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枯草芽孢桿菌、生物膜及其構建和應用的制作方法

文檔序號:12411232閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種枯草芽孢桿菌生物膜,其特征在于,其含有TasA-R蛋白,R為功能基團。

2.如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌生物膜,其特征在于,所述的R為肽或蛋白。

3.如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌生物膜,其特征在于,所述的R為短肽、粘性蛋白、熒光報告蛋白、環境降解酶、氫化酶、固氮酶或金屬或半導體綁定蛋白等。

4.如權利要求1所述的枯草芽孢桿菌生物膜,其特征在于,R包括組氨酸標簽histag、spytag、snooptag、CBD、GFP、表皮生長因子、磁顆粒模板蛋白Mms6、貽貝足絲蛋白Mefp3和Mefp5、貽貝足絲蛋白Mgfp3和Mgfp5、紅色熒光蛋白蛋白Mcherry、熒光蛋白Maple3、重金屬結合蛋白MTs、鉛結合蛋白PbrR、放射性鈾結合蛋白SUP、有機磷水解酶OPH、塑料降解酶PETase和MHETase、鎳鐵氫化酶、鐵鐵氫化酶或固氮酶。

5.一種枯草芽孢桿菌,其特征在于,其能夠形成權利要求1-4中任一項所述的枯草芽孢桿菌生物膜。

6.權利要求5所述的枯草芽孢桿菌的構建方法,其特征在于,包括以下步驟:將產生物膜的原始枯草芽孢桿菌的淀粉樣蛋白的編碼基因tasA或淀粉樣蛋白的編碼基因tasA以及產生胞外多糖的編碼基因簇epsA-O和生物膜抑制子編碼基因sinR中的至少一種在基因組上進行敲除,構建枯草芽孢桿菌突變株,轉入TasA-R表達質粒,得到枯草芽孢桿菌。

7.如權利要求6所述的枯草芽孢桿菌的構建方法,其特征在于,所述的TasA-R表達質粒為pHT01-tasA、pHT01-tasA-Histag、pHT01-tasA-spytag、pHT01-tasA-mgfp3-Histag、pHT01-tasA-mgfp5-Histag、pHT01-tasA-mefp3-Histag、pHT01-tasA-mefp5-Histag、pHT01-tasA-mms6-Histag、pHT01-tasA-mts-Histag、pHT01-tasA-pbrR-Histag、pHT01-tasA-sup-Histag、pHT01-tasA-mcherry-Histag、pHT01-tasA-maple3-Histag、pHT01-tasA-OPH-Histag或pHT01-tasA-OPH。

8.權利要求5所述的枯草芽孢桿菌的構建方法,其特征在于,包括以下步驟:構建能夠表達TasA-R蛋白的基因組替換整合質粒,將基因組替換整合質粒轉入大腸桿菌菌株,從大腸桿菌中提取整合質粒,轉入枯草桿菌菌株;或者,將產生物膜的原始枯草芽孢桿菌的淀粉樣蛋白的編碼基因tasA或淀粉樣蛋白的編碼基因tasA以及產生胞外多糖的編碼基因簇epsA-O和生物膜抑制子編碼基因sinR中的至少一種在基因組上進行敲除,構建枯草芽孢桿菌突變株,構建Sender質粒和Receiver質粒,將Sender質粒和Receiver質粒分別轉到枯草芽孢桿菌突變株中,得到Sender菌株及Receiver菌株,將能夠表達TasA-R蛋白的基因插入到受QS信號分子活化的P3啟動子下游進行表達,將表達質粒轉化Receiver菌株。

9.如權利要求8所述的枯草芽孢桿菌的構建方法,其特征在于,所述的基因組替換整合質粒為pMAD-tasA-histag,pMAD-tasA-mefp3-histag,pMAD-tasA-mefp5-histag,pMAD-tasA-mcherry-histag,pMAD-tasA-oph或pMAD-lacI-Pgrac-tasA-histag;所述的Sender質粒和Receiver質粒為pDG-P2-agrBDCA和pDG-P2-agrCA,所述的表達質粒為pMK-P3-tasA-histag、pMK-P3-tasA-mcherry-histagp、MK-P3-tasA-mefp3-histag、pMK-P3-tasA-mefp5-histag或pMK-P3-tasA-oph。

10.權利要求1-4所述的枯草芽孢桿菌生物膜在生物催化、生物標記、制備生物材料、生物修復和生物粘性材料以及生物醫藥和能源領域中的應用。

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