本發(fā)明涉及一種無毒可降解型蒸騰抑制劑的制備方法，屬于蒸騰抑制劑制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
蒸騰抑制劑是一種減少水分蒸發(fā)，保護(hù)植物，提高成活的一種藥劑，其作用機(jī)理是通過均勻噴施于植物葉片和枝干后，在葉片表面形成一層保護(hù)膜，封閉氣孔，減緩新陳代謝，特有的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)又能保證呼吸作用的正常進(jìn)行，減少水分蒸發(fā)，從而提高樹木的成活率。一般是在大樹移植前后以及運(yùn)輸過程中、高溫或干旱、園林綠化工程中大規(guī)格苗木古樹名木珍稀樹種等、常綠喬灌木移植等的情況下使用。
現(xiàn)有的蒸騰抑制劑主要有：①代謝型抗蒸騰劑：常用的有PMA（醋酸苯汞）、ABA、NaHSO3、CaC12、2,4-D、阿特拉津、甲草胺、三唑酮、黃腐酸，其中除黃腐酸外大都具有嚴(yán)重的環(huán)境毒性和生理毒性，危害環(huán)境和人類健康，同時(shí)ABA等生長調(diào)節(jié)劑不僅具有環(huán)境毒性而且價(jià)格昂貴，因此很難推廣使用；②成膜型抗蒸騰劑，大都是國外昂貴的專利產(chǎn)品，很難自然降解，具有持久污染；③反射型抗蒸騰劑，常用的有：高嶺土和高嶺石，此類制劑的使用量大、效果差并且具有直接降低光合速率的副作用等，目前也較少實(shí)際應(yīng)用；生物感應(yīng)型抗蒸騰劑，它是一種基于釀酒酵母菌的生物型植物抗蒸騰劑，由于釀酒酵母菌可能產(chǎn)生酒精等對(duì)植物有副作用的物質(zhì)，還需要進(jìn)一步的完善才能被實(shí)際應(yīng)用推廣。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題：針對(duì)傳統(tǒng)的蒸騰抑制劑含有毒性，危害環(huán)境和人體健康，且很難自然降解，具有持久污染的問題，提供了一種通過豆粕富集耐熱型凝結(jié)芽孢桿菌，在中溫下對(duì)牛奶與大豆進(jìn)行發(fā)酵，通過牛奶與大豆中蒸煮出的脂肪蛋白復(fù)合物，負(fù)載至細(xì)菌產(chǎn)生的纖維素薄膜表面，將其碾磨并噴灑至樹葉表面，待其干燥后形成一層復(fù)合薄膜，有效關(guān)閉樹葉和植物表面氣孔，抑制植物表面水汽的蒸騰作用的方法。本發(fā)明首先以豆粕、氯化鈉等物質(zhì)為原料，制得滅菌富集培養(yǎng)基，將凝結(jié)芽孢桿菌轉(zhuǎn)接于滅菌富集培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過濾，得到富集菌種液，接著將其接種于自制的滅菌培養(yǎng)基上，進(jìn)行加熱，收集培養(yǎng)基表層薄膜，進(jìn)行干燥，研磨過篩，得到發(fā)酵膜粉末，最后將其與去離子水、磷酸二氫鉀等物質(zhì)進(jìn)行均質(zhì)處理，即可得到無毒可降解型蒸騰抑制劑。本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑中不含有有毒物質(zhì)，不會(huì)對(duì)環(huán)境和人的身體健康產(chǎn)生危害，且具有可降解性，具有廣泛的應(yīng)用前景。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
（1）分別稱量10～15g豆粕、650～700mL去離子水、5～10g氯化鈉、10～15g磷酸氫二鉀、1～2g錳酸鉀置于培養(yǎng)皿中，攪拌混合并置于120～125℃下高溫滅菌處理10～15min，靜置冷卻至室溫后，制備得滅菌富集培養(yǎng)基；
（2）選用接種環(huán)挑選2～3環(huán)凝結(jié)芽孢桿菌轉(zhuǎn)接于上述滅菌富集培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為45～50℃，在120～200r/min下?lián)u床振蕩培養(yǎng)5～8天，待培養(yǎng)完成后，用三層紗布過濾并收集濾液，制備得富集菌種液；
（3）按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量45～50份新鮮牛奶、10～15份大豆、5～10份氯化鈉、10～15份磷酸氫二鉀、1～2份錳酸鉀和45～50去離子水置于燒杯中，攪拌混合并置于100～110℃下水浴加熱25～30min，靜置冷卻至室溫，制備得滅菌培養(yǎng)基，再按接種量5%，將上述制備的富集菌種液添加至滅菌培養(yǎng)基中，在45～50℃下水浴加熱5～7天；
（4）待水浴加熱完成后，停止加熱并靜置冷卻至室溫，收集培養(yǎng)基表層薄膜，用去離子水沖洗3～5次后，真空冷凍干燥收集得干燥發(fā)酵薄膜，將干燥發(fā)酵薄膜置于研缽中研磨并過200目篩，收集得發(fā)酵膜粉末，隨后按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量45～50份去離子水、10～15份磷酸二氫鉀、5～8份蜂蠟和15～20份發(fā)酵膜粉末置于均質(zhì)機(jī)中，在45～55℃下均質(zhì)處理15～20min，收集均質(zhì)液即可制備得一種無毒可降解型蒸騰抑制劑。
本發(fā)明的應(yīng)用方法：本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑可廣泛適用于植物移植前后及待移栽過程；植物種植后的養(yǎng)護(hù)管理及在高溫或干旱環(huán)境中生長的植物，按質(zhì)量比1:80～1:100，將本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑與溫度為35～40℃的水進(jìn)行攪拌混合均勻，均勻的噴灑于所需使用蒸騰抑制劑的植物葉面，植物移栽采用起苗前噴灑1次，載植后間隔30天噴灑2次；植物種植后的養(yǎng)護(hù)管理每隔六個(gè)月噴灑1次；在高溫或干旱環(huán)境中生長的植物在干旱期、灌漿期葉面噴灑2次。經(jīng)檢測(cè)，對(duì)于移栽和干旱、高溫中生長的植物成活率提高了15～20%，對(duì)于養(yǎng)護(hù)的植物葉子枯黃推遲15～20天，有效降低植物的蒸騰速率。
本發(fā)明與其他方法相比，有益技術(shù)效果是：
（1）本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑能有效降低植物的蒸騰速率，對(duì)于移栽和干旱、高溫中生長的植物成活率提高了15～20%，對(duì)于養(yǎng)護(hù)的植物葉子枯黃推遲15～20天；
（2）本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑中不含有有毒物質(zhì)，不會(huì)對(duì)環(huán)境和人體身體健康造成危害；
（3）本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑易降解，不會(huì)造成持久污染，具有廣闊的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施方式
首先分別稱量10～15g豆粕、650～700mL去離子水、5～10g氯化鈉、10～15g磷酸氫二鉀、1～2g錳酸鉀置于培養(yǎng)皿中，攪拌混合并置于120～125℃下高溫滅菌處理10～15min，靜置冷卻至室溫后，制備得滅菌富集培養(yǎng)基；選用接種環(huán)挑選2～3環(huán)凝結(jié)芽孢桿菌轉(zhuǎn)接于上述滅菌富集培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為45～50℃，在120～200r/min下?lián)u床振蕩培養(yǎng)5～8天，待培養(yǎng)完成后，用三層紗布過濾并收集濾液，制備得富集菌種液；再按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量45～50份新鮮牛奶、10～15份大豆、5～10份氯化鈉、10～15份磷酸氫二鉀、1～2份錳酸鉀和45～50去離子水置于燒杯中，攪拌混合并置于100～110℃下水浴加熱25～30min，靜置冷卻至室溫，制備得滅菌培養(yǎng)基，再按接種量5%，將上述制備的富集菌種液添加至滅菌培養(yǎng)基中，在45～50℃下水浴加熱5～7天；待水浴加熱完成后，停止加熱并靜置冷卻至室溫，收集培養(yǎng)基表層薄膜，用去離子水沖洗3～5次后，真空冷凍干燥收集得干燥發(fā)酵薄膜，將干燥發(fā)酵薄膜置于研缽中研磨并過200目篩，收集得發(fā)酵膜粉末，隨后按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量45～50份去離子水、10～15份磷酸二氫鉀、5～8份蜂蠟和15～20份發(fā)酵膜粉末置于均質(zhì)機(jī)中，在45～55℃下均質(zhì)處理15～20min，收集均質(zhì)液即可制備得一種無毒可降解型蒸騰抑制劑。
實(shí)例1
首先分別稱量15g豆粕、700mL去離子水、10g氯化鈉、15g磷酸氫二鉀、2g錳酸鉀置于培養(yǎng)皿中，攪拌混合并置于125℃下高溫滅菌處理15min，靜置冷卻至室溫后，制備得滅菌富集培養(yǎng)基；選用接種環(huán)挑選3環(huán)凝結(jié)芽孢桿菌轉(zhuǎn)接于上述滅菌富集培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為50℃，在200r/min下?lián)u床振蕩培養(yǎng)8天，待培養(yǎng)完成后，用三層紗布過濾并收集濾液，制備得富集菌種液；再按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量50份新鮮牛奶、15份大豆、10份氯化鈉、15份磷酸氫二鉀、2份錳酸鉀和50去離子水置于燒杯中，攪拌混合并置于110℃下水浴加熱30min，靜置冷卻至室溫，制備得滅菌培養(yǎng)基，再按接種量5%，將上述制備的富集菌種液添加至滅菌培養(yǎng)基中，在50℃下水浴加熱7天；待水浴加熱完成后，停止加熱并靜置冷卻至室溫，收集培養(yǎng)基表層薄膜，用去離子水沖洗5次后，真空冷凍干燥收集得干燥發(fā)酵薄膜，將干燥發(fā)酵薄膜置于研缽中研磨并過200目篩，收集得發(fā)酵膜粉末，隨后按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量50份去離子水、15份磷酸二氫鉀、8份蜂蠟和20份發(fā)酵膜粉末置于均質(zhì)機(jī)中，在55℃下均質(zhì)處理20min，收集均質(zhì)液即可制備得一種無毒可降解型蒸騰抑制劑。
本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑可廣泛適用于植物移植前后及待移栽過程，按質(zhì)量比1:100，將本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑與溫度為40℃的水進(jìn)行攪拌混合均勻，均勻的噴灑于所需移栽的植物，植物移栽采用起苗前噴灑1次，栽植后間隔30天噴灑2次，經(jīng)檢測(cè)，對(duì)于移栽的植物成活率提高了15%，有效降低植物的蒸騰速率。
實(shí)例2
首先分別稱量10g豆粕、650mL去離子水、5g氯化鈉、10g磷酸氫二鉀、1g錳酸鉀置于培養(yǎng)皿中，攪拌混合并置于120℃下高溫滅菌處理10min，靜置冷卻至室溫后，制備得滅菌富集培養(yǎng)基；選用接種環(huán)挑選2環(huán)凝結(jié)芽孢桿菌轉(zhuǎn)接于上述滅菌富集培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為45℃，在120r/min下?lián)u床振蕩培養(yǎng)5天，待培養(yǎng)完成后，用三層紗布過濾并收集濾液，制備得富集菌種液；再按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量45份新鮮牛奶、10份大豆、5份氯化鈉、10份磷酸氫二鉀、1份錳酸鉀和45去離子水置于燒杯中，攪拌混合并置于100℃下水浴加熱25min，靜置冷卻至室溫，制備得滅菌培養(yǎng)基，再按接種量5%，將上述制備的富集菌種液添加至滅菌培養(yǎng)基中，在45℃下水浴加熱5天；待水浴加熱完成后，停止加熱并靜置冷卻至室溫，收集培養(yǎng)基表層薄膜，用去離子水沖洗3次后，真空冷凍干燥收集得干燥發(fā)酵薄膜，將干燥發(fā)酵薄膜置于研缽中研磨并過200目篩，收集得發(fā)酵膜粉末，隨后按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量45份去離子水、10份磷酸二氫鉀、5份蜂蠟和15份發(fā)酵膜粉末置于均質(zhì)機(jī)中，在45℃下均質(zhì)處理15min，收集均質(zhì)液即可制備得一種無毒可降解型蒸騰抑制劑。
本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑可適用于植物種植后的養(yǎng)護(hù)管理，按質(zhì)量比1:80，將本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑與溫度為35℃的水進(jìn)行攪拌混合均勻，均勻的噴灑于所需養(yǎng)護(hù)的植物葉面，植物種植后的養(yǎng)護(hù)管理每隔六個(gè)月噴灑1次，經(jīng)檢測(cè)，養(yǎng)護(hù)的植物葉子枯黃推遲15天，有效降低植物的蒸騰速率。
實(shí)例3
首先分別稱量12g豆粕、670mL去離子水、7g氯化鈉、12g磷酸氫二鉀、2g錳酸鉀置于培養(yǎng)皿中，攪拌混合并置于122℃下高溫滅菌處理12min，靜置冷卻至室溫后，制備得滅菌富集培養(yǎng)基；選用接種環(huán)挑選2環(huán)凝結(jié)芽孢桿菌轉(zhuǎn)接于上述滅菌富集培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為47℃，在130r/min下?lián)u床振蕩培養(yǎng)7天，待培養(yǎng)完成后，用三層紗布過濾并收集濾液，制備得富集菌種液；再按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量47份新鮮牛奶、12份大豆、7份氯化鈉、12份磷酸氫二鉀、2份錳酸鉀和47去離子水置于燒杯中，攪拌混合并置于105℃下水浴加熱27min，靜置冷卻至室溫，制備得滅菌培養(yǎng)基，再按接種量5%，將上述制備的富集菌種液添加至滅菌培養(yǎng)基中，在47℃下水浴加熱6天；待水浴加熱完成后，停止加熱并靜置冷卻至室溫，收集培養(yǎng)基表層薄膜，用去離子水沖洗4次后，真空冷凍干燥收集得干燥發(fā)酵薄膜，將干燥發(fā)酵薄膜置于研缽中研磨并過200目篩，收集得發(fā)酵膜粉末，隨后按重量份數(shù)計(jì)，分別稱量47份去離子水、12份磷酸二氫鉀、7份蜂蠟和17份發(fā)酵膜粉末置于均質(zhì)機(jī)中，在50℃下均質(zhì)處理17min，收集均質(zhì)液即可制備得一種無毒可降解型蒸騰抑制劑。
本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑可適用于在高溫或干旱環(huán)境中生長的植物，按質(zhì)量比1:90，將本發(fā)明制備的無毒可降解型蒸騰抑制劑與溫度為37℃的水進(jìn)行攪拌混合均勻，均勻的噴灑于干旱環(huán)境中生長的植物葉面，在干旱期、灌漿期葉面噴灑2次。經(jīng)檢測(cè)，對(duì)于干旱、高溫中生長的植物成活率提高了20%，有效降低植物的蒸騰速率。