根率；無菌苗生長至高5-8cm時，于日光溫室中，用鑷子連同根部粘連的部分蛭石取出小苗，移入含水量70%左右的營養土中，壓緊營養土，噴水，蓋塑料薄膜保濕7d，后逐漸掀開薄膜，20d后統計生根苗移栽成活結果。所述的蛭石粒徑為l-3mm。所述的抽莖苗為歐美楊108 (Populus X euramercana cv. ‘Guariento’)，歐美楊 2OOl (PopulusXeuramercana cv. ‘2001，),歐美楊 IO7 (PopulusXeuramercanacv. ‘Neva’)，由河南科技大學林學院實驗中心保存；取三個楊樹品種的幼嫩新枝，以莖段、葉柄和葉片為外植體，分別剪成O. 5-1. 5cm的短段，嫩葉橫向深達主脈剪3道傷ロ，接種在叢生芽誘導培養基上，經過叢生芽的誘導、叢生芽的抽莖生長及壯苗階段，得到高2-5cm的健康叢生芽，培養溫度24-26°C，光照時間16h · cT1，光照度20001x。所述的叢生芽誘導培養基為MS+TDZ O. 05mg.じ1+6-BA O. 05mg.じ1+NAAO. 05mg.じ1。所述的營養液為MS或1/2MS。所述的營養液中還添加植物生長調節物質萘こ酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)、吲哚こ酸(IAA)O. 01-0. 05mg. L-I, pH 值為 6. 5。
所述MS 營養液配方NH4N031650mg.じ1、KN031900mg.じ1、MgSO4. 7H20 370mg.じ1、KH2PO4170mg.じ1、CaCl2. 2H20 440mg.じ1、Η3Β036· 2mg.じ1、MnSO4. 4H20 22. 3mg.じ1、CoCl2. 6H200. 025mg.じ1、CuSO4. 5H20 0. 025mg.じ1、ZnSO4. 7H20 8. 6mg.じ1、Na2MoO4. 2H20 0. 25mg.じ1、KI0. 83mg.じ1、FeSO4. 7H20 27. 8mg.じ1、Na2EDTA. 2H20 37. 3mg.じ1、維生素 BI 0. lmg.じ1、維生素B60. 5mg. Lベ、煙酸O. 5mg. Lベ、肌酉享IOOmg.じ1、甘氨酸2mg.じ1。所述的營養土為泥炭土和蛭石，兩者的重量比為泥炭土蛭石=3 I。采用本發明的方法，以三種黑楊派楊樹組培苗的生長為例，三者都可以健康生根生長成活生根率都在70%以上，歐美楊107 (Populus X euramercana cv. ‘Neva’)楊生根率最高達 100%，歐美楊 108 (Populus X euramercana cv. ‘Guariento’)楊生根率最高達95%,歐美楊 2001 (PopulusXeuramercana cv. ‘2001’)楊生根率最高達 90%;另外，采用本發明的營養土(泥炭土蛭石為3 I)后能夠健康生長，20d后生根苗移栽成活率都在95%以上，107楊、108楊、2001楊移栽成活率分別為98%。本發明的生根方法，以蛭石提供支撐作用，僅添加1/2MS或MS，與常規生根培養基相比，配制方便，降低了成本，由于不含糖類物質，雜菌不宜滋生，基質透氣性能優良，生根健康，生根苗繼代培養或移栽成功率高。


圖I為三種黑楊派楊樹不定芽的生根圖片；圖Ia為107楊生根無菌苗的生長情況；圖Ib為108楊生根無菌苗的生長情況；圖Ic為2001楊生根無菌苗的生長情況；圖2為三種黑楊派楊樹無菌苗的移栽圖片；圖2a為107楊移栽苗；圖2b為108楊移栽苗；圖2c為2001楊移栽苗。
具體實施例方式本發明的方法如下材料與方法I. I材料與培養條件I. 2方法以市售粒徑l_3mm的蛭石為基質，自來水漂洗2次后晾干備用，在玻璃或塑料透光培養瓶中鋪蛭石厚度2-3cm，添加蛭石1-2倍質量的營養液，營養液為MS或1/2MS，營養液可添加植物生長調節物質萘こ酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)、吲哚こ酸(IAA) O. 01-0. 05mg.じ1，pH值為6. 5。選擇3-5cm高狀態較一致的抽莖苗用以生根，每種培養基質處理接種50株，單株單瓶培養，30d后統計各處理的生根率。無菌苗生長至高7cm左右時，于日光溫室中，用鑷子連同根部粘連的部分蛭石取出小苗，移入含水量70%左右的營養土(泥炭土蛭石為3 I)中，稍壓緊營養土，噴少量水，蓋塑料薄膜保濕7d，后逐漸掀開薄膜，20d后統計生根苗移栽成活結果。以蛭石為基質，自來水漂洗2次后晾干備用，在玻璃或塑料透光培養瓶中鋪蛭石厚度2-3cm，添加蛭石1-2倍質量的營養液，選擇3-5cm高狀態較一致的抽莖苗用以生根，每種培養基質處理接種50株，單株單瓶培養，30d后統計各處理的生根率；無菌苗生長至高7cm左右時，于日光溫室中，用鑷子連同根部粘連的部分蛭石取出小苗，移入含水量70%左右的營養土中，壓緊營養土，噴水，蓋塑料薄膜保濕7d，后逐漸掀開薄膜，20d后統計生根苗移栽成活結果。其中，蛭石粒徑為1-3_。 所述的叢生芽誘導培養基為MS+TDZ O. 05mg.じ1+6-BA O. 05mg.じ1+NAA O. 05mg.じ1。營養液為MS或1/2MS，營養液中還添加植物生長調節物質萘こ酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)、吲哚こ酸(IAA)O. 01-0. 05mg.じ1，pH 值為 6.5。MS 營養液配方NH4N031650mg.じ1、KN031900mg.じ1、MgSO4. 7H20 370mg.じ1、KH2PO4170mg.じ1、CaCl2. 2H20440mg.じ1、Η3Β036 · 2mg.じ1、MnSO4. 4H20 22. 3mg.じ1、CoCl2. 6H20 0. 025mg.じ1、CuSO4. 5H20 0. 025mg.じ1、ZnSO4. 7H208. 6mg. L \ Na2MoO4. 2H20 0. 25mg. L \ KI 0. 83mg. L \ FeSO4. 7H20 27. 8mg. L \ Na2EDTA. 2H2037. 3mg.じ1、維生素BI 0. lmg.じ1、維生素B60. 5mg.じ1、煙酸O. 5mg. Lベ、肌酉享IOOmg.じ1、甘氨酸2mg.じ1 ο營養土為泥炭土和蛭石，兩者的體積比為泥炭土蛭石=3 I。2結果與分析在本生根培養條件下，供試三種黑楊派楊樹組培苗都可以健康生根生長成活(圖I)，生根率都在70%以上，107楊生根率最高達100%，108楊生根率最高達95%，2001楊生根率最高達90%。107楊在營養液為MS時，生根率70% ;植物生長調節物質對試管苗生根有促進作用，添加IAA O. 05g.じ1后，營養液為1/2MS時比MS生根率高，降低培養基質中離子濃度有利生根；在培養液1/2MS+IAA O. 02g.じ1+IBA O. 02g.じ1時生根率最高，生根率達100% (表I)。表1107楊不定芽生根率
權利要求
1.一種楊樹組培苗生根培養方法，其特征在于包括以下步驟以蛭石為基質，自來水漂洗2次后晾干備用，在透光培養瓶中鋪蛭石厚度2-3cm，添加蛭石1-2倍質量的營養液，選擇3-5cm高狀態較一致的抽莖苗用以生根，每種培養基質處理接種50株，單株單瓶培養，30d后統計各處理的生根率；無菌苗生長至高5-8cm時，于日光溫室中，連同根部粘連的部分蛭石取出小苗，移入含水量60% -75%的營養土中，壓緊營養土，噴水，蓋塑料薄膜保濕7d，后逐漸掀開薄膜，20d后觀察生根。
2.根據權利要求I所述的楊樹組培苗生根培養方法，其特征在于所述的蛭石粒徑為l-3mm。
3.根據權利要求I所述的楊樹組培苗生根培養方法，其特征在于所述的抽莖苗為歐美楊 108 (Populus X euramericana cv. ‘Guariento’)，歐美楊2001 (Populus X euramericana cv. ‘2001，)，歐美楊 107 (PopulusXeuramericanacv. ‘Neva’)，由河南科技大學林學院實驗中心保存；取三個楊樹品種的幼嫩新枝，以莖段、葉柄和葉片為外植體，分別剪成0. 5-1. 5cm的短段，嫩葉橫向深達主脈剪3道傷口，接種在叢生芽誘導培養基上，經過叢生芽的誘導、叢生芽的抽莖生長及壯苗階段，得到高2-5cm的健康叢生芽，培養溫度24-26°C，光照時間16h cf1，光照度20001x。
4.根據權利要求I所述的楊樹組培苗生根培養方法，其特征在于所述的叢生芽誘導培養基為 MS+TDZ 0. 05mg. L_1+6-BA 0. 05mg. L-1+NAA 0. 05mg. L'
5.根據權利要求I所述的楊樹組培苗生根培養方法，其特征在于所述的營養液為MS或 1/2MS。
6.根據權利要求5所述的楊樹組培苗生根培養方法,其特征在于所述的營養液中還添加植物生長調節物質萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)、吲哚乙酸(IAA)O. 01-0. 05mg. L-I,pH值為6. 5。
7.根據權利要求5所述的楊樹組培苗生根培養方法，其特征在于所述MS營養液配方NH4N031650mg. L' KN031900mg. L' MgSO4. 7H20 370mg. L' KH2PO4170mg. L' CaCl2. 2H20440mg. L—1、H3BO36. 2mg. L—1、MnSO4. 4H20 22. 3 mg. L—1、CoCl2. 6H200. 025mg. L—1、CuSO4. 5H200.025mg. L \ ZnSO4. 7H20 8. 6mg. L \ Na2MoO4. 2H20 0. 25mg. L \ KI 0. 83mg. L \ FeSO4. 7H2027. 8mg. L' Na2EDTA. 2H20 37. 3mg. L' 維生素 BIO. lmg. L' 維生素 B60. 5mg. L' 煙酸0.5mg. L'肌醇 IOOmg. L'甘氨酸 2mg. L'
8.根據權利要求I所述的楊樹組培苗生根培養方法，其特征在于所述的營養土為泥炭土和蛭石，兩者的體積比為泥炭土蛭石=3 I。
全文摘要
本發明涉及一種楊樹組培苗生根培養方法，包括以下步驟以蛭石為基質，自來水漂洗2次后晾干備用，在透光培養瓶中鋪蛭石厚度2-3cm，添加蛭石1-2倍質量的營養液，選擇3-5cm高狀態較一致的抽莖苗用以生根，每種培養基質處理接種50株，單株單瓶培養，30d后統計各處理的生根率；無菌苗生長至高7cm左右時，于日光溫室中，連同根部粘連的部分蛭石取出小苗，移入含水量60％-75％的營養土中，壓緊營養土，噴水，蓋塑料薄膜保濕7d，后逐漸掀開薄膜，20d后觀察生根。本發明的生根方法，以蛭石提供支撐作用，僅添加1/2MS或MS，配制方便，降低了成本，由于不含糖類物質，雜菌不宜滋生，基質透氣性能優良，生根健康，生根苗繼代培養或移栽成功率高。
文檔編號A01H4/00GK102668979SQ20121000597
公開日2012年9月19日 申請日期2012年1月10日 優先權日2012年1月10日
發明者盧偉, 周洲, 崔林開, 李永麗, 胡艷紅, 范晶超 申請人:河南科技大學