發(fā)明背景
因子xia是參與血液凝固調節(jié)的血漿絲氨酸蛋白酶。雖然血液凝固是調節(jié)有機體內穩(wěn)態(tài)的必要和重要的部分，但異常凝血也可能具有有害作用。例如，血栓形成是在血管或心腔內形成或存在血塊。這種血塊可以滯留在血管中，從而阻斷循環(huán)并誘導心臟病發(fā)作或中風。血栓栓塞病癥是工業(yè)化世界中死亡和殘疾的最大原因。
血液凝固是控制哺乳動物生存所必需的血流的過程。在血管損傷后開始凝固過程及隨后的傷口愈合發(fā)生后的凝塊溶解，并且可以分為四個階段。第一階段，血管收縮或血管緊縮，可導致?lián)p傷區(qū)域的失血量減少。在下一階段，凝血酶導致血小板活化，血小板粘附到血管壁損傷部位并形成血小板聚集體。在第三階段，凝塊配合物的形成導致凝血酶大量形成，其通過裂解兩個小肽將可溶性纖維蛋白原轉化為纖維蛋白。在第四階段，傷口愈合后，通過內源性纖維蛋白溶解系統(tǒng)的關鍵酶纖維蛋白溶酶的作用溶解血栓。
兩種可替換的途徑可以導致纖維蛋白凝塊的形成，即內在途徑和外在途徑。這些途徑由不同的機制啟動，但在后期階段，它們匯聚得到共同的最終的凝血級聯(lián)路徑。在這個最終的凝血路徑中，凝血因子x被活化。活化的因子x負責從在血液中循環(huán)的無活性前體凝血酶原形成凝血酶。在沒有傷口的血管壁異常的底部上形成血栓是內在途徑的結果。作為對組織損傷或傷害作出反應的纖維蛋白凝塊形成是外在途徑的結果。兩種途徑都包含相對大量的蛋白質，其被稱為凝血因子。內在途徑需要凝血因子v、viii、ix、x、xi和xii以及前激肽釋放酶、高分子量激肽原、鈣離子和來自血小板的磷脂。因子xia的活化是凝固活化的兩個途徑之間的中心交叉點。因子xia在血液凝固中具有重要作用。
當血液暴露于人工表面(例如，在血液透析期間、“體外循環(huán)”心血管手術、血管移植物、細菌性敗血癥)、細胞表面上、細胞受體、細胞碎片、dna、rna和細胞外基質時，凝血開始。該過程也被稱為接觸活化。因子xii的表面吸收導致因子xii分子的構象變化，從而促進對蛋白水解活性因子xii分子(因子25xiia和因子xiif)的活化。因子xiia(或xiif)具有許多靶蛋白，包括血漿前激肽釋放酶和因子xi。活性血漿激肽釋放酶進一步活化因子xii，導致接觸活化的擴大。或者，絲氨酸蛋白酶脯氨酰羧肽酶可以活化在細胞和基質表面上形成的多蛋白配合物中與高分子量激肽原配合的血漿激肽釋放酶(shariat-madar等人，blood，108:192-199(2006))。接觸活化是部分地負責調節(jié)血栓形成和炎癥的表面介導的過程，并且至少部分地由纖維蛋白溶解、補體、激肽原/激肽和其他體液和細胞途徑介導(綜述，coleman，r.，“contactactivationpathway”，hemostasisandthrombosis，pp.103-122，lippincottwilliams&wilkins(2001)；schmaier，a.h.，“contactactivation”，thrombosisandhemorrhage，pp.105-128(1998))。接觸活化系統(tǒng)對5種血栓栓塞性疾病的生物相關性由因子xii缺陷小鼠的表型支持。更具體地，在幾種血栓形成模型以及中風模型中保護因子xii缺陷小鼠免于血栓性血管閉塞，并且xii缺陷小鼠的表型與xi缺陷小鼠相同(renne等人，jexp.med.，202:271-281(2005)；kleinschmitz等人，jexp.med.，203:513-518(2006))。因子xi是因子xiia的下游，與xii和xi缺陷小鼠的相同表型相結合的事實表明接觸活化系統(tǒng)可在體內xi因子活化中起主要作用。血漿激肽釋放酶是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的酶原并且存在于血漿中。基因結構類似于因子xi的基因結構。總的來說，血漿激肽釋放酶的氨基酸序列與因子xi具有58%的同源性。通過因子xiia在內部i389-r390鍵處的蛋白水解活化產(chǎn)生重鏈(371個氨基酸)和輕鏈(248個氨基酸)。血漿激肽釋放酶的活性位點包含在輕鏈中。血漿激肽釋放酶的輕鏈與15種蛋白酶抑制劑反應，包括α2巨球蛋白和cl抑制劑。有趣的是，在高分子量激肽原(hmwk)存在下，肝素顯著加速抗凝血酶iii對血漿激肽釋放酶的抑制。在血液中，大多數(shù)血漿激肽釋放酶與hmwk配合循環(huán)。血漿激肽釋放酶裂解hmwk以釋放緩激肽。緩激肽釋放導致血管通透性和血管擴張的增加(綜述，coleman，r.，“contactactivationpathway”，hemostasisandthrombosis，pp.103-122，lippincottwilliams&wilkins(2001)；schmaiera.h.，“contactactivation”，thrombosisandhemorrhage，pp.105-128(1998))。
因子xia抑制劑化合物描述于wo2013022814、wo2013022814、wo2013022818、wo2013055984、wo2013056034、wo2013056060、wo2013118805、wo2013093484、wo2002042273、wo2002037937、wo2002060894、wo2003015715、wo2004002405、us20040180855、wo2004080971、wo2004094372、us20050228000、us20050282805、wo2005123680、us20090036438、us20120088758、us20060074103、wo2006062972、wo2006076246、us20060154915、us20090062287、us20060183771、wo2007070818、wo2007070816、wo2007070826、wo2008076805、wo2008157162、wo2009114677、wo2011100402和wo2011100401中
發(fā)明概述
本發(fā)明涉及式i化合物：
或其藥學上可接受的鹽。式i化合物是選擇性因子xia抑制劑或因子xia和血漿激肽釋放酶的雙重抑制劑，因此可用于治療、抑制或改善可受益于因子xia或血漿激肽釋放酶抑制的一種或多種疾病狀態(tài)，包括血栓形成、栓塞、高凝狀態(tài)或纖維化變化。本發(fā)明化合物可以進一步與其它治療有效的試劑組合使用，包括但不限于可用于治療血栓形成、栓塞、高凝狀態(tài)或纖維化變化的其它藥物。本發(fā)明還涉及制備式i化合物的方法和包含式i化合物的藥物組合物。
發(fā)明詳述
本發(fā)明涉及式i的化合物或其藥學上可接受的鹽：
其中x是-(c=o)nh-或–nh(c=o)-；
r1是芳基、雜芳基或c3-6環(huán)烷基，其中所述芳基、雜芳基和環(huán)烷基任選被1至3個獨立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4、c3-6環(huán)烷基和任選被r4取代的雜芳基的取代基取代；
r2是氫、羥基、鹵素或c1-6烷基，其中所述烷基任選被1或2個獨立地選自鹵素、or4或c3-6環(huán)烷基的取代基取代；
r3是芳基、雜芳基或c3-10環(huán)烷基，其中所述芳基、雜芳基和環(huán)烷基任選被1至3個獨立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4和雜芳基的取代基取代；
r4是氫或c1-6烷基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素和羥基的基團取代；
r5是氫或c1-6烷基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素和羥基的基團取代；
rx是氫、羥基或鹵素；
rz是氫、羥基、甲氧基或鹵素；
本發(fā)明的一個實施方案涉及式ia的化合物或其藥學上可接受的鹽：
其中r1是苯基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素或任選被r4取代的雜芳基的取代基取代；
r2是氫、羥基、鹵素或c1-6烷基，其中所述烷基任選被1或2個獨立地選自鹵素、or4或c3-6環(huán)烷基的取代基取代；
r3是苯基或c3-10環(huán)烷基，其中所述苯基和環(huán)烷基任選被1至3個獨立地選自鹵素、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4和nh(c=o)r4的取代基取代；
r4是氫或c1-6烷基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素和羥基的基團取代，
r5是氫或c1-6烷基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素和羥基的基團取代，
rx是氫、羥基或鹵素；
rz是氫、羥基、甲氧基或鹵素。
本發(fā)明還涉及式ii的化合物或其藥學上可接受的鹽：
其中r1是芳基、雜芳基或c3-6環(huán)烷基，其中所述芳基、雜芳基和環(huán)烷基任選被1至3個獨立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4、c3-6環(huán)烷基和任選被r4取代的雜芳基的取代基取代；
r2是氫、羥基、鹵素或c1-6烷基，其中所述烷基任選被1或2個獨立地選自鹵素、or4或c3-6環(huán)烷基的取代基取代；
r3是芳基、雜芳基或c3-10環(huán)烷基，其中所述芳基、雜芳基和環(huán)烷基任選被1至3個獨立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4和雜芳基的取代基取代；
r4是氫或c1-6烷基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素和羥基的基團取代；
r5是氫或c1-6烷基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素和羥基的基團取代；
rx是氫、羥基或鹵素；
rz是氫、羥基、甲氧基或鹵素。
本發(fā)明還涉及式i的化合物或其藥學上可接受的鹽：
其中x是-(c=o)nh-或–nh(c=o)-；
r1是芳基、雜芳基或c3-6環(huán)烷基，其中所述芳基、雜芳基和環(huán)烷基任選被1至3個獨立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4、c3-6環(huán)烷基和任選被r4取代的雜芳基的取代基取代；
r2是氫、羥基或鹵素；
r3是芳基、雜芳基或c3-10環(huán)烷基，其中所述芳基、雜芳基和環(huán)烷基任選被1至3個獨立地選自鹵素、硝基、氰基、氧代、r4、or4、(c=o)r4、(c=o)or4、nr4r5、nh(c=o)r4、nh(c=o)or4和雜芳基的取代基取代；
r4是氫或c1-6烷基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素和羥基的基團取代；
r5是氫或c1-6烷基，其任選被1至3個獨立地選自鹵素和羥基的基團取代；
rx是氫、羥基或鹵素；
rz是氫、羥基、甲氧基或鹵素。
在本發(fā)明的一個實施方案中，r1是任選被2或3個獨立地選自鹵素和雜芳基的取代基取代的苯基。在一類實施方案中，r1是任選被鹵素和四唑基取代的苯基。在另一類實施方案中，r1是任選被三個鹵素取代的苯基。
在本發(fā)明的一個實施方案中，r2是氫。在本發(fā)明的另一實施方案中，r2是羥基。在本發(fā)明的另一實施方案中，r2是ch2-環(huán)丙基。
在本發(fā)明的一個實施方案中，r3是任選被1至3個獨立地選自(c=o)or4和nh(c=o)r4的取代基取代的芳基。在一類實施方案中，r3是任選被(c=o)or4取代的芳基。在一類實施方案中，r3是任選被nh(c=o)r4取代的芳基。在本發(fā)明的一個亞類中，r3是任選被1至3個獨立地選自(c=o)or4和nh(c=o)r4的取代基取代的苯基。在該實施方案的一個亞類中，r3是任選被(c=o)or4取代的苯基。在該實施方案的一個亞類中，r3是任選被nh(c=o)r4取代的苯基。在本發(fā)明的另一實施方案中，r3是任選被1至3個獨立地選自鹵素和(c=o)or4的取代基取代的c3-10環(huán)烷基。在一類實施方案中，r3是任選被(c=o)or4取代的雙環(huán)[2.2.2]辛基。在本發(fā)明的另一實施方案中，r3是雜芳基。在一類實施方案中，r3是吡啶基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噻二唑基、二噻唑基、噁二唑基或四唑基。
在本發(fā)明的一個實施方案中，rx是氫。在本發(fā)明的另一實施方案中，rx是羥基。在本發(fā)明的另一實施方案中，rx是鹵素。在本發(fā)明的一類實施方案中，rx是氟。
除非另有說明，否則提及上述優(yōu)選類別和子類意味著包括特定和優(yōu)選基團的所有組合。
本發(fā)明的具體實施方案包括但不限于本文中鑒定為實施例1至20的化合物或其藥學上可接受的鹽。
本發(fā)明范圍內還包括包含上述式i、式ia或式ii或化合物和藥學上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明還意圖涵蓋包含藥學上可接受的載體和本申請中具體公開的任何化合物的藥物組合物。本發(fā)明的這些和其它方面將從本文包含的教導中顯而易見。
本發(fā)明還包括在哺乳動物中抑制血小板損失、抑制血小板聚集體形成、抑制纖維蛋白形成、抑制血栓形成、抑制栓子形成和治療炎性病癥的組合物，其包含在藥學上可接受的載體中的本發(fā)明化合物。這些組合物可任選包括抗凝劑、抗血小板劑和溶栓劑。可以將組合物加入到血液、血液制品或哺乳動物器官中，以便實現(xiàn)所需的抑制。
本發(fā)明還包括用于預防或治療哺乳動物的不穩(wěn)定型心絞痛、難治性心絞痛、心肌梗死、短暫性腦缺血發(fā)作、心房顫動、血栓性中風、栓塞性中風、深靜脈血栓形成、彌散性血管內凝血、纖維蛋白的眼部積聚、以及再通血管的再閉塞或再狹窄的組合物，其包含在藥學上可接受的載體中的本發(fā)明化合物。這些組合物可任選包括抗凝劑、抗血小板劑和溶栓劑。
本發(fā)明還包括通過將本發(fā)明化合物共價或非共價連接到表面來降低哺乳動物表面的血栓形成的方法。
本發(fā)明化合物為因子xia抑制劑，并且可具有例如預防冠狀動脈疾病的治療價值。所述化合物為選擇性因子xia抑制劑或因子xia和血漿激肽釋放酶的雙重抑制劑。
要理解的是，如本文所用，提到結構式i、式ia和式ii的化合物意在也包括藥學上可接受的鹽以及在用作游離化合物或其藥學上可接受的鹽的前體或用于其它合成操作時藥學上不可接受的鹽。
本發(fā)明化合物可以以藥學上可接受的鹽的形式施用。術語“藥學上可接受的鹽”是指由藥學上可接受的無毒堿或酸制備的鹽，包括無機或有機堿和無機或有機酸。包括在術語“藥學上可接受的鹽”中的堿性化合物的鹽是指本發(fā)明化合物的無毒鹽，其通常通過游離堿與合適的有機或無機酸反應制備。本發(fā)明的堿性化合物的代表性鹽包括但不限于以下：乙酸鹽、抗壞血酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、aspirate、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、右旋樟腦磺酸鹽(camsylate)、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二乙基乙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、二鹽酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯月桂硫酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽(esylate)、乙烷磺酸鹽(ethanesulfonate)、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽(gluceptate)、葡庚糖酸鹽(glucoheptanoate)、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、甘油磷酸鹽、對羥乙酰氨基苯胂酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、己基間苯二酚鹽、海巴明鹽(hydrabamine)、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、異煙酸鹽、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、甲磺酸鹽、粘酸鹽、2-萘磺酸鹽、萘磺酸鹽(napsylate)、煙酸鹽、硝酸鹽、n-甲基葡糖胺銨鹽、油酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽(雙羥萘酸鹽)、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、果膠酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、庚二酸鹽、苯丙酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物、三氟乙酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。此外，當本發(fā)明化合物攜帶酸性部分時，其合適的藥學上可接受的鹽包括但不限于衍生自無機堿的鹽，包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳、亞錳、鉀、鈉、鋅等。特別優(yōu)選的是銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鉀鹽和鈉鹽。衍生自藥學上可接受的有機無毒堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺、環(huán)胺、二環(huán)己基胺和堿性離子交換樹脂，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、n,n-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙胺、乙二胺、n-乙基嗎啉、n-乙基哌啶、葡糖胺(glucamine)、葡萄糖胺(glucosamine)、組氨酸、海巴明、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、多胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。還包括堿性含氮基團，其可被諸如以下的試劑季銨化：低級烷基鹵化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如二甲酯、二乙酯、二丁酯；和硫酸二戊基酯；長鏈鹵化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物如芐基和苯乙基溴化物等。
這些鹽可以通過已知的方法獲得，例如，通過將本發(fā)明化合物與等量的含有所需的酸、堿等的溶液混合，然后通過過濾鹽或蒸餾出溶劑來收集所需的鹽。本發(fā)明化合物及其鹽可以與溶劑如水、乙醇或甘油形成溶劑合物。本發(fā)明化合物可以形成酸加成鹽并根據(jù)側鏈的取代基的類型同時與堿形成鹽。
如果式i、式ia或式ii的化合物在分子中同時含有酸性和堿性基團，本發(fā)明除所提到的鹽形式外還包括內鹽或內銨鹽（兩性離子）。
本發(fā)明包括式i、式ia和式ii的化合物的所有立體異構形式。除非指明具體立體化學，本發(fā)明意在包括這些化合物的所有這樣的異構形式。式i、式ia和式ii的化合物中存在的不對稱中心可以都彼此獨立地具有(r)構型或(s)構型。當與手性碳的鍵在本發(fā)明的結構式中表示為直線時，應理解手性碳的(r)和(s)構型以及因此兩種對映異構體及其混合物都包含在該式中。類似地，當記載化合物名稱而沒有手性碳的手性命名時，應理解，手性碳的(r)和(s)構型以及因此單個對映異構體及其混合物都被該名稱包括。在獲得這些立體異構體或混合物的實施例中可以鑒定特定立體異構體或其混合物的制備，但這決不限制所有立體異構體及其混合物包括在本發(fā)明的范圍內。
本發(fā)明包括所有可能的對映異構體和非對映異構體以及兩種或更多種立體異構體的混合物，例如所有比例的對映異構體和/或非對映異構體的混合物。因此，本發(fā)明的主題是左旋和右旋對映體形式的對映異構體純形式、外消旋體形式和所有比例的兩種對映異構體混合物的形式的對映異構體。在順式/反式異構的情況下，本發(fā)明包括順式和反式兩種形式以及這些形式的所有比例的混合物。如果需要的話，可以通過常規(guī)方法，例如通過色譜或結晶分離混合物，通過使用立體化學均勻的原料用于合成或通過立體選擇性合成來進行單獨的立體異構體的制備。任選地，可以在分離立體異構體之前進行衍生化。立體異構體混合物的分離可以在合成式i、式ia或式ii化合物期間的中間步驟中進行，或者可以在最終的外消旋產(chǎn)物上進行。絕對立體化學可以通過結晶產(chǎn)物或結晶中間體的x射線晶體學確定，如果需要的話，其用含有已知構型的立體中心的試劑衍生化。當本發(fā)明化合物能夠互變異構時，所有單獨的互變異構體及其混合物都包括在本發(fā)明的范圍內。除非指明此類外消旋物、對映異構體、非對映異構體或互變異構體的特定異構體、鹽、溶劑合物（包括水合物）或溶劑化鹽，本發(fā)明包括所有這些異構體，以及這些外消旋體、對映異構體、非對映異構體和互變異構體及其混合物的鹽、溶劑合物(包括水合物)和溶劑化鹽。
在本發(fā)明化合物中，原子可以顯示出它們的天然同位素豐度，或者可以將一個或多個原子人工富集在具有相同原子序數(shù)，但原子量或質量數(shù)不同于自然界中主要發(fā)現(xiàn)的原子量或質量數(shù)的特定同位素中。本發(fā)明意在包括具體和一般描述的化合物的所有合適的同位素變體。例如，氫(h)的不同同位素形式包括氕(1h)和氘(2h)。氕是自然界中發(fā)現(xiàn)的主要的氫同位素。氘的富集可提供某些治療優(yōu)點，例如增加體內半衰期或降低劑量需要，或可提供可用作表征生物樣品的標準的化合物。可以不用過度實驗，通過本領域技術人員熟知的常規(guī)技術，或通過與本文的一般方法方案和實施例中描述的方法類似的方法，使用合適的同位素富集的試劑和/或中間體來制備同位素富集的化合物。
當任何變量(例如r4等)在任何成分中出現(xiàn)多于一次時，其在每次出現(xiàn)時的定義獨立于其它每次出現(xiàn)時的定義。此外，取代基和變量的組合是允許的，只要這種組合產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物。從取代基畫到環(huán)系中的線表示所示的鍵可以連接到任何可取代的環(huán)原子。如果環(huán)系統(tǒng)是雙環(huán)的，則意味著該鍵連接至雙環(huán)部分的任一環(huán)上的任何合適的原子。
應理解，本領域普通技術人員可以將一個或多個硅(si)原子并入本發(fā)明化合物中以代替一個或多個碳原子，以提供化學穩(wěn)定的化合物，并且其可以容易地通過本領域已知的技術由容易獲得的原料合成。當比較類似的c元素和si元素鍵時，碳和硅的共價半徑不同導致鍵距離和空間排列的差異。當與碳相比時，這些差異導致含硅化合物的尺寸和形狀的微小變化。本領域普通技術人員將理解，大小和形狀差異可導致效力、溶解性、脫靶活性缺乏、包裝性質等的微小或顯著變化。(diass，j.o.等人，organometallics(2006)5:1188-1198；showell，g.a.等人，bioorganic&medicinalchemistryletters(2006)16:2555-2558)。
應理解，本領域普通技術人員可以選擇本發(fā)明化合物上的取代基和取代模式，以提供化學穩(wěn)定的并且可以容易地通過本領域已知的技術以及下述那些方法由容易獲得的原料合成的化合物。如果取代基本身被多于一個基團取代，應理解這些多個基團可以在相同的碳或不同的碳上，只要得到穩(wěn)定的結構。短語(被一個或多個取代基)“任選取代的”應理解為是指所述基團未被取代或可以被一個或多個取代基取代。
此外，本發(fā)明化合物可以以無定形形式和/或一種或多種結晶形式存在，并且因此式i、式ia和式ii化合物的所有無定形和結晶形式及其混合物旨在包括在本發(fā)明的范圍內。此外，本發(fā)明的一些化合物可與水形成溶劑合物(即水合物)或與普通有機溶劑形成溶劑合物。本發(fā)明化合物的這種溶劑合物和水合物，特別是藥學上可接受的溶劑合物和水合物，以及未溶劑化和無水形式，同樣包括在本發(fā)明的范圍內。
提及本發(fā)明化合物作為具體式或實施方案(例如式i、式ia或式ii)或本文描述或要求保護的任何其它通用結構式或具體化合物的那些化合物，旨在涵蓋落入所述式或實施方案范圍內的具體的一個或多個化合物，包括其鹽，特別是藥學上可接受的鹽，這些化合物的溶劑合物及其溶劑化鹽形式，其中這些形式是可能的，除非另有說明。
此外，在本發(fā)明化合物中存在羧酸(-cooh)或醇基的情況下，可以使用羧酸衍生物的藥學上可接受的酯，例如甲基、乙基或新戊酰氧基甲基酯，或醇的酰基衍生物，例如o-乙酰基、o-新戊酰基、o-苯甲酰基和o-氨基酰基。包括本領域已知的用于改變用作緩釋或前藥制劑的溶解性或水解特性的那些酯和酰基。
導致體內轉化為本發(fā)明范圍內的化合物的本發(fā)明化合物的任何藥學上可接受的前藥修飾也在本發(fā)明的范圍內。例如，酯可以任選通過可用的羧酸基團的酯化或通過在化合物中可用的羥基上形成酯來制備。類似地，可以制備不穩(wěn)定的酰胺。可以制備本發(fā)明化合物的藥學上可接受的酯或酰胺以作為前藥起作用，其可以水解回到酸(或-coo-，取決于發(fā)生轉化時的流體或組織的ph)或羥基形式，特別是在體內，并因此包括在本發(fā)明的范圍內。藥學上可接受的前藥修飾的實例包括但不限于-c1-6烷基酯和用苯基酯取代的-c1-6烷基。
因此，本文描述和要求保護的通用結構式、實施方案和具體化合物內的化合物包括其鹽、所有可能的立體異構體和互變異構體、物理形式(例如，無定形和結晶形式)、溶劑合物和水合物形式以及這些形式的任何組合，以及其鹽、其前藥形式和其前藥形式的鹽，其中這些形式是可能的，除非另有指出。
除非本文另有指出，否則術語“烷基”旨在包括具有指定數(shù)目碳原子的支鏈和直鏈飽和脂族烴基。在整個說明書中使用烷基的常用縮寫，例如，甲基可以由包括“me”或ch3的常規(guī)縮寫或作為末端基團的延伸鍵的符號例如
具有等同含義。c1-4烷基包括正、異、仲和叔丁基，正和異丙基，乙基和甲基。如果沒有指定數(shù)目，1-4個碳原子意圖用于直鏈或支鏈烷基。
除非本文另有指出，“烷醇”旨在包括具有指定數(shù)目碳原子的脂肪醇，例如甲醇、乙醇、丙醇等，其中-oh基團連接在任何脂族碳上，例如，丙-1-醇、丙-2-醇等。
除非另有指出，術語“環(huán)烷基”是指具有指定數(shù)目碳原子的單環(huán)或雙環(huán)飽和脂族烴基。例如，“環(huán)烷基”包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、雙環(huán)[2.2.2]辛基等。
除非另有指出，術語“鹵素(halogen或halo)”是指氟、氯、溴或碘。
除非另有指出，本文所用的術語“雜芳基”表示在每個環(huán)中至多10個原子的穩(wěn)定的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)，其中至少一個環(huán)是芳族的，并且至少一個環(huán)含有1至4個選自o、n和s的雜原子。在該定義范圍內的雜芳基包括但不限于：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、吲哚啉基(indolinyl)、吲哚基、吲哚嗪基、吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、萘啶基、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、異噁唑啉、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并噁唑基、二氫吲哚基(dihydroindolyl)、二氫喹啉基、亞甲二氧基苯、苯并噻唑基、苯并噻吩基、喹啉基、異喹啉基、噁唑基、四氫喹啉和3-氧代-3,4二氫-2n苯并[b][1,4]噻嗪。如果雜芳基含有氮原子，應理解其相應的n-氧化物也包括在該定義中。
除非另有指出，術語“芳基”旨在表示在每個環(huán)中至多12個原子的任何穩(wěn)定的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)，其中至少一個環(huán)是芳族的。這種芳基元素的實例包括苯基、萘基、四氫萘基和茚滿基。
“celite?”(fluka)硅藻土(diatomite)是硅藻土(diatomaceousearth)，并且可以被稱為“硅藻土(celite)”。
除非本文另有指出，否則含有取代基變量如下面的變量“r”的結構：
其被描繪為不連接至任何一個特定雙環(huán)碳原子，表示其中變量可任選連接至任何雙環(huán)碳原子的結構。例如，上述結構中所示的變量r可以連接至6個雙環(huán)碳原子i、ii、iii、iv、v或vi中的任一個。
除非本文另有指出，雙環(huán)系統(tǒng)包括稠環(huán)系統(tǒng)，其中兩個環(huán)共享兩個原子，以及螺環(huán)系統(tǒng)，其中兩個環(huán)共享一個原子。
本發(fā)明還包括充當前藥和溶劑合物的式i、式ia和式ii化合物的衍生物。在施用于患者之后，前藥通過正常代謝或化學過程，例如通過在血液中水解，在體內轉化為式1、式ia或式ii化合物。這樣的前藥包括顯示增強的生物利用度、組織特異性和/或細胞遞送的那些，以改善式i、式ia或式ii化合物的藥物吸收。這種前藥的作用可以由物理化學性質如親脂性、分子量、電荷和確定藥物滲透性質的其它物理化學性質的改變引起。
由能夠形成鹽的式i、式ia和式ii化合物(包括其立體異構形式)制備藥學上可接受的鹽以本身已知的方式進行。使用堿性試劑如氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽、醇鹽和氨或有機堿，例如三甲胺或三乙胺、乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺、氨丁三醇或堿性氨基酸，例如賴氨酸、鳥氨酸或精氨酸，式i、式ia和式ii化合物形成穩(wěn)定的堿金屬、堿土金屬或任選取代的銨鹽。如果式i、式ia和式ii化合物具有堿性基團，也可以使用強酸制備穩(wěn)定的酸加成鹽。為此，無機和有機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、半硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、4-溴苯磺酸、環(huán)己基氨基磺酸、三氟甲磺酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、甘油磷酸、乳酸、蘋果酸、己二酸、檸檬酸、富馬酸、馬來酸、葡糖酸、葡萄糖醛酸、棕櫚酸或三氟乙酸是合適的。
本發(fā)明還涉及含有至少一種式i或式ia化合物和/或式i、式ia或式ii化合物的藥學上可接受的鹽和/或任選的式i、式ia或式ii化合物的立體異構形式或式i、式ia或式ii化合物的立體異構形式的藥學上可接受的鹽以及藥學上合適的和藥學上可接受的媒介物、添加劑和/或其它活性物質和助劑的藥物。
抗凝治療指示用于治療和預防多種血栓形成病狀，特別是冠狀動脈和腦血管疾病。在這一領域有經(jīng)驗的人很容易知道需要抗凝治療的情況。本文使用的術語“患者”是指哺乳動物，例如靈長類動物、人、羊、馬、牛、豬、狗、貓、大鼠和小鼠。
因子xia或雙重因子xia/血漿激肽釋放酶抑制不僅可用于具有血栓形成病狀的個體的抗凝治療，而且每當需要抑制血液凝固時是有用的，例如防止儲存的全血凝固和防止在用于測試或儲存的其它生物樣品中凝固。因此，因子xia或雙重因子xia/血漿激肽釋放酶抑制劑可以加入到或接觸含有或疑似含有凝血酶的任何培養(yǎng)基，并且其中希望抑制血液凝固，例如當哺乳動物的血液與選自血管移植物、支架、矯形假體、心臟修復物和體外循環(huán)系統(tǒng)的材料接觸時。
本發(fā)明化合物可用于治療或預防哺乳動物的靜脈血栓栓塞(例如，由分離的血栓阻塞或閉塞靜脈；由分離的血栓阻塞或閉塞肺動脈)、心源性血栓栓塞(例如，由分離的血栓阻塞或閉塞心臟)、動脈血栓形成(例如，在動脈內形成血栓，其可能導致由動脈供應的組織梗塞)、動脈粥樣硬化(例如，以不規(guī)則分布的脂質沉積為特征的動脈硬化)，以及用于降低與血液接觸的裝置凝結血液的傾向。
可以用本發(fā)明化合物治療或預防的靜脈血栓栓塞的實例包括靜脈阻塞、肺動脈阻塞(肺栓塞)、深靜脈血栓形成、與癌癥和癌癥化療相關的血栓形成、血栓形成性疾病遺傳的血栓形成如蛋白c缺乏、蛋白s缺乏、抗凝血酶iii缺乏和因子v萊頓，以及由獲得性血栓形成性病癥例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(炎性結締組織病)引起的血栓形成。同樣關于靜脈血栓栓塞，本發(fā)明化合物可用于保持留置導管的通暢。
可以用本發(fā)明化合物治療或預防的心源性血栓栓塞的實例包括血栓栓塞性中風(導致與腦血液供應受損有關的神經(jīng)性痛苦的分離性血栓)、與心房顫動相關的心源性血栓栓塞(上心室肌原纖維的快速、不規(guī)律抽搐)、與假體心臟瓣膜例如機械心臟瓣膜相關的心源性血栓栓塞以及與心臟病相關的心源性血栓栓塞。
動脈血栓形成的實例包括不穩(wěn)定型心絞痛(冠狀動脈起源的胸部嚴重的收縮性疼痛)、心肌梗死(由供血不足引起的心肌細胞死亡)、缺血性心臟病(由于供血阻塞(例如通過動脈狹窄)引起的局部貧血)、經(jīng)皮冠狀動脈腔內成形術期間或之后的再閉塞、經(jīng)皮冠狀動脈腔內成形術后的再狹窄、冠狀動脈旁路移植的閉塞和閉塞性腦血管疾病。同樣關于動脈血栓形成，本發(fā)明化合物可用于保持動靜脈插管的通暢。
動脈粥樣硬化的實例包括動脈硬化。
本發(fā)明化合物還可以是激肽釋放酶抑制劑，并且特別可用于治療遺傳性血管水腫。
與血液接觸的裝置的實例包括血管移植物、支架、矯形假體、心臟修復物和體外循環(huán)系統(tǒng)。
根據(jù)本發(fā)明的藥物可以通過口服、吸入、直腸或經(jīng)皮施用或通過皮下、關節(jié)內、腹膜內或靜脈內注射施用。優(yōu)選口服施用。用式i、式ia或式ii化合物和與體內血液接觸的其它表面涂覆支架是可能的。
本發(fā)明還涉及制備藥物的方法，其包括使用藥學上合適的和藥學上可接受的載體和任選的其它合適的活性物質、添加劑或助劑將至少一種式i、式ia或式ii化合物引入合適的施用形式。
合適的固體或蓋侖制劑形式是例如顆粒、粉末、包衣片劑、片劑、(微)膠囊、栓劑、糖漿、果汁、懸浮液、乳劑、滴劑或可注射溶液和具有活性物質的延長釋放的制劑，在所述制劑中使用常規(guī)賦形劑，例如媒介物、崩解劑、粘合劑、包衣劑、溶脹劑、助流劑或潤滑劑、調味劑、甜味劑和增溶劑。可以提及的常用助劑是碳酸鎂、二氧化鈦、乳糖、甘露醇和其它糖、滑石、乳糖、明膠、淀粉、纖維素及其衍生物、動物和植物油如魚肝油、向日葵、花生或芝麻油、聚乙二醇和溶劑，例如無菌水和一元醇或多元醇如甘油。
根據(jù)多種因素選擇利用因子xia抑制劑或雙因子xia/血漿激肽釋放酶抑制劑的劑量方案，包括患者的類型、物種、年齡、體重、性別和醫(yī)學狀況；待治療病狀的嚴重程度；施用途徑；患者的腎和肝功能；和所用的具體化合物或其鹽。普通技術的醫(yī)師或獸醫(yī)可以容易地確定和開出預防、對抗或阻止病狀進展所需的藥物的有效量。
當用于指示效應時，因子xia抑制劑或雙重因子xia/血漿激肽釋放酶抑制劑的口服劑量范圍為約0.01mg/kg體重/天(mg/kg/天)至約30mg/kg/天，優(yōu)選0.025-7.5mg/kg/天，更優(yōu)選0.1-2.5mg/kg/天，最優(yōu)選0.1-0.5mg/kg/天(除非另有指出，活性成分的量以游離堿計)。例如，80kg患者將接受約0.8mg/天至2.4g/天，優(yōu)選2-600mg/天，更優(yōu)選8-200mg/天，最優(yōu)選8-40mg/kg/天。因此，適當制備的用于每天一次施用的藥物將含有0.8mg至2.4g，優(yōu)選2mg至600mg，更優(yōu)選8mg至200mg，最優(yōu)選8mg至40mg，例如，8mg、10mg、20mg和40mg。有利地，因子xia抑制劑可以每天兩次、三次或四次的分劑量施用。對于每天兩次施用，適當制備的藥物將含有0.4mg至4g，優(yōu)選1mg至300mg，更優(yōu)選4mg至100mg，最優(yōu)選4mg至20mg，例如4mg、5mg、10mg和20mg。
靜脈內，患者將接受足以遞送0.025-7.5mg/kg/天，優(yōu)選0.1-2.5mg/kg/天，更優(yōu)選0.1-0.5mg/kg/天的量的活性成分。這樣的量可以以許多合適的方式施用，例如，在一個延長的時間段內或每天幾次施用大體積的低濃度的活性成分，在短時間段內例如每天一次施用低體積的高濃度的活性成分。通常，可以制備常規(guī)靜脈內制劑，其含有約0.01-1.0mg/ml，例如0.1mg/ml、0.3mg/ml和0.6mg/ml濃度的活性成分，并以每天0.01ml/kg患者體重至10.0ml/kg患者體重，例如0.1ml/kg、0.2ml/kg、0.5ml/kg的量施用。在一個實例中，每天兩次接受8ml的活性成分濃度為0.5mg/ml的靜脈內制劑的80kg患者，每天接受8mg活性成分。葡萄糖醛酸、l-乳酸、乙酸、檸檬酸或在靜脈內施用可接受的ph范圍內具有合理緩沖能力的任何藥學上可接受的酸/共軛堿可用作緩沖劑。取決于待施用的藥物的溶解度，適當?shù)木彌_液和制劑ph的選擇容易由本領域普通技術人員進行。
式i、式ia和式ii化合物可以作為單一療法和與其它治療劑組合施用，包括抗血栓形成劑(抗凝劑和血小板聚集抑制劑)、溶栓劑(纖溶酶原激活劑)、其它纖溶酶原活性物質、降壓藥、血糖調節(jié)劑、降脂劑和抗心律失常藥。
因子xia抑制劑或雙重因子xia/血漿激肽釋放酶抑制劑也可以與合適的抗凝劑共同施用，所述抗凝劑包括但不限于其它因子xia抑制劑、凝血酶抑制劑、凝血酶受體拮抗劑、因子viia抑制劑、因子xa抑制劑、因子ixa抑制劑、因子xiia抑制劑、二磷酸腺苷抗血小板劑(例如，p2y12拮抗劑)、纖維蛋白原受體拮抗劑(例如，用于治療或預防不穩(wěn)定型心絞痛或預防血管成形術后的再閉塞和再狹窄)、其它抗凝劑例如阿司匹林和溶栓劑例如纖溶酶原激活劑或鏈激酶以在治療各種血管病變中實現(xiàn)協(xié)同作用。這樣的抗凝劑包括例如阿哌沙班、達比加群、坎格雷洛、替卡格雷、沃拉帕沙、氯吡格雷、依度沙班、米泊美生、普拉格雷、利伐沙班和semuloparin。例如，患有冠狀動脈疾病的患者和經(jīng)受血管成形術程序的患者將受益于纖維蛋白原受體拮抗劑和凝血酶抑制劑的共同施用。因子xia抑制劑可以在血栓形成之后首先施用，并且此后施用組織纖溶酶原激活劑或其它纖溶酶原激活劑。
或者或另外，一種或多種另外的藥理活性劑可以與本發(fā)明化合物組合施用。另外的一種活性劑(或多種活性劑)旨在表示在體內有活性的一種藥物活性劑(或多種活性劑)，包括施用后轉化為藥學活性形式的前藥，其不同于本發(fā)明化合物，并且還包括所述另外的活性劑的游離酸、游離堿和藥學上可接受的鹽，當這些形式以商業(yè)銷售或另外化學上可能時。通常，任何合適的另外的一種或多種活性劑，包括但不限于抗高血壓劑、另外的利尿劑、抗動脈粥樣硬化劑例如脂質修飾化合物、抗糖尿病劑和/或抗肥胖劑，可以在單一劑量制劑中與本發(fā)明化合物以任何組合使用(固定劑量藥物組合)，或可以以一個或多個分開的劑量制劑施用于患者，其允許同時或順序施用活性劑(共同施用單獨的活性劑)。可以使用的另外的活性劑的實例包括但不限于血管緊張素轉化酶抑制劑(例如，阿拉普利、貝那普利、卡托普利、西洛普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉、福辛普利、咪達普利、賴諾普利、莫維普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利、螺普利、替莫普利或群多普利)；血管緊張素ii受體拮抗劑，也稱為血管緊張素受體阻斷劑或arb，其可以是游離堿、游離酸、鹽或前藥形式，如阿齊沙坦例如阿齊沙坦酯鉀(edarbi?)、坎地沙坦例如坎地沙坦西酯(atacand?)、依普沙坦例如甲磺酸依普沙坦(tevetan?)、依貝沙坦(avapro?)、氯沙坦例如氯沙坦鉀(cozaar?)、奧美沙坦例如奧美沙坦酯(benicar?)、替米沙坦(micardis?)、纈沙坦(diovan?)和與噻嗪類利尿劑如氫氯噻嗪(例如，hyzaar?、diovanhct?、atacandhct?等)組合使用的這些藥物中的任一種；保鉀利尿劑如鹽酸阿米洛利、螺內酯、依普利酮、氨苯蝶啶，各自具有或不具有hctz；中性肽鏈內切酶抑制劑(例如，塞奧芬和磷酸阿米酮)；醛固酮拮抗劑；醛固酮合酶抑制劑；腎素抑制劑；enalkrein；ro42-5892；a65317；cp80794；es1005；es8891；sq34017；阿利吉侖(2(s),4(s),5(s),7(s)-n-(2-氨基甲酰基-2-甲基丙基)-5-氨基-4-羥基-2,7-二異丙基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)-苯基]-辛酰胺半富馬酸鹽)spp600、spp630和spp635)；內皮素受體拮抗劑；血管擴張劑(例如硝普鹽)；鈣通道阻滯劑(例如，氨氯地平、硝苯地平、維拉帕米、地爾硫卓、非洛地平、戈洛帕米、尼魯?shù)仄健⒛崮仄健⒛峥ǖ仄?；鉀通道激活劑(例如，尼可地爾、吡那地爾、克羅卡林、米諾地爾、aprilkalim、氯普唑侖)；交感神經(jīng)阻滯藥(sympatholitics)、β-腎上腺素能阻滯藥(例如，醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、卡維地洛、美托洛爾、酒石酸美托洛爾、納多洛爾、普萘洛爾、索他洛爾、噻嗎洛爾)；α腎上腺素能阻斷藥(例如，多沙唑嗪、哌唑嗪或α甲基多巴)；中樞α腎上腺素能激動劑；外周血管擴張劑(例如肼屈嗪)；降脂劑，例如hmg-coa還原酶抑制劑，例如辛伐他汀和洛伐他汀，其以內酯前藥形式作為zocor?和mevacor?銷售和在施用后起抑制劑作用，以及二羥基開環(huán)酸hmg-coa還原酶抑制劑的藥學上可接受的鹽，如阿托伐他汀(特別是以lipitor?銷售的鈣鹽)、羅蘇伐他汀(特別是以crestor?銷售的鈣鹽)、普伐他汀(特別是以pravachol?銷售的鈉鹽)和氟伐他汀(特別是以lescol?銷售的鈉鹽)；膽固醇吸收抑制劑例如依澤替米貝(zetia?)，和與任何其它降脂劑例如上述hmg-coa還原酶抑制劑，特別是與辛伐他汀(vytorin?)或與阿托伐他汀鈣組合的依澤替米貝；立即釋放或控釋形式的煙酸，特別是與dp拮抗劑如拉羅皮蘭和/或與hmg-coa還原酶抑制劑組合的煙酸；煙酸受體激動劑如阿昔莫司和阿昔呋喃，以及煙酸受體部分激動劑；代謝改變劑，包括胰島素敏化劑和相關化合物，其用于治療糖尿病，例如雙胍類(例如，二甲雙胍)、氯茴苯酸類(例如，瑞格列奈、那格列奈)、磺脲類(例如，氯磺丙脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲)、噻唑烷二酮類也稱為格列酮類(例如，吡格列酮、羅格列酮)、α葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖、米格列醇)、二肽基肽酶抑制劑(例如，西他列汀(januvia?)、阿格列汀、維格列汀、沙格列汀、利格列汀、度格列汀(dutogliptin)、吉格列汀)、麥角生物堿(例如，溴麥角環(huán)肽)、組合藥物如janumet?(西他列汀與二甲雙胍)和可注射的糖尿病藥物如艾塞那肽和醋酸普蘭林肽；葡萄糖吸收抑制劑，如鈉-葡萄糖轉運體（sglt）抑制劑及其各種同種型，如sglt-1、sglt-2（例如asp-1941、ts-071、bi-10773、托格列凈、lx-4211、卡格列凈、達格列凈、ertugliflozin、伊格列凈、remogliflozin和sotagliflozin）和sglt-3；或與有益于預防或治療上述疾病的其它藥物，包括但不限于二氮嗪；并且包括化學上可能的游離酸、游離堿和藥學上可接受的鹽形式、前藥形式例如酯，和上述藥劑的前藥的鹽。提供上面提及的藥物的商標名稱是為了舉例說明市售形式的活性劑；這樣的藥物可以用于單獨劑型中，其用于與本發(fā)明化合物同時或順序施用，或其中的一種或多種活性劑可以用于包括本發(fā)明化合物的固定劑量藥物組合中。
與其它合適的抗血小板劑、抗凝劑或溶栓劑組合的本發(fā)明的因子xia抑制劑或因子xia/血漿激肽釋放酶抑制劑的典型劑量可以與不共同施用另外的抗血小板劑、抗凝劑或溶栓劑的情況下施用的因子xia抑制劑的那些劑量相同，或者可以基本上少于不共同施用另外的抗血小板劑、抗凝劑或溶栓劑的情況下施用的凝血酶抑制劑的那些劑量，這取決于患者的治療需要。
所述化合物以治療有效量施用于哺乳動物。“治療有效量”是指本發(fā)明化合物的量，當單獨或與另外的治療劑組合施用于哺乳動物時，其有效治療(即預防、抑制或改善)血栓栓塞性和/或炎性疾病狀況或治療宿主中疾病的進展。
本發(fā)明化合物優(yōu)選以治療有效量單獨施用于哺乳動物。然而，本發(fā)明化合物還可以以治療有效量與如下定義的另外的治療劑組合施用于哺乳動物。當以組合施用時，化合物的組合優(yōu)選但不一定是協(xié)同組合。例如由chouandtalalay，adv.enzymeregul.1984，22，27-55所述，當組合施用時化合物的作用(在該情況下，為抑制期望靶標)大于當作為單一試劑單獨施用時每種化合物的加和作用時，發(fā)生協(xié)同作用。通常，在化合物非最佳濃度下最明顯地顯示協(xié)同作用。協(xié)同作用可以是與單獨的組分相比具有較低的細胞毒性、增加的抗凝作用或組合的一些其他有益作用。
“組合施用”或“聯(lián)合治療”是指將本發(fā)明化合物和一種或多種另外的治療劑同時施用于正在治療的哺乳動物。當組合施用時，每種組分可以同時施用或在不同時間點以任何順序依次施用。因此，每種組分可以分開施用，但在時間上足夠接近，以提供所需的治療效果。
本發(fā)明的范圍不限于實施例中公開的具體實施方案，其旨在作為本發(fā)明的幾個方面的說明，并且功能上等同的任何實施方案在本發(fā)明的范圍內。實際上，除了本文所示和所述的那些之外，本發(fā)明的各種修改對于相關領域的技術人員將是顯而易見的，并且旨在落入所附權利要求的范圍內。
為了本說明書的目的，以下縮寫具有所示的含義：
縮寫列表:
acn=乙腈
acoh或hoac=乙酸
aq=水性
boc=叔丁氧基羰基
dmf=二甲基甲酰胺
dcm=二氯甲烷
diad=偶氮二甲酸二異丙酯
diea=n,n-二異丙基乙胺
dipea=n,n-二異丙基乙胺
dmap=n,n-二甲基氨基吡啶
dppf=1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵
etoac=乙酸乙酯
etoh=乙醇
h或hr=小時
hex=己烷
hplc=高壓液相色譜法
rphplc=反相高壓液相色譜法
lcms=液相色譜法–質譜法
lhmds=六甲基二硅基氨基鋰
lioh=氫氧化鋰
me=甲基
meoh=甲醇
min=分鐘
ms=質譜法
mcpba=間氯過氧苯甲酸
ncs=n-氯琥珀酰亞胺
rt或rt=室溫
thf=四氫呋喃
satd=飽和
sem=2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
sfc=超臨界流體色譜法
sm=原材料
tbaf=四-正丁基氟化銨
tbs=叔丁基二甲基甲硅烷基
tea=三乙胺
tfa=三氟乙酸
vac=真空
hatu=2-(1h-7-氮雜苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽甲銨鹽。
此外，tlc是薄層色譜法；ts是甲苯磺酰基；uv是紫外線；w是瓦特；wt.%是重量百分比；℃是攝氏度；%w/v是前一試劑的重量相對于后一試劑的體積的百分比。
lcms條件：柱：supelcoascentisexpressc183x100mm,2.7μm。溶劑體系：a-0.05%tfa/水和b-0.05%tfa/乙腈。梯度條件：在3.5分鐘內10%b至99%b。
方案1
<步驟1-1>式(i-c)所示的化合物可以使用常被稱作suzuki偶聯(lián)反應（miyaura,norio；suzuki,akira；chemicalreviews(1996),95,2457-2483）的方法制備。(i-a)類型的中間體可以在合適的鈀催化劑，如1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(ii)等和弱堿，如碳酸鈉、磷酸三鈉等存在下用r1-b(oh)2(i-b)類型的硼酸（boronicacid）或r1-b(or)2類型的硼酸酯處理。該反應通常在惰性有機溶劑，如甲苯、乙醇或二氧雜環(huán)己烷和水的合適脫氣混合物中在通常70℃至該溶劑混合物的沸點溫度的升高的溫度下進行3-24小時。或者，本領域技術人員可以在能在微波反應器中加熱到過熱反應溫度（這可將反應時間減少到1分鐘至1小時）的合適容器中進行上述suzuki反應。或者，該反應可以在室溫下使用合適的鈀預催化劑根據(jù)文獻中最近報道的條件（kinzel,tom；zhang,yong；buchwald,stephenl.journaloftheamericanchemicalsociety(2010),132,14073-14075）進行。
<步驟1-2>式(i-d)所示的化合物可通過使中間體(i-c)與堿，如氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀通過本領域技術人員公知的方法反應制備。該反應可以在合適的溶劑，如thf、水、甲醇或乙醇或其混合物中進行。這一過程可以在室溫至該溶劑的回流溫度的溫度下進行幾分鐘至幾小時。
<步驟1-3>式(i-f)所示的化合物可通過使中間體(i-d)與適當取代的胺(i-e)通過公知方法或與公開文獻，例如organicsynthesisiv,acids,aminoacids,andpeptides,第191-309頁,1992,maruzenco.,ltd.中描述的類似的方法在縮合劑，如1,3-二環(huán)己基碳二亞胺（dcc）、1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽（wsc·hcl或edchcl）、o-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽（hatu）、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽（bop試劑）或雙(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯（bop-cl）存在下在對該反應無活性的溶劑，如鹵代溶劑，例如二氯甲烷或氯仿，醚類溶劑，例如二乙醚或四氫呋喃，芳烴溶劑，例如甲苯或苯，極性溶劑，例如n,n-二甲基甲酰胺，或醇類溶劑，例如甲醇、乙醇或2-丙醇中在存在或不存在堿，如三乙胺或n,n-二異丙基乙胺的情況下在0℃至溶劑回流溫度的溫度下反應制備。
<步驟1-4>式(i-g)所示的化合物可通過使式(i-f)的適當取代的吡啶與氧化試劑，如過氧化氫、mcpba、過硫酸氫鉀（oxone）、二甲基二氧雜環(huán)丙烷或過乙酸在適當?shù)娜軇ㄋ⒍燃淄榛蛞宜嶂蟹磻苽洹Ｔ摲磻ǔＴ?℃至70℃的溫度下進行幾分鐘至幾天。在一些情況下，合適的催化劑，如甲基三氧化錸的使用可促進該氧化反應。此類方法類似于公開文獻中描述的那些（例如參見deng,lisheng；sundriyal,sandeep；rubio,valentina；shi,zheng-zheng；song,yongcheng,journalofmedicinalchemistry(2009),52(21),6539-6542）。在一些實例中，在上述氧化反應的過程中或在合成程序中的更早步驟中也可能觀察到羥基化類似物(i-h)。
方案2
<步驟2-1>式(ii-c)所示的化合物可以使用常被稱作suzuki偶聯(lián)反應（miyaura,norio；suzuki,akira；chemicalreviews(1996),95,2457-2483）的方法制備。(ii-a)類型的中間體可以在合適的鈀催化劑，如1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵二氯化鈀(ii)等和弱堿，如碳酸鈉、磷酸三鈉、氟化銫等存在下用r1-b(oh)2(ii-b)類型的硼酸或r1-b(or)2類型的硼酸酯處理。該反應通常在惰性有機溶劑，如甲苯、乙醇或二氧雜環(huán)己烷和水的合適脫氣混合物中在通常70℃至該溶劑混合物的沸點溫度的升高的溫度下進行3-24小時。或者，本領域技術人員可以在能在微波反應器中加熱到過熱反應溫度（這可將反應時間減少到1分鐘至1小時）的合適容器中進行上述suzuki反應。或者，該反應可以在室溫下使用合適的鈀預催化劑根據(jù)文獻中最近報道的條件（kinzel,tom；zhang,yong；buchwald,stephenl.journaloftheamericanchemicalsociety(2010),132,14073-14075）進行。
<步驟2-2>式(ii-d)所示的化合物可通過使式(ii-c)的適當取代的吡啶與氧化試劑，如過氧化氫、mcpba、過硫酸氫鉀、二甲基二氧雜環(huán)丙烷或過乙酸在適當?shù)娜軇ㄋ⒍燃淄榛蛞宜嶂蟹磻苽洹Ｔ摲磻ǔＴ?℃至70℃的溫度下進行幾分鐘至幾天。在一些情況下，合適的催化劑，如甲基三氧化錸的使用可促進該氧化反應。此類方法類似于公開文獻中描述的那些（例如參見deng,lisheng；sundriyal,sandeep；rubio,valentina；shi,zheng-zheng；song,yongcheng,journalofmedicinalchemistry(2009),52(21),6539-6542）。
方案3
<步驟3-1>
式(iii-c)所示的化合物可通過使中間體(iii-a)與適當取代的胺(iii-b)通過公知方法或與公開文獻，例如organicsynthesisiv,acids,aminoacids,andpeptides,第191-309頁,1992,maruzenco.,ltd.中描述的類似的方法在縮合劑，如1,3-二環(huán)己基碳二亞胺（dcc）、1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽（wsc·hcl或edchcl）、o-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽（hatu）、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸鹽（bop試劑）或雙(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯（bop-cl）存在下在對該反應無活性的溶劑，如鹵代溶劑，例如二氯甲烷或氯仿，醚類溶劑，例如二乙醚或四氫呋喃，芳烴溶劑，例如甲苯或苯，極性溶劑，例如n,n-二甲基甲酰胺，或醇類溶劑，例如甲醇、乙醇或2-丙醇中在存在或不存在堿，如三乙胺或n,n-二異丙基乙胺的情況下在0℃至溶劑回流溫度的溫度下反應制備。
<步驟3-2>式(iii-d)所示的化合物可通過使式(iii-c)的適當取代的吡啶與氧化試劑，如過氧化氫、mcpba、過硫酸氫鉀、二甲基二氧雜環(huán)丙烷或過乙酸在適當?shù)娜軇ㄋ⒍燃淄榛蛞宜嶂蟹磻苽洹Ｔ摲磻ǔＴ?℃至70℃的溫度下進行幾分鐘至幾天。在一些情況下，合適的催化劑，如甲基三氧化錸的使用可促進該氧化反應。此類方法類似于公開文獻中描述的那些（例如參見deng,lisheng；sundriyal,sandeep；rubio,valentina；shi,zheng-zheng；song,yongcheng,journalofmedicinalchemistry(2009),52(21),6539-6542）。
方案4
<步驟4-1>在(iv-b)類型的本發(fā)明的化合物含有附著在r3上的羧酸的具體情況下，可能如方案4中所示需要附加步驟。倒數(shù)第二個烷基酯中間體(iv-a)可根據(jù)公知方法或與公開文獻，例如greene,t.w.等人,protectivegroupsinorganicsynthesis(2007),第4版中描述的類似的方法轉化成相應的羧酸。在一些情況下，這種轉化可以在酸，如三氟乙酸、甲酸、鹽酸或乙酸存在下在對該反應無活性的溶劑，如鹵代溶劑，例如二氯甲烷或氯仿，或醚類溶劑，例如二氧雜環(huán)己烷或四氫呋喃中在0℃至溶劑回流溫度的溫度下進行。在另一些情況下，這一過程可以在堿，如氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰存在下在溶劑，如四氫呋喃、乙醇或甲醇中在0℃至溶劑回流溫度的溫度下進行。
如上所述的通用反應方案可生成作為外消旋混合物或幾種立體異構體的混合物的式(i-g)、(i-h)、(ii-d)、(iii-d)和(iv-b)的化合物。式(i-g)、(i-h)、(ii-d)、(iii-d)或(iv-b)的化合物可以使用手性拆分法，如手性制備hplc或手性sfc作為單一立體異構體獲得。
方案5
<步驟5-1>可以通過用合適的氧化劑，如過氧化氫處理v-a類型的化合物以提供v-b類型的中間體來制備v-c類型的化合物。所述氧化反應通常在惰性溶劑，如乙酸中在室溫至該溶劑的沸點溫度的溫度下進行。v-b類型的中間體n-氧化物可以在兩步-一鍋法程序中轉化成v-c類型的化合物，其首先涉及用合適的乙酰化劑，優(yōu)選乙酸酐處理n-氧化物（v-b）。該反應通常不摻雜地（neat）并在70℃至該溶劑的沸點溫度的升高的溫度下進行。
<步驟5-2>可以在本領域技術人員公知的水解條件下制備v-d類型的化合物。例如，可以在質子溶劑，如甲醇中在0℃至室溫下用合適的堿，如碳酸鉀或氫氧化鈉等處理v-c類型的化合物。
<步驟5-3>可以通過使用mitsunobu反應（綜述在castro,b.r.org.reactions,2004,第29卷中）制備v-e類型的化合物，其中使v-d類型的醇在鄰苯二甲酰亞胺、三苯基膦和活化劑，如diad、偶氮二甲酸二-叔丁酯等存在下反應。該反應在合適的惰性有機溶劑，如苯、甲苯、thf或其混合物中在0℃至室溫下進行，且該反應可能需要過夜或更長時間才能完成。
<步驟5-4>可通過用合適的親核體，如肼處理v-e類型的化合物制備v-f類型的化合物。該反應通常在質子溶劑，如etoh等中，通常在50℃至該溶劑的沸點溫度下進行。可以將所得v-f類型的胺加工成本發(fā)明的化合物（v-g）。
中間體
3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯
經(jīng)注射器經(jīng)15分鐘向3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶（4.95克，25.0毫摩爾）在thf（250毫升）中的-78℃溶液中逐滴加入lhmds的1mthf溶液（62.5毫升，62.5毫摩爾）。將所得混合物在-78℃下攪拌65分鐘，然后在-78℃下經(jīng)注射器逐滴加入碳酸二乙酯。移除低溫浴并將反應混合物在溫熱（warm）至室溫下攪拌過夜。通過添加nh4cl飽和水溶液（60毫升）淬滅該反應。將該混合物分配在鹽水（300毫升）和etoac（300毫升）之間。將有機層經(jīng)mgso4干燥，過濾并在真空中濃縮。將產(chǎn)物通過硅膠色譜法（0-30%etoac/己烷）提純以產(chǎn)生產(chǎn)物3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯。ms(esi)m/z270.56(m+h)。
3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸
向3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（2.1克，7.77毫摩爾）在thf（10毫升）中的溶液中加入氫氧化鋰（4.66毫升，9.33毫摩爾）。將該反應混合物在50℃下加熱30分鐘。此后，lcms表明轉化成所需羧酸。在真空下除去溶劑。將ph調節(jié)至ph3，然后將該混合物用etoac萃取三次。將有機層合并，干燥，過濾并濃縮以提供3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸的鋰鹽。ms(esi)m/z244.02(m+h)。
3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯
步驟1:3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-5-醇
在室溫下向在乙醇（14毫升）中的3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-5-酮（300毫克，1.415毫摩爾）中逐份加入硼氫化鈉（107毫克，2.83毫摩爾）。將反應混合物在室溫下攪拌2.5小時，然后加入10%hcl水溶液。在真空下蒸發(fā)揮發(fā)物，將水層用1nnaoh水溶液處理。其隨后用etoac（40.0毫升）萃取兩次，將合并的有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮以提供標題化合物。ms(esi)m/z216.0(m+h)。粗產(chǎn)物直接用于下一步驟。
步驟2:3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶
在室溫下向3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-5-醇（303毫克，1.42毫摩爾）在thf（9.4毫升）和dmf（4.7毫升）中的混合物中加入咪唑（145毫克，2.12毫摩爾），接著加入tbs-cl（320毫克，2.123毫摩爾）。將該反應混合物在室溫下攪拌過夜，并在真空下蒸發(fā)揮發(fā)物。將殘留物用etoac稀釋，用水、鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法（24gsio2）用0-25%etoac/己烷洗脫提純以產(chǎn)生3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶。ms(esi)m/z330.2(m+h)。
步驟3:3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯
在-78℃下經(jīng)注射器向在thf（12.5毫升）中的3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶（409毫克，1.246毫摩爾）緩慢加入lhmds(3.11毫升，3.11毫摩爾)。將該反應混合物在相同溫度下攪拌1小時，然后經(jīng)注射器逐滴加入碳酸二乙酯（379微升，3.11毫摩爾）。移除低溫浴，將該反應混合物溫熱并在室溫下攪拌過夜。加入飽和nh4cl水溶液以淬滅該反應，并在真空下蒸發(fā)溶劑。向殘留物中加入etoac，將所得混合物用鹽水洗滌。將有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法（24gsio2）用0-100%etoac/己烷洗脫提純以產(chǎn)生3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯。ms(esi)m/z400.2(m+h)。
4-(3-溴-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
步驟1:3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸
在室溫下向3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（9890毫克，24.70毫摩爾）在thf（99毫升）中的混合物中加入2nlioh水溶液（25毫升，49.4毫摩爾）。將反應混合物在相同溫度下攪拌過夜。在真空下蒸發(fā)溶劑，將水性殘留物小心地用3nhcl水溶液酸化直至獲得ph3。將該混合物用etoac（2x,150毫升）萃取。將合并的有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。粗3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸直接用于下一步驟。lcms:m/z372[m+h]+。
步驟2:4-(3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
向3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（4670毫克，12.54毫摩爾）、4-氨基苯甲酸叔丁酯（2424毫克，12.54毫摩爾）和dipea（6572微升，37.6毫摩爾）在thf（125毫升）中的混合物中加入hatu（4769毫克，12.54毫摩爾）。將該反應混合物在室溫下攪拌2小時并在真空下濃縮。將該殘留物用etoac稀釋并用飽和nahco3水溶液洗滌。將有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法用0-20%etoac/己烷洗脫提純，以產(chǎn)生4-(3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z547[m+h]+。
步驟3:4-(3-溴-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
將4-(3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（6790毫克，12.40毫摩爾）和tbaf的1mthf溶液（25毫升，25毫摩爾）在thf（62毫升）中的溶液在室溫下攪拌4小時。將該反應混合物在真空下濃縮。向殘留物中加入水，然后將該混合物用etoac（2x,100毫升）萃取。將合并的有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法用0-90%etoac/己烷洗脫提純，以產(chǎn)生4-(3-溴-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z449[m+h]+。
4-(3-溴-5,7-二氟-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
4-(3-溴-5-氟-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯
在室溫下向三乙胺三氫氟酸鹽（407微升，2.422毫摩爾）和tea（169微升，1.211毫摩爾）在dcm（60.5毫升）中的溶液中相繼加入二氟(嗎啉代)锍四氟硼酸鹽，xtalfluor-m（441毫克，1.816毫摩爾）和在dcm（4毫升）中的4-(3-溴-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（上述）（544毫克，1.211毫摩爾）。將該反應混合物在室溫下攪拌24小時，用5%nahco3水溶液淬滅，并攪拌另外15分鐘。然后將該混合物用dcm（2x,20.0毫升）萃取，將合并的有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法用0-100%etoac/己烷洗脫提純，以產(chǎn)生4-(3-溴-5,7-二氟-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z453[m+h]+。也獲得4-(3-溴-5-氟-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)-苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z451[m+h]+。
3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸
步驟1:3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯
在微波瓶中裝入3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5克，18.51毫摩爾）、4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯胺（5.87克，23.14毫摩爾）、pdcl2(dppf)（2.71克，3.70毫摩爾）和k2co3（3.84克，27.8毫摩爾）。將該瓶加蓋并用n2回填。在加入二氧雜環(huán)己烷（50毫升）和水（10毫升）后，將該混合物在100℃下加熱2小時。將該混合物用水稀釋并用ch2cl2/iproh（5:1,2x50毫升）萃取。將有機相經(jīng)mgso4干燥，過濾，濃縮并在硅膠柱上用0-75%etoac/己烷提純以產(chǎn)生3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯.lcms:m/z317.14[m+h]+。
步驟2:3-(2-氨基-5-氯苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸
在0℃下將氫化鈉（0.158克，3.95毫摩爾）部分添加到3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（1.0克，3.16毫摩爾）在dmf（5毫升）中的溶液中。移除冰浴，然后將該混合物攪拌2小時。將該混合物用hcl（3.95毫升，3.95毫摩爾）中和并攪拌15分鐘。將該混合物通過制備型反相hplc（c-18）用乙腈/水洗脫提純，以產(chǎn)生3-(2-氨基-5-氯苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸。lcms:m/z305.12[m+h]+。
步驟3:3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酸
將原甲酸三甲酯（1.045毫升，9.45毫摩爾）添加到3-(2-氨基-5-氯苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（0.72克，2.363毫摩爾）在乙酸（10毫升）中的溶液中，接著在室溫下攪拌30分鐘。加入疊氮化鈉（0.461克，7.09毫摩爾）并將反應混合物在室溫下攪拌過夜。除去溶劑，將殘留物通過制備型反相hplc（c-18）用乙腈/水洗脫提純，以產(chǎn)生3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸。lcms:m/z358.09[m+h]+。
3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-胺
步驟1:3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基乙酸酯
向3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶（497毫克，2.509毫摩爾）在乙酸（1.5毫升）中的溶液中加入過氧化氫（0.220毫升，2.509毫摩爾）。將所得混合物在70℃下加熱1.5小時，然后冷卻至環(huán)境溫度，并加入附加過氧化氫（0.220毫升，2.509毫摩爾）。在70℃下加熱另外16小時后，通過添加飽和nahso3水溶液淬滅該反應并在真空中部分濃縮。將該殘留物用na2co3(s)處理1小時，然后用chcl3研磨。將合并的有機研磨物（triturants）在真空中濃縮并將所得殘留物懸浮在乙酸酐（2.0毫升，21.20毫摩爾）中并在90℃下加熱16小時。將該混合物冷卻至環(huán)境溫度，在真空中濃縮到celite?上并通過基于硅膠的快速色譜法提純（梯度洗脫；0%-100%etoac/己烷作為洗脫劑）以提供標題化合物。ms(esi)m/z=256[m+h]。
步驟2:3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-醇
向3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基乙酸酯（261毫克，1.02毫摩爾）在meoh（3.4毫升）中的溶液中加入k2co3（352毫克，2.55毫摩爾）在水（3.4毫升）中的溶液，并將所得混合物在環(huán)境溫度下攪拌2小時。將該反應混合物用etoac稀釋，用h2o和鹽水洗滌。將有機物經(jīng)mgso4干燥，過濾并在真空中濃縮以提供標題化合物。ms(esi)m/z=214[m+h]。
步驟3:2-(3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)異吲哚啉-1,3-二酮
將3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-醇和鄰苯二甲酰亞胺（106毫克，0.719毫摩爾）懸浮在thf（4.4毫升）中，加入三苯基膦（214毫克，0.818毫摩爾）并將該混合物冷卻至0℃。逐滴加入偶氮二甲酸二叔丁酯（181毫克，0.785毫摩爾）在thf（1.5毫升）中的溶液。在5分鐘后，移除冰浴并將該反應混合物溫熱至室溫并將其攪拌36小時。將該反應混合物在真空中濃縮，將殘留物通過基于硅膠的快速色譜法提純（梯度洗脫；0%-50%etoac/己烷作為洗脫劑）以提供標題化合物。ms(esi)m/z=343[m+h]。
步驟4:3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-胺
將2-(3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)異吲哚啉-1,3-二酮（252毫克，0.733毫摩爾）懸浮在etoh（6毫升）中并加入水合肼（120l，2.42毫摩爾）。將所得混合物回流30分鐘，冷卻至室溫并倒入1nnaoh中。將所得混合物萃取w/dcm，將合并的有機物經(jīng)mgso4干燥，過濾并在真空中濃縮以提供標題化合物。ms(esi)m/z=213[m+h]。
實施例1-4
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-1-氧負離子基（oxido）-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例1）
步驟1:3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（1-c）
在微波瓶中裝入3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯(1-a)（1.0克，3.7毫摩爾）、(5-氯-2-硝基苯基)硼酸（1-b）（1.49克，7.40毫摩爾）、1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(ii)二氯甲烷配合物（0.605克，0.740毫摩爾）、thf（5毫升）和2m磷酸三鉀水溶液（7.4毫升，14.8毫摩爾）。將該反應混合物在微波輻射下在100℃下加熱60分鐘。然后，通過lcms分析確定反應未完全。加入更多(5-氯-2-硝基苯基)硼酸（1.491克，7.40毫摩爾）并將反應混合物在120℃下加熱60分鐘。將該混合物冷卻，經(jīng)硅藻土過濾，將濾液分配在etoac和水之間。將有機相用鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。快速色譜法（80gsio2,0-100%etoac/己烷)產(chǎn)生標題化合物。ms(esi)m/z349.22(m+h)。
步驟2:3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（1-d）
向3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（1-c）在thf（10毫升）中的溶液中加入2m氫氧化鋰水溶液（1.38毫升，2.77毫摩爾）。將反應混合物在50℃下加熱15分鐘。然后，在真空下除去溶劑，通過添加甲苯和蒸發(fā)掉甲苯而將所得產(chǎn)物干燥以產(chǎn)生標題化合物的鋰鹽。ms(esi)m/z319.10(m+h)。該粗產(chǎn)物不經(jīng)另外提純立即用于下一步驟。
步驟3:4-(3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-f）
向3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（1-d）在dmf中的溶液中加入4-氨基苯甲酸叔丁酯（1-e）（0.669克，3.46毫摩爾）和hatu（1.754克，4.61毫摩爾）。將該反應混合物在室溫下攪拌1小時。將該混合物用水淬滅并用etoac萃取。將有機相用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過濾并濃縮。將殘留物通過基于硅膠（80g）的柱色譜法用etoac/己烷（0-80%）洗脫提純，以提供標題化合物。ms(esi)m/z494.25(m+h)。
步驟4:4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-g）
將4-(3-(5-氯-2-硝基苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-f）（0.914克，4.05毫摩爾）、二水合氯化錫(ii)（0.50克，1.0毫摩爾）在etoac（4毫升）和etoh（2毫升）中的混合物在50℃下加熱3小時。然后，lcms顯示所需產(chǎn)物。將該混合物濃縮，然后用etoac稀釋殘留物。加入1nnaoh水溶液。取出有機相，然后用鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過濾并濃縮以提供標題化合物。ms(esi)m/z466.33(m+h)。粗產(chǎn)物不經(jīng)另外提純即用于下一步驟。
步驟5:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-h）
將4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-g）（0.48克，0.828毫摩爾）與疊氮化鈉（0.161克，2.483毫摩爾）合并，接著與三甲氧基甲烷（0.263克，2.483毫摩爾）和乙酸（6毫升）合并。將反應混合物在90℃下加熱3小時。lcms顯示形成所需產(chǎn)物。將該混合物冷卻至室溫并在真空下除去溶劑。將殘留物用乙酸乙酯（50毫升）稀釋，用水、鹽水洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過濾并在減壓下蒸發(fā)溶劑。將殘留物通過基于40g硅膠的柱色譜法用etoac/己烷（0-50%）洗脫提純以產(chǎn)生標題化合物。ms(esi)m/z517.29(m+h)。
步驟6:7-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（1-i）
向4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（1-h）（140毫克，0.271毫摩爾）在meoh（3毫升）中的溶液中加入35%過氧化氫（0.237毫升，2.71毫摩爾）和甲基三氧化錸（trioxirhenium）(vii)（33.7毫克，0.135毫摩爾）。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。然后，lcms顯示形成所需產(chǎn)物。將該混合物用etoac稀釋，用10%nahso3水溶液洗滌。將有機相經(jīng)na2so4干燥，過濾并濃縮。將該產(chǎn)物使用快速色譜法（0-100%etoac/己烷）提純以產(chǎn)生標題化合物。一些柱級分含有過氧化副產(chǎn)物。使用反相hplc（gilson,waterssunfire?prepc18obd?5μm19x100mm柱，0-100%mecn/含0.05%tfa的水）實現(xiàn)進一步提純以產(chǎn)生高純度標題化合物。ms(esi)m/z533.40(m+h)。
步驟7:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-基}-羰基)氨基]苯甲酸（實施例1）
將7-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（75毫克，0.141毫摩爾）和1:1tfa在dcm中的溶液在室溫下攪拌1小時。除去溶劑以提供粗產(chǎn)物。將少量粗產(chǎn)物使用反相hplc（gilson,waterssunfire?prepc18obd?5μm19x100mm柱,0-100%mecn/含0.05%tfa的水）提純以產(chǎn)生高純度標題化合物。ms(esi)m/z477.16(m+h)。1hnmr(dmso-d6)δ(ppm):9.68(s,1h),8.10(s,1h),7.78-7.95(m,6h),7.68(dd,2h),7.05(s,1h),4.40(t,1h),2.98(m,2h),2.35(m,2h)。
根據(jù)與上述那些類似的程序使用適當?shù)脑牧现苽湎铝谢衔锊⑼ㄟ^lcms表征。對于手性非外消旋化合物，通過手性sfc實現(xiàn)外消旋混合物的拆分。
實施例5-7
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例5–外消旋混合物）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例6–外消旋混合物）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例7–單一立體異構體）
步驟1:3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-c）
將3-溴-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-a）（1100毫克，2.75毫摩爾）、4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯胺（5-b）（697毫克，2.75毫摩爾）、(1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵)二氯化鈀(ii)（302毫克，0.412毫摩爾）和氟化銫（1252毫克，8.24毫摩爾）的混合物在圓底燒瓶中抽空并用n2吹掃。將這一過程重復三次。加入二氧雜環(huán)己烷（27.5毫升），并將該漿料混合物加熱至110℃1小時。在冷卻至室溫后，將該反應混合物經(jīng)硅藻土墊過濾，用etoac沖洗并將濾液在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法（40gsio2）用0-50%etoac/己烷洗脫提純以產(chǎn)生3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯。ms(esi)m/z447.3(m+h)。
步驟2:3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基-甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-d）
在室溫下將二碳酸二叔丁酯（602微升，2.59毫摩爾）添加到3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-c）（966毫克，2.161毫摩爾）、三乙胺（904微升，6.48毫摩爾）和dmap（52.8毫克，0.432毫摩爾）在dcm（21.6毫升）中的攪拌溶液中。該反應混合物在室溫下攪拌過夜。在用lcms分析時觀察到產(chǎn)物和原材料的混合物。加入另外0.50當量的二碳酸二叔丁酯。在另外3小時后，加入水。將該混合物用dcm（20.0毫升）萃取兩次，將合并的有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法（40gsio2）用0-35%etoac/己烷洗脫提純以產(chǎn)生標題化合物（ms(esi)m/z547.4(m+h)）以及顯著量的二-boc保護產(chǎn)物，3-{2-[雙(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-{[叔丁基(二甲基)-甲硅烷基]氧基}-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（ms(esi)m/z647.4(m+h)）。該產(chǎn)物混合物不經(jīng)進一步提純即用于后續(xù)步驟。
步驟3:3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基-甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（5-e）
向3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（5-d）（772毫克，1.411毫摩爾）和3-{2-[雙(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（913毫克，1.411毫摩爾）在thf（7053微升）中的混合物中加入lioh（2821微升，5.64毫摩爾）。將該反應混合物在室溫下攪拌4.5小時，然后在真空下蒸發(fā)揮發(fā)物。將殘留物用etoac稀釋，用1nhcl水溶液酸化直至實現(xiàn)ph4。將該混合物用水洗滌。將有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮以提供標題化合物。ms(esi)m/z519.5(m+h)。含有顯著量的二-boc材料的粗產(chǎn)物不經(jīng)進一步提純即直接用于下一步驟。
步驟4:4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（5-g）
向3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基-甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸（5-e）（865毫克，1.397毫摩爾）、4-氨基苯甲酸叔丁酯（5-f）（270毫克，1.397毫摩爾）和dipea（732微升，4.19毫摩爾）在dmf（9313微升）中的混合物中一次性加入hatu（531毫克，1.397毫摩爾）并將反應混合物在室溫下攪拌2小時。其隨后用水淬滅，并在真空下濃縮。將水性殘留物用etoac（40.0毫升）萃取兩次，將合并的有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法用0-70%etoac/己烷洗脫提純，以產(chǎn)生4-{[(3-{2-[雙(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)羰基]氨基}苯甲酸叔丁酯（ms(esi)m/z794.7(m+h)）和4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（ms(esi)m/z694.9(m+h)）的混合物。該產(chǎn)物混合物不經(jīng)另外提純即用于下一步驟。
步驟5:4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（5-h）
經(jīng)注射器向在thf（5.2毫升）中的413毫克含有4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基)-氧基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（5-g）和4-{[(3-{2-[雙(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)羰基]氨基}苯甲酸叔丁酯的混合物中逐滴加入tbaf的1mthf溶液（676微升，0.676毫摩爾）。在加入水以淬滅該反應之前將該反應混合物在室溫下攪拌2小時。在真空下蒸發(fā)揮發(fā)物，并將殘留物再溶解在etoac中。在用飽和nacl水溶液洗滌后，將有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法（24gsio2）用0-70%etoac/己烷洗脫提純以產(chǎn)生所需產(chǎn)物4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（ms(esi)m/z580.4(m+h)）和4-{[(3-{2-[雙(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)羰基]氨基}苯甲酸叔丁酯的混合物。該產(chǎn)物混合物不經(jīng)進一步提純即用于下一步驟。
步驟6:4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（5-i）
在室溫下經(jīng)注射器向在dcm（5.16毫升）中的351毫克含有4-(3-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯苯基)-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（5-h）和4-{[(3-{2-[雙(叔丁氧基羰基)氨基]-5-氯苯基}-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)羰基]氨基}苯甲酸叔丁酯的混合物中逐滴加入tfa（3.00毫升，38.9毫摩爾）。將該反應混合物在相同溫度下攪拌1小時，然后在真空下濃縮以提供標題化合物。ms(esi)m/z424.2(m+h)。將該粗殘留物置于高真空下過夜并且不經(jīng)進一步提純即使用。
步驟7:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（5-j）
將4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（5-i）（219毫克，0.517毫摩爾）、原甲酸三甲酯（171微升，1.55毫摩爾）和疊氮化鈉（101毫克，1.55毫摩爾）在acoh（5.17毫升）中的混合物在室溫下攪拌5小時。在真空下蒸發(fā)溶劑并向該粗產(chǎn)物中加入etoac。將有機層小心地用飽和nahco3水溶液洗滌（調節(jié)ph至6），經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。粗產(chǎn)物4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸不經(jīng)進一步提純直接用于下一步驟。ms(esi)m/z477.2(m+h)。
步驟8:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例5和實施例6）
向4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（5-l）（246毫克，0.516毫摩爾）和甲基三氧化錸(vii)（64.3毫克，0.258毫摩爾）在meoh（5.16毫升）中的混合物中加入30%過氧化氫（527微升，5.16毫摩爾）。將該反應混合物在室溫下攪拌1小時，然后加入10%nahso3水溶液以淬滅該反應。在真空下蒸發(fā)meoh。將該水性混合物用etoac（50.0毫升）萃取兩次，將有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將殘留物通過反相hplc（waterssunfirec18柱,5u粒度,19x100mm,標準10%acn/h2o至37%acn/h2o，用0.16%tfa緩沖，流速25ml/min，經(jīng)15分鐘）提純以產(chǎn)生作為4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-基}羰基)-氨基]苯甲酸的兩種單獨的外消旋混合物的實施例5（ms(esi)m/z493.3(m+h)）（lcms保留時間=0.79min）和實施例6（(ms(esi)m/z493.2(m+h))（lcms保留時間=0.77min）。沒有指定這兩種產(chǎn)物的相對構型。
步驟9:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例7）
對來自上文的更活性的外消旋混合物（實施例5）施以使用2x15cmad-h柱用30%etoh/co2（100巴，流速60ml/min）洗脫的手性sfc。分離4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸的兩種對映異構體，但只分離出一種（實施例7）。ms(esi)m/z493.3(m+h)（sfc保留時間=6.85min）。沒有指定絕對構型。
實施例8-12
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例8）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例9）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例10）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例11）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例12）
步驟1:4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-b）
將4-(3-溴-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-a）（1500毫克，3.34毫摩爾）、4-氯-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷-2-基)苯胺（1100毫克，4.34毫摩爾）、pdcl2(dppf)（366毫克，0.501毫摩爾）和氟化銫（1521毫克，10.02毫摩爾）的混合物在圓底燒瓶中在真空下抽空并用n2吹掃（該過程重復3次）。然后加入二氧雜環(huán)己烷（3.34e+04μl），并將該漿料混合物加熱至110℃1小時。在冷卻至室溫后，將該反應混合物經(jīng)硅藻土墊過濾，用etoac沖洗，將濾液在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法用0-100%etoac/己烷洗脫提純，以產(chǎn)生4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-b）。lcms:m/z496[m+h]+。
步驟2:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-c）
將4-(3-(2-氨基-5-氯苯基)-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-b）（1570毫克，3.17毫摩爾）、原甲酸三甲酯（1050微升，9.50毫摩爾）和疊氮化鈉（617毫克，9.50毫摩爾）在acoh（32毫升）中的混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下蒸發(fā)溶劑，并向該粗產(chǎn)物中加入etoac。將有機層用飽和nahco3水溶液洗滌，經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物通過硅膠色譜法用0-100%etoac/己烷洗脫提純，以產(chǎn)生4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)-苯甲酸叔丁酯（8-c）。lcms:m/z549[m+h]+。
步驟3:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例8）
向4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-5,7-二羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（8-c）（1290毫克，2.350毫摩爾）和甲基三氧化錸（293毫克，1.175毫摩爾）在meoh（24毫升）中的混合物中加入過氧化氫（2057微升，23.50毫摩爾）。將該反應混合物在室溫下攪拌3.5小時，然后加入10%nahso3水溶液以淬滅該反應。然后將合并的混合物用etoac（2x,50.0毫升）萃取，將有機層經(jīng)na2so4干燥，過濾并在真空下濃縮。將粗產(chǎn)物直接用于下一步驟。lcms:m/z565[m+h]+。將該n-氧化物產(chǎn)物溶解在dcm（7.00毫升）中并經(jīng)注射器逐滴加入2,2,2-三氟乙酸（7000微升，91毫摩爾）。將該反應物在室溫下攪拌1.5小時，并在真空下濃縮。將該殘留物通過rphplc（gilsonona19x100mm,watersxbridgec18柱,5μ粒度，線性梯度，標準5%acn/h2o至100%acn/h2o，用0.05%tfa緩沖@流速30ml/min，經(jīng)15分鐘）提純以產(chǎn)生4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸的四種立體異構體的混合物（實施例8）。lcms:m/z509[m+h]+。
通過手性sfc進一步提純（步驟1分離峰3和4–ic(3x15cm),50%meoh/co2,100bar,55ml/min；步驟2分離峰1和2–oz-h(2x25cm),60%meoh(0.1%dea)/co2,100bar,50ml/min）以下列sfc保留時間提供4種手性純異構體：（實施例9rt=3.63min，實施例10rt=3.94min，實施例11rt=8.20min，實施例12rt=14.6min）。
實施例13-14
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-氟-7-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例13）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-氟-7-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例14）
使用上文概述的用于合成實施例8的程序通過用13-a替代中間體8-a合成實施例13和14。通過反相hplc（gilsonona19x100mm,watersxbridgec18柱,5μ粒度，線性梯度，標準1%acn/h2o至100%acn/h2o，用0.05%tfa緩沖@流速30ml/min，經(jīng)15分鐘）提純提供兩種立體異構體的混合物。lcms:m/z511[m+h]+。通過手性sfc進一步提純（as-h(2x15cm),35%meoh/co2,100bar,60ml/min）以下列sfc保留時間提供4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5-氟-7-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸的兩種單獨的立體異構體：（rt=1.93min（實施例13）,rt=2.68min（實施例14））。
實施例15-18
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例15）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例16）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例17）
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例18）
使用上述用于實施例8的程序通過用15-a替代中間體8-a合成實施例15-18。使用反相hplc（gilson,19x100mm,watersxbridgec18柱,5μ粒度,線性梯度，標準5%acn/h2o至100%acn/h2o，用0.05%tfa緩沖@流速30ml/min，經(jīng)15分鐘）產(chǎn)生作為4種立體異構體的混合物的15-d。lcms:m/z513[m+h]+。通過手性sfc進一步提純（ic(4.6x250mm),50%2:1meoh:mecn/co2,100bar,2.1ml/min）以下列sfc保留時間提供4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-5,7-二氟-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸的四種單獨的立體異構體：（實施例15rt=2.78min,實施例16rt=3.24min,實施例17rt=4.43min,實施例18rt4=8.34min）。
實施例19
4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-7-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸
步驟1:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（19-b）
在0℃下將4-氨基苯甲酸叔丁酯（0.101克，0.524毫摩爾）在dmf（2毫升）中的溶液添加到3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酸（19-a）（0.125克，0.349毫摩爾）、hunig堿（0.061毫升，0.349毫摩爾）和hatu（0.166克，0.437毫摩爾）在dmf（2毫升）中的溶液中，接著在室溫下攪拌1小時。除去dmf，將該殘留物在硅膠柱上用0-75%etoac/己烷提純以產(chǎn)生4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯。lcms:m/z533.24[m+h]+。
步驟2:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（19-c）
將4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（19-b）（110毫克，0.206毫摩爾）在tfa（2.0毫升，26.0毫摩爾）和ch2cl2（2毫升）中的溶液在室溫下攪拌1小時。除去溶劑并將殘留物在真空中干燥以產(chǎn)生粗4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（19-c），其不經(jīng)進一步提純即用于下一步驟。lcms:m/z477.13[m+h]+。
步驟3:4-[({3-[5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基]-7-羥基-1-氧負離子基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]-吡啶-7-基}羰基)氨基]苯甲酸（實施例19）
將4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-羥基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸（19-c）（95毫克，0.2毫摩爾）和過乙酸（0.166毫升，1.000毫摩爾）在乙酸（2毫升）中的溶液在室溫下攪拌過夜。除去溶劑，將殘留物通過制備型反相hplc（c-18）用乙腈/水+0.1%tfa洗脫提純，以產(chǎn)生標題化合物。lcms:m/z493.20[m+h]+。
實施例20
3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(4-((甲氧基羰基)氨基)苯甲酰氨基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶1-氧化物
步驟1:(4-((3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)-氨基甲酸甲酯（20-a）
將3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-胺（121毫克，0.568毫摩爾）、4-((甲氧基羰基)氨基)苯甲酸（133毫克，0.681毫摩爾）和hatu（324毫克，0.852毫摩爾）懸浮在dmf（5毫升）中并加入diea（0.298毫升，1.704毫摩爾）。將所得混合物在室溫下攪拌18小時。將該反應混合物用etoac稀釋，用飽和licl水溶液、水和鹽水洗滌。將有機層經(jīng)mgso4干燥，過濾并在真空中濃縮。將殘留物懸浮在dcm中，通過過濾分離固體沉淀物以產(chǎn)生標題化合物（20-a）。將該dcm濾液通過基于硅膠的快速色譜法進一步提純（梯度洗脫；0%-50%etoac/己烷作為洗脫劑）以提供額外量的標題化合物（20-a）。ms(esi)m/z=390[m+h]。
步驟2:(4-((3-(2-氨基-5-氯苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸甲酯（20-b）
在20毫升微波管中將(4-((3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸甲酯（155毫克，0.397毫摩爾）、2-氨基-5-氯苯基硼酸、頻哪醇酯（111毫克，0.437毫摩爾）、1,1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(ii)二氯甲烷配合物（58毫克，0.079毫摩爾）和氟化銫（181毫克，1.192毫摩爾）懸浮在1,4-二氧雜環(huán)己烷（7毫升）中。將該瓶壓折（crimped），將該反應混合物用n2鼓泡（sparge），接著在油浴中在110℃下加熱1小時。將該混合物冷卻至室溫，用etoac稀釋，將所得混合物用水和鹽水洗滌。分離層，將有機物經(jīng)mgso4干燥，過濾并在真空中濃縮。將殘留物通過基于硅膠的快速色譜法提純（梯度洗脫；0%-50%etoac/己烷作為洗脫劑）以提供標題化合物（20-b）。ms(esi)m/z=437[m+h]。
步驟3:(4-((3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并-[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸甲酯
將(4-((3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-基)氨基甲酰基)苯基)氨基甲酸甲酯（62毫克，0.142毫摩爾）、疊氮化鈉（46毫克，0.710毫摩爾）和原甲酸三甲酯（78微升，0.710毫摩爾）懸浮在乙酸（3毫升）中并將該混合物在室溫下攪拌18小時。將該反應混合物分配在etoac和水之間，分離層。將有機物用鹽水洗滌，經(jīng)mgso4干燥，過濾并在真空中濃縮，共蒸發(fā)w/甲苯。將該粗殘留物通過基于硅膠的快速色譜法提純（逐步梯度洗脫；2.2%-5%meoh/dcm作為洗脫劑）以提供標題化合物（20-c）。ms(esi)m/z=490[m+h]。
步驟4:3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(4-((甲氧基羰基)氨基)苯甲酰氨基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（實施例20）
根據(jù)之前在實施例1，步驟6中描述的用于制備化合物1-i的程序，用化合物20-c代替化合物1-h，制備實施例20。ms(esi)m/z=506[m+h]。
實施例21和22
7-((4-羧基苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（實施例21和22）
步驟1:3-溴-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（21-a）
將3-溴-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（2.5克，9.3毫摩爾）溶解在thf（30毫升）中并冷卻至-78℃。加入雙(三甲基甲硅烷基)氨基鋰（11毫升，11毫摩爾）。將該混合物攪拌1.5小時。緩慢加入(碘甲基)環(huán)丙烷（1.2毫升，13毫摩爾）。將該混合物在-78℃下攪拌1小時，然后在室溫下攪拌過夜。通過添加飽和nh4cl水溶液（7毫升）淬滅該反應。將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，并用鹽水洗滌。將有機層經(jīng)無水硫酸鈉干燥。在將其過濾和濃縮后，將粗產(chǎn)物通過基于80g預填充硅膠柱的柱色譜法用梯度0-30%etoac/異己烷洗脫提純以產(chǎn)生產(chǎn)物(21-a)。ms(esi)m/z=325.9[m+h]。
步驟2:3-溴-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸鋰鹽（21-b）將meoh（15毫升）中的3-溴-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸乙酯（21-a，1.5克，4.63毫摩爾）與lioh（6.94毫升，6.94毫摩爾）混合并加熱至50℃30分鐘。將該混合物濃縮至干，然后在真空爐中在50℃下進一步干燥3天。該產(chǎn)物不經(jīng)進一步處理直接用于下一步驟。ms(esi)m/z=297.8[m+h]。
步驟3:4-(3-溴-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（21-c）
將dmf（1.50毫升）中的3-溴-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酸鋰（21-b，0.3克，1毫摩爾）與hatu（0.45克，1.2毫摩爾）混合。將該混合物加熱至45℃。加入4-氨基苯甲酸叔丁酯（0.23克，1.2毫摩爾），然后將該混合物在45℃下加熱過夜。在將其冷卻至室溫后，在攪拌的同時將該混合物倒入40毫升水中。將該產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。分離有機層并用鹽水洗滌。在將其經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，將該溶液濃縮。將粗產(chǎn)物通過基于50g預填充硅膠柱的柱色譜法用梯度0~60%etoac/異己烷洗脫提純以產(chǎn)生產(chǎn)物(21-c)。ms(esi)m/z=472.9[m+h]。
步驟4:4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（21-d）
在微波反應瓶中將4-(3-溴-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（550毫克，1.17毫摩爾）與4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼雜環(huán)戊烷)（300毫克，1.17毫摩爾）、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(ii)（171毫克，0.23毫摩爾）和乙酸鉀（340毫克，3.5毫摩爾）混合。然后將該瓶加蓋。通過真空除去空氣，并用氮氣回填（x3）。通過注射器引入1,4-二氧雜環(huán)己烷（5.5毫升）。然后將該混合物加熱至110℃45分鐘。在將其冷卻至室溫后，加入1-(4-氯-2-碘苯基)-1h-四唑（0.358克，1.167毫摩爾）和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(ii)（0.085克，0.117毫摩爾）。將該反應瓶加蓋。通過真空除去空氣，并用氮氣回填（x3）。用注射器引入k2co3溶液（1m，3.50毫升，3.50毫摩爾）。然后將該混合物加熱至80℃2小時。將該混合物用乙酸乙酯稀釋并過濾。分離有機層。在將其經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，將該溶液濃縮。將粗產(chǎn)物通過基于100g預填充硅膠柱的柱色譜法用梯度10~100%etoac/異己烷洗脫提純以產(chǎn)生產(chǎn)物(21-d)。ms(esi)m/z=571.1[m+h]。
步驟5:7-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（21-e）
將dcm（3毫升）中的4-(3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶-7-甲酰氨基)苯甲酸叔丁酯（300毫克，0.53毫摩爾）與mcpba（168毫克，0.68毫摩爾）混合，然后在室溫下攪拌15小時。將該混合物濃縮并通過基于100g預填充硅膠柱的柱色譜法用0~80%梯度etoac/異己烷洗脫提純以產(chǎn)生產(chǎn)物(21-e)。
ms(esi)m/z=587.1[m+h]。
步驟6:7-((4-羧基苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（實施例21和22）
將dcm（2毫升）中的7-((4-(叔丁氧基羰基)苯基)氨基甲酰基)-3-(5-氯-2-(1h-四唑-1-基)苯基)-7-(環(huán)丙基甲基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶1-氧化物（21-e，290毫克，0.49毫摩爾）與tfa（2.0毫升）混合，然后在室溫下攪拌2小時。加入甲苯（15毫升）。將該混合物通過旋轉蒸發(fā)器濃縮。將粗產(chǎn)物通過基于50g預填充硅膠柱的柱色譜法用0~8%梯度ch2cl2/meoh洗脫提純以產(chǎn)生產(chǎn)物。通過基于ia柱的手性sfc色譜法用70%2:1meoh:mecn/co2洗脫分離該外消旋產(chǎn)物以產(chǎn)生兩種對映異構體。實施例21是快速洗脫對映異構體，ms(esi)m/z=530.8[m+h]，且實施例22是緩慢洗脫對映異構體，ms(esi)m/z=530.8[m+h]。
因子xia測定
本發(fā)明化合物作為凝血因子xia抑制劑的有效性可以使用相關的純化絲氨酸蛋白酶和合適的合成底物來測定。在不存在和存在本發(fā)明化合物的兩種情況下測量相關絲氨酸蛋白酶對發(fā)色或熒光底物的水解速率。測定在室溫或37℃下進行。底物的水解導致氨基三氟甲基香豆素(afc)的釋放，通過在405nm激發(fā)下測量在510nm處的發(fā)射增加，通過熒光分光光度法監(jiān)測。在抑制劑存在下熒光變化速率的降低指示酶抑制。這樣的方法是本領域技術人員已知的。該測定的結果表示為抑制常數(shù)ki。
在ph7.4的含有150mmnacl、5mmcacl2和0.1%peg8000(聚乙二醇；jtbaker或fisherscientific)的50mmhepes緩沖液中進行因子xia測定。使用終濃度為40pm的純化人因子xia(sekisuidiagnostics)和濃度為100μm的合成底物z-gly-pro-arg-afc，tfa鹽(sigma#c0980)進行測定。
通過將底物儲液稀釋至含有酶或用抑制劑平衡的酶的溶液中至少十倍至終濃度≤0.1km進行活性測定。在對照實驗中測定在酶和抑制劑之間實現(xiàn)平衡所需的時間。測量在不存在抑制劑(vo)或存在抑制劑(vi)時產(chǎn)物形成的初速度。假定為競爭性抑制，并且相比km/[s]、[i]/e和[i]/e(其中[s]、[i]和e分別代表底物、抑制劑和酶的總濃度)，個體可忽略不計，抑制劑從酶解離的平衡常數(shù)(ki)可以從vo/vi對[i]的依賴性獲得，如下式所示。
vo/vi=1+[i]/ki
該測定顯示的活性表明本發(fā)明化合物可以治療上用于治療或預防患有不穩(wěn)定型心絞痛、急性冠狀動脈綜合征、難治性心絞痛、心肌梗死、短暫性腦缺血發(fā)作、心房顫動、中風例如血栓性中風或栓塞性中風、靜脈血栓形成、冠狀動脈和腦動脈血栓形成、腦和肺栓塞、動脈粥樣硬化、深靜脈血栓形成、彌散性血管內凝血、以及再通血管的再閉塞或再狹窄的患者的各種心血管和/或腦血管血栓栓塞性病狀。
因子xia抑制
激肽釋放酶測定
本發(fā)明化合物作為激肽釋放酶抑制劑的有效性可以使用相關的純化絲氨酸蛋白酶和合適的合成底物來測定。在不存在和存在本發(fā)明化合物的兩種情況下測量相關絲氨酸蛋白酶對發(fā)色或熒光底物的水解速率。測定在室溫或37℃下進行。底物的水解導致氨基三氟甲基香豆素(afc)的釋放，通過在405nm激發(fā)下測量在510nm處的發(fā)射增加，通過熒光分光光度法監(jiān)測。在抑制劑存在下熒光變化速率的降低指示酶抑制。這樣的方法是本領域技術人員已知的。該測定的結果表示為抑制常數(shù)ki。
在ph7.4的含有150mmnacl、5mmcacl2和0.1%peg8000(聚乙二醇；fisherscientific)的50mmhepes緩沖液中進行激肽釋放酶測定。使用終濃度為0.5nm的純化人血漿激肽釋放酶(enzymeresearchlaboratories)和濃度為100mm的合成底物乙酰基-k-p-r-afc(sigma#c6608)進行測定。
通過將底物儲液稀釋至含有酶或用抑制劑平衡的酶的溶液中至少十倍至終濃度≤0.2km進行活性測定。在對照實驗中測定在酶和抑制劑之間實現(xiàn)平衡所需的時間。在線性進展曲線條件下進行反應，并在405ex/510emnm下測量熒光增加。將值轉化為對照反應的抑制百分比(減去100%抑制值后)。ic50通過來自四參數(shù)對數(shù)曲線擬合的拐點確定。使用chengprusoff方程，ki=ic50/(1+([s]/km))計算ki。
該測定顯示的活性表明本發(fā)明化合物可以治療上用于治療或預防患有不穩(wěn)定型心絞痛、急性冠狀動脈綜合征、難治性心絞痛、心肌梗死、短暫性腦缺血發(fā)作、心房顫動、中風例如血栓性中風或栓塞性中風、靜脈血栓形成、冠狀動脈和腦動脈血栓形成、腦和肺栓塞、動脈粥樣硬化、深靜脈血栓形成、彌散性血管內凝血、以及再通血管的再閉塞或再狹窄的患者的各種心血管和/或腦血管血栓栓塞性病狀。
激肽釋放酶抑制