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一種甲基營養型芽孢桿菌菌劑及其制備方法與流程

文檔序號:12395764閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種甲基營養型芽孢桿菌菌劑,其特征在于,包括質量份的原料:草炭10~14份、農作物秸稈粉40~56份、礦物質13~20份,以草炭、農作物秸稈粉和礦物質的質量總量計,該甲基營養型芽孢桿菌菌劑還包括250-450mL/kg的甲基營養型芽孢桿菌發酵液。

2.根據權利要求1所述的甲基營養型芽孢桿菌菌劑,其特征在于,所述的甲基營養型芽孢桿菌發酵液含有效活菌數大于或等于5.5×108/ml。

3.根據權利要求1所述的甲基營養型芽孢桿菌菌劑,其特征在于,所述甲基營養型芽孢桿菌發酵液通過以下步驟制備得到:

1.1)將保存在-4℃環境下的甲基營養型芽孢桿菌菌株接種至牛肉蛋白胨平板上30℃培養48h;挑取單菌落接種至牛肉膏蛋白胨液體培養基中,30℃培養24h后的液體即為所需接種液;

1.2)將步驟1.1)中的接種液接種于裝有種子培養基的300L種子罐中,接菌量為10%,接菌后進行發酵;初始pH值6.9-7.1、溫度28-35℃、轉速180-220r/min;

1.3)當種子罐發酵9-10小時,菌體生長處于對數期,此時將種子罐中的發酵液加入到裝有發酵培養基的3000L發酵罐中繼續發酵,控制條件同種子罐,培養28-30小時,當菌體芽孢形成90-95%時,結束發酵,即得甲基營養型芽孢桿菌發酵液;

其中,所述牛肉膏蛋白胨培養基:牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g,瓊脂15-20g,pH 7.2-7.6;

所述種子培養基:葡萄糖10g/L、蛋白胨2g/L、MgSO4 0.5g/L、酵母膏2g/L、牛肉膏2g/L;

所述發酵培養基:玉米粉30.0g/L,豆餅粉20.0g/L,MgSO40.2g/L,NaH2PO4 0.5g/L,CaCl2.2H2O 0.1g/L,K2HPO4 0.5g/L,pH 7.0;

各培養基滅菌條件為:0.1-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘。

4.根據權利要求1所述的甲基營養型芽孢桿菌菌劑,其特征在于,所述的農作物秸稈粉為木薯莖稈、甘蔗葉、菠蘿莖葉、玉米秸稈、香蕉葉、荔枝枝葉、龍眼枝葉中的一種或幾種的混合物經粉碎,并過80目篩后所得的秸稈粉。

5.根據權利要求1所述的甲基營養型芽孢桿菌菌劑,其特征在于,所述礦物質為沸石粉、蛭石粉、硅藻土、白炭黑、輕質碳酸鈣中的一種或幾種的混合物。

6.一種甲基營養型芽孢桿菌菌劑的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)制備甲基營養型芽孢桿菌發酵液;

2)稱量:按照質量百分比稱量以下組分:草炭10~14份、農作物秸稈粉40~56份、礦物質13~20份,以草炭、農作物秸稈粉和礦物質的質量總量計,該甲基營養型芽孢桿菌菌劑還包括250-450mL/kg的甲基營養型芽孢桿菌發酵液;

3)將稱量好的草炭、甲基營養型芽孢桿菌發酵液倒入混拌機里進行吸附,混合均勻后,往混拌機中逐步添加農作物秸稈粉進行稀釋混勻,最后加入礦物質,攪拌均勻后將物料進行粉碎,過100目篩,調整物料水分含量及pH值,即得甲基營養型芽孢桿菌菌劑。

7.根據權利要求6所述的甲基營養型芽孢桿菌菌劑的制備方法,其特征在于,所述的制備甲基營養型芽孢桿菌發酵液具體為:

1.1)將保存在-4℃環境下的甲基營養型芽孢桿菌菌株接種至牛肉蛋白胨平板上30℃培養48h;挑取單菌落接種至牛肉膏蛋白胨液體培養基中,30℃培養24h后的液體即為所需接種液;

1.2)將步驟1.1)中的接種液接種于裝有種子培養基的300L種子罐中,接菌量為10%,接菌后進行發酵;初始pH值6.9-7.1、溫度28-35℃、轉速180-220r/min;

1.3)當種子罐發酵9-10小時,菌體生長處于對數期,此時將種子罐中的發酵液加入到裝有發酵培養基的3000L發酵罐中繼續發酵,控制條件同種子罐,培養28-30小時,當菌體芽孢形成90-95%時,結束發酵,即得甲基營養型芽孢桿菌發酵液。

8.根據權利要求7所述的甲基營養型芽孢桿菌菌劑的制備方法,其特征在于,所述牛肉膏蛋白胨培養基:牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g,瓊脂15-20g,pH 7.2-7.6;所述種子培養基:葡萄糖10g/L、蛋白胨2g/L、MgSO4 0.5g/L、酵母膏2g/L、牛肉膏2g/L;所述發酵培養基:玉米粉30.0g/L,豆餅粉20.0g/L,MgSO4 0.2g/L,NaH2PO4 0.5g/L,CaCl2.2H2O 0.1g/L,K2HPO40.5g/L,pH 7.0;各培養基滅菌條件為:0.1-0.15MPa,121℃滅菌30分鐘。

9.根據權利要求6所述的甲基營養型芽孢桿菌菌劑的制備方法,其特征在于,所述甲基營養型芽孢桿菌菌劑的水分含量少于或等于29%,pH為6.9~7.5。

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