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一種用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白的制作方法

文檔序號(hào):11095926閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白包括測(cè)試序列、結(jié)合序列和連接臂序列;

所述測(cè)試序列為MdmX序列或包含MdmX序列中的p53結(jié)合結(jié)構(gòu)域的MdmX片段;

所述結(jié)合序列為保持與MdmX有結(jié)合活性的包含p53序列中的MdmX結(jié)合結(jié)構(gòu)域的p53片段的突變體;

所述連接臂序列為一個(gè)肽段,所述連接臂的上下游分別與所述測(cè)試序列和所述結(jié)合序列之一連接;所述連接臂的氨基酸序列不參與所述融合蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成或維持;所述連接臂的長(zhǎng)度和柔性足以使所述測(cè)試序列的空間結(jié)構(gòu)的任一表面部分與所述結(jié)合序列的空間結(jié)構(gòu)的任一表面部分在空間上有機(jī)會(huì)相接觸。

2.如權(quán)利要求1所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白的上游或下游具有用于蛋白分離和/或純化的標(biāo)簽序列。

3.如權(quán)利要求1或2所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白,該融合蛋白用式p53pF19A-XX-N-MdmX表示,其特征在于,

p53pF19A代表所述結(jié)合序列,具體為:SQETASDLWKLLPEN。

XX代表所述連接臂序列SEQ ID NO.2,具體為:GSGSSENLYFQ;

N-MdmX代表所述測(cè)試序列SEQ ID NO.3,具體為:GSQINQVRPKLPLLKILHAAGAQGEMFTVKEVMHYLGQYIMVKQLYDQQEQHMVYCGGDLLGELLGRQSFSVKDPSPLYDMLRKNLVTLAT。

4.如權(quán)利要求1或2所述的用于篩選MdmX抑制劑或測(cè)試MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白,該融合蛋白用式p53pL26A-XX-N-MdmX表示,其特征在于,

p53pL26A代表所述結(jié)合序列,具體為:SQETFSDLWKLAPEN。

XX代表所述連接臂序列SEQ ID NO.2,具體為:GSGSSENLYFQ;

N-MdmX代表所述測(cè)試序列SEQ ID NO.3,具體為:GSQINQVRPKLPLLKILHAAGAQGEMFTVKEVMHYLGQYIMVKQLYDQQEQHMVYCGGDLLGELLGRQSFSVKDPSPLYDMLRKNLVTLAT。

5.一種核苷酸序列,其特征在于,所述核苷酸序列能夠表達(dá)如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白。

6.如權(quán)利要求5所述的核苷酸序列,其特征在于,所述核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

7.如權(quán)利要求5所述的核苷酸序列,其特征在于,所述核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

8.一種用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白的表達(dá)載體,其特征在于,所述表達(dá)載體能夠借助宿主表達(dá)如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱Mdmx抑制劑的抑制活性的融合蛋白。

9.如權(quán)利要求8所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白的表達(dá)載體,其特征在于,所述載體是pET-28a載體,所述宿主是大腸桿菌BL21(DE3)。

10.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用于篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的融合蛋白在篩選弱MdmX抑制劑或測(cè)試弱MdmX抑制劑的抑制活性的用途,其特征在于,所述弱MdmX抑制劑是能夠與p53競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合MdmX的抑制劑。

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